MEK抑制剂PD0325901显著提高猪胎儿成纤维细胞ssODN介导的HDR效率

论文摘要

基因组DNA发生双链断裂（double strand break, DSB）后主要通过同源定向修复（homologous-directed repair, HDR）和非同源末端连接（nonhomologous end joining, NHEJ）两种途径进行修复,其中单链寡聚核苷酸（single-stranded oligodeoxyribonucleotide, ssODN）介导的同源定向修复是动物基因组常用的基因组定点修饰技术,具有较大的科研和应用价值。为提高猪基因组ssODN介导HDR效率,本研究以猪胎儿成纤维细胞（porcine fetal fibroblasts, PFFs）为研究对象,利用丝裂原活化的细胞外信号调节激酶（mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase, MEK）抑制剂PD0325901培养细胞,研究其对HDR效率的影响及作用分子机理。结果显示,PD0325901能显著提高PFFs的G2期和S期细胞群百分比,减少G1期细胞群比率,促进HDR修复因子的表达。在最适浓度250 nmol/L时,PD0325901使ssODN介导的GFP报告载体的修复效率提高了58.8%;同时使PFFs基因组位点DMD和ROSA26定点修饰效率分别提高了48.16%和17.64%。本研究表明,MEK抑制剂PD0325901能显著提高猪基因组ssODN介导的同源定向修复效率,为高效制备定点基因修饰动物模型提供了新思路。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 欧浩,李国玲,王豪强,黄广燕,蔡更元,李紫聪,吴珍芳,张献伟

关键词: 抑制剂,同源定向修复,基因编辑

来源: 遗传 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心,温氏食品集团股份有限公司

基金: 国家自然科学基金项目(编号:31772555),国家转基因重大专项(编号:2016ZX08006002)资助~~

分类号: Q78;R-332

DOI: 10.16288/j.yczz.18-294

页码: 327-336

总页数: 10

文件大小: 1003K

下载量: 141

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