人参皂苷糖基水解酶论文_林福建

导读:本文包含了人参皂苷糖基水解酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:人参,皂苷,水解酶,糖苷酶,菌株,阿拉伯,诱导。

人参皂苷糖基水解酶论文文献综述

林福建^[1]（2015）在《人参皂苷Rb_1转化菌株的筛选鉴定和糖基水解酶性质分析》一文中研究指出人参(Panax ginseng C.A.Mey)隶属五加科类人参属,是中国中药史上名贵的药材,药效主要有活血消疲、滋补养生,延长寿命等功效。人参皂苷为人参中主要生物药理活性成分,多年来,关于如何提高人参皂苷含量成为中药现代化研究的热点。人参皂苷的生物转化主要是利用微生物和酶对人参二醇型皂苷的C3和C20位、人参叁醇型皂苷的C6和C20位的糖基结构进行相应的修饰,使得含量相对较高的人参皂苷糖基发生水解反应定向转化为稀有人参皂苷或苷元。生物转化人参皂苷生产稀有人参皂苷具有成本低、副产物少、应用广泛的优势。本论文首先从人参种植土壤中筛选得到一株可以专一性转化人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rd的曲霉属Aspergillus sp.LFJ1403。经18S rDNA及进化树分析该真菌为花斑曲霉(Aspergillus versicolor)。对比不同的转化体系的Rb1转化率发现该菌在固体培养产孢阶段可以外分泌大量的人参皂苷转化水解酶,因此制备而成的用于转化实验的孢子悬液转化体系具有简单易制备及高转化率的优点。确定了适宜的转化条件为:总皂苷添加量1.25 mg/m L,转化温度37℃,pH5.0,转化时间48 h。在此条件下人参皂苷Rd的产量为1.20 mg/mL,转化率为96%(w/w)。采用Q-Sepharose柱和人参皂苷Rb1底物转化实验分离鉴定出催化该转化反应的酶为人参皂苷Rb1转化酶,结果显示,该转化酶有很强的β-糖基水解酶活性及人参皂苷Rb1转化能力。通过SDS-PAGE进一步确定该酶分子量为97KDa。为了得到可以作为人参皂苷Rb1最适来源的植物组织材料人参发状根,在筛选得到人参皂苷Rb1转化菌株花斑曲霉(Aspergillus versicolor)的基础上又进行了人参发根诱导的可行性方法研究。分别用发根农杆菌A4、工程菌LBA4404-rolBC对人参不同部位进行了侵染诱导,在叁年生幼根上成功诱导出了人参发状根,发状根还有待于进一步扩大培养用于转化菌株的底物来源。(本文来源于《天津大学》期刊2015-05-01）

孙晓雨^[2]（2014）在《高产人参皂苷糖基水解酶菌株的筛选、发酵及初步纯化工艺研究》一文中研究指出从人参根内分离获得的两株真菌(CGMCC No.4315、CGMCC No.4316)均具有将人参二醇类皂苷Rb1专一转化生成人参皂苷Rd的活性，但二者发酵转化效率和产酶能力并未确定。本文为了寻找高活性、高产率、对人参皂苷特定糖基具有高度水解能力的菌株，进行了人参皂苷糖基水解酶高产菌株定向筛选、最佳发酵工艺探究、酶及转化产物初步分离纯化、以及人参叶粉末中人参皂苷分离提纯和定性测量的系统性研究，证明了微生物通过发酵产酶转化低活性人参皂苷为高活性稀有皂苷的可能性。通过琼脂块结合TLC斑点比色定性初筛，液体发酵与HPLC联合定量复筛，建立产物准确、快速的分析方法，以最高产酶能力筛选出CGMCC No.4316菌为产人参皂苷糖基酶发酵和纯化研究的最优菌株。采用TLC酶活测定法，在单因子试验基础上，应用响应面中心组合法则，以人参皂苷糖基酶酶活力为响应值，建立3D及等高曲线数学模型，利用二次多项回归拟合方程对培养基组分各影响因子及关键因素进行发酵优化。结果显示，以麦麸皮20.47g/L为碳源，蛋白胨9.7g/L为氮源，初始pH6.0，瓶装量45mL/250mL，摇瓶转数180r/min，投料量10.00%，30℃发酵72h，其酶活力达到92.78U/mL。在发酵液中酶量达到最大值后，利用硫酸铵和乙醇分级沉淀法对发酵产生的关键酶进行初步分离纯化，获得了以硫酸铵为首选方法的盐析纯化方法。通过萃取联合硅胶层析对转化产物进行分离纯化，Rd被完全分离，转化过程彻底，获得了纯度相对较高的单体化合物。此外，本文利用乙醇加热回流提取辅助大孔吸附树脂纯化技术，对人参叶粉末制品中人参皂苷进行分离纯化研究，并建立了皂苷含量的HPLC测定方法。(本文来源于《辽宁师范大学》期刊2014-03-01）

