猪P58IPK蛋白多克隆抗体的制备

论文摘要

P58IPK（58 kD inhibitor of PKR）作为宿主细胞分子伴侣蛋白,在调节机体抗病毒反应和免疫应答方面发挥着重要作用。本研究拟克隆猪（Sus scrofa） P58IPK基因CDS序列并构建其原核表达载体,纯化P58IPK蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,以期为后续研究猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）与宿主之间的互作关系提供基础材料。根据猪P58IPK全基因序列（GenBank No. HQ287801.1）设计引物,以反转录PCR （reverse transcription PCR, RT-PCR）方法扩增P58IPK基因CDS序列（去除信号肽序列）,经NdeⅠ/XbaⅠ双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1;将其转化Arctic-Express TM大肠杆菌（Escherichia coli）进行诱导表达;表达产物经变性、复性及His-Band Ni+层析柱亲和纯化,将纯化产物HisP58IPK重组蛋白作为抗原免疫兔子（Oryctolagus cuniculus）制备多克隆抗体。抗体纯化后,分别利用间接ELISA和Western blot方法对其效价和特异性进行检测。结果显示,克隆所得的猪P58IPK基因CDS序列长度为1 425 bp,表达产物His-P58IPK重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为54.44 kD;由此蛋白制备的多抗效价在1∶512 000以上,能够特异性识别目标蛋白（包括重组蛋白His-P58IPK和猪P58IPK蛋白）。本研究成功克隆了猪P58IPK多克隆抗体,可为深入研究猪P58IPK蛋白功能和PCV2病毒与宿主之间的互作机制提供基础资料。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 卓严玲,吕其壮,邓家华,梁小梅,梁小妹,覃婷,张柱青

关键词: 猪蛋白,原核表达与纯化,多克隆抗体

来源: 农业生物技术学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 玉林师范学院生物与制药学院,广西农产资源化学与生物技术重点实验室

基金: 国家自然科学基金(No.31860708),广西自然科学基金(No.2017GXNSFBA198025)

分类号: S828;Q78

页码: 2083-2090

总页数: 8

文件大小: 1003K

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