张春枝^[3]（2002）在《人参皂苷糖基水解酶的研究》一文中研究指出本文以专一水解人参皂苷特定糖基为目的，进行了人参皂苷糖基水解酶的分离纯化、性质研究、以及人参皂苷Rg3和Rc的定向酶解反应，证明了酶法定向改造人参皂苷结构的可能性。采用缓冲液抽提、硫铵沉淀、离子交换层析法从人参根中分离纯化了两种人参皂苷糖基水解酶——人参皂苷-β-葡萄糖苷酶和人参皂苷-α-阿拉伯糖苷酶。人参皂苷-β-葡萄糖苷酶被纯化了16倍，收率为14.4％，人参皂苷-α-阿拉伯糖苷酶被纯化了18.5倍，收率为4.6％。PAGE检测纯化后的酶为单一谱带。人参皂苷-α-葡萄糖苷酶能水解人参皂苷Rg3生成人参皂苷Rh_2，最适作用温度为55-60℃，最适pH为5.0，Ca~(++)对该酶有激活作用，Cu~(++)有抑制作用。该酶在60℃以下，pH4.0-7.0稳定，SDS-PAGE测得分子量为59kDa。此酶N-端氨基酸序列为SLDANYVPKYVTLPL，与已知序列的β-葡萄糖苷酶无同源性，人参皂苷-β-葡萄糖苷酶在水解特性上也不同于传统的β-葡萄糖苷酶(EC3．2．1．21)。本文还建立了人参皂苷-β-葡萄糖苷酶催化Rg3反应的米氏方程。人参皂苷-α-阿拉伯糖苷酶能水解人参皂苷Rc生成人参皂苷Rd，最适作用温度为50℃，最适pH为5.0，Cu~(++)对酶有抑制作用。该酶在60℃以下，pH4.0-6.0稳定，SDS-PAGE测得分子量为86kDa。人参皂苷糖基水解酶在底物浓度10mg／ml，pH5.0，55℃的条件下水解人参皂苷Rg3，反应24h，Rg3的转化率可达到60％。经饱和正丁醇萃取，硅胶柱分离，酶解产物Rh_2纯度可达90％，得率为32％。人参皂苷-β-葡萄糖苷酶能水解20(S)-Rg3和20(R)-Rg3分别生成20(S)-Rh_2和20(R)-Rh_2，水解速度大体相同。核磁共振(~1HNMR、~(13)CNMR)和质谱(MS)检测结果显示，酶解20(S)-Rg3所得产物为20(S)-Rh_2，系统名称为3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-达玛-24-烯-3β，12β，20(S)-叁醇；酶解20(R)-Rg3所得产物为20(R)-Rh_2，系统名称为3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-达玛-24-烯-3β，12β，20(R)-叁醇，分子式为C_(36)H_(62)O_8，分子量为622。人参皂苷糖基水解酶在底物浓度30mg／ml，pH5.0，50℃的条件下水解人参皂苷Rc，反应24h，Rc的转化率可达到60％。经饱和正丁醇萃取，硅胶柱分离，酶解产物Rd纯度可达90％，得率为34％。核磁共振(~1HNMR、~(13)CNMR)和质谱(MS)检测结果表明，酶解产物为20(S)-人参皂苷Rd，系统名称为3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基)-20-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)-达玛-24- 摘要烯与p，126，20o卜叁醇，分子式为 C48H82Ol以分子量为 946。本文在证明酶法定向转化人参皂着制备稀有皂苦可行性的同时，为深入研究糖着水解酶尤其是皂苦糖基水解酶奠定了一定的实验基础。(本文来源于《大连理工大学》期刊2002-06-01）

人参皂苷糖基水解酶论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

从人参根内分离获得的两株真菌(CGMCC No.4315、CGMCC No.4316)均具有将人参二醇类皂苷Rb1专一转化生成人参皂苷Rd的活性，但二者发酵转化效率和产酶能力并未确定。本文为了寻找高活性、高产率、对人参皂苷特定糖基具有高度水解能力的菌株，进行了人参皂苷糖基水解酶高产菌株定向筛选、最佳发酵工艺探究、酶及转化产物初步分离纯化、以及人参叶粉末中人参皂苷分离提纯和定性测量的系统性研究，证明了微生物通过发酵产酶转化低活性人参皂苷为高活性稀有皂苷的可能性。通过琼脂块结合TLC斑点比色定性初筛，液体发酵与HPLC联合定量复筛，建立产物准确、快速的分析方法，以最高产酶能力筛选出CGMCC No.4316菌为产人参皂苷糖基酶发酵和纯化研究的最优菌株。采用TLC酶活测定法，在单因子试验基础上，应用响应面中心组合法则，以人参皂苷糖基酶酶活力为响应值，建立3D及等高曲线数学模型，利用二次多项回归拟合方程对培养基组分各影响因子及关键因素进行发酵优化。结果显示，以麦麸皮20.47g/L为碳源，蛋白胨9.7g/L为氮源，初始pH6.0，瓶装量45mL/250mL，摇瓶转数180r/min，投料量10.00%，30℃发酵72h，其酶活力达到92.78U/mL。在发酵液中酶量达到最大值后，利用硫酸铵和乙醇分级沉淀法对发酵产生的关键酶进行初步分离纯化，获得了以硫酸铵为首选方法的盐析纯化方法。通过萃取联合硅胶层析对转化产物进行分离纯化，Rd被完全分离，转化过程彻底，获得了纯度相对较高的单体化合物。此外，本文利用乙醇加热回流提取辅助大孔吸附树脂纯化技术，对人参叶粉末制品中人参皂苷进行分离纯化研究，并建立了皂苷含量的HPLC测定方法。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。