导读:本文包含了人成熟肽基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:蛋白质谷氨酰胺酶,原核表达,多克隆抗体,免疫学检测
人成熟肽基因论文文献综述
田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠[1]（2019）在《蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His_6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。(本文来源于《工业微生物》期刊2019年05期）
杨兴武,郭奎,韩昊莹,赵宇,郑慧华[2]（2019）在《猪PBD1成熟肽基因在干酪乳酸杆菌中的表达及其抑菌活性的检测》一文中研究指出为获得一株能够稳定表达猪β防御素-1 (PBD1)成熟肽蛋白的重组干酪乳酸杆菌,本研究将PBD1成熟肽基因克隆至含有短小干酪乳酸杆菌信号肽的pUCK-SP载体中,再将SP-PBD1亚克隆到干酪乳酸杆菌整合性表达质粒pMJ67的Lac启动子下游,获得重组质粒pMJ67-SP-PBD1,电转化入干酪乳酸杆菌,经红霉素抗性筛选和基因组DNA PCR测序鉴定,证实猪PBD1基因整合到了干酪乳酸杆菌中。采用半定量RT-PCR分析显示,经2%乳糖诱导18 h后的重组菌中猪PBD1 mRNA含量最高。Western blot检测显示,经乳糖诱导的重组菌表达了约5.8 ku的目的蛋白,与PBD1成熟蛋白理论分子量相符。抑菌试验结果显示重组PBD1对葡萄球菌具有明显抑制作用。表明猪PBD1基因在重组干酪乳酸杆菌中获得了表达,且具有抑菌活性。本研究为进一步研发具有广谱抗菌作用的微生态制剂奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年02期）
李原野,殷玥,陈瑛琪,张继宗,杨晓宇[3]（2018）在《藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定》一文中研究指出为探究藏猪Ⅲ型干扰素抗病毒作用,以藏猪肠道和肺脏核酸为模板,采用RT-PCR扩增克隆IFN-λ3基因(ZPoIFN-λ3),经测序鉴定后构建原核表达载体pET-32a(+)-mZPoIFN-λ3,并于大肠杆菌BL21(DE3)中表达。通过优化诱导时间、IPTG浓度,利用镍柱亲和层析纯化表达蛋白,并采用SDS-PAGE验证。纯化蛋白经透析复性浓缩,以此为免疫原制备鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体,采用Western Blot鉴定。通过细胞病变抑制法测定表达蛋白在MDBK/VSV系统的抗病毒活性。结果表明,成功克隆藏猪IFN-λ3成熟肽基因,经分析发现藏猪IFN-λ3核酸序列与野猪核酸同源性为100%。成功构建藏猪IFN-λ3原核重组表达质粒,并成功表达大小为34 ku蛋白,蛋白纯化后SDS-PAGE显示为单一条带,Western Blot鉴定结果显示鼠抗ZPoIFN-λ3多克隆抗体具有良好免疫原性。p ET-32a(+)-mPoIFN-λ3表达蛋白在MDBK/VSV系统抗病毒效价为10×24.5U·0.1 mL-1,比活力为2×103U·mg-1。研究首次克隆藏猪IFN-λ3基因并原核表达,通过研究其抗病毒作用,为进一步研究藏猪IFN-λ3生物学特性和相关基因重组药物生物学功能奠定基础,为临床新药物研发提供新方向。(本文来源于《东北农业大学学报》期刊2018年10期）
许国洋,付利芝,杨金龙,曹国文,张素辉[4]（2016）在《鸡Gal-13成熟肽基因序列在毕赤酵母中的表达与抑菌活性分析》一文中研究指出扩增鸡β-防御素-13(Gal-13)成熟肽基因序列,构建酵母重组表达载体pPICZαA-Gal-13,通过Sac I限制性内切酶线性化处理后,电击转化毕赤酵母X-33,并对利用甲醇诱导后的重组菌株表达产物进行表达规律分析和抑菌活性研究。结果表明,扩增到的Gal-13成熟肽基因序列为108bp,共编码36个氨基酸;筛选到的重组菌株均为Mut+表型,其诱导表达上清经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳后,发现其在约5900的位置出现目的条带,抑菌试验发现其对沙门菌(CVCC534)和金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有抑菌活性。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会论文集》期刊2016-11-04）
张飞燕,王振华,张钧利,潘康成,唐慧琴[5]（2016）在《藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达》一文中研究指出旨在克隆藏猪胰岛素样生长因子1(IGF-1)的成熟肽基因,并进行原核表达的研究。提取藏猪肝脏组织RNA,通过RT-PCR扩增出藏猪IGF-1基因,构建重组质粒pMD19-T-IGF-1,以pMD19-T-IGF-1质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽序列并构建成熟肽pET-32a-IGF-1表达质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),对IPTG诱导剂浓度和诱导时间进行优化,Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白后采用Western blot对其鉴定。结果显示,获得了藏猪IGF-1成熟肽基因序列(315bp)并成功构建原核表达载体pET-32a-IGF-1;重组大肠杆菌BL21-IGF1以包涵体形式表达出分子量约31KDa融合蛋白,最优IPTG浓度为0.5mmol/L,最佳IPTG诱导时间为10h;纯化获得了高纯度的融合蛋白,经鉴定IPTG诱导表达和纯化的蛋白为IGF-1融合蛋白。结果表明成功构建了表达质粒pET32a-IGF-1及获得重组大肠杆菌BL21-IGF1,表达了藏猪IGF-1成熟肽融合蛋白及该蛋白具有抗原抗体反应活性。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会论文集》期刊2016-11-04）
许国洋,付利芝,杨金龙,曹国文,张素辉[6]（2015）在《Gal-13成熟肽基因在毕赤酵母中的表达与抑菌活性分析》一文中研究指出扩增鸡β-防御素-13(Gal-13)成熟肽基因序列,构建酵母重组表达载体pPICZαA-Gal-13,通过SacⅠ限制性内切酶线性化处理后,电击转化毕赤酵母X-33,并对利用甲醇诱导后的重组菌株表达产物进行表达规律分析和抑菌活性研究。结果表明,扩增到的Gal-13成熟肽基因序列为108bp,共编码36个氨基酸;筛选到的重组菌株均为Mut+表型,其诱导表达上清经Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳后,发现其在约5 900的位置出现目的条带,抑菌试验发现其对沙门菌(CVCC534)和金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有抑菌活性。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2015年08期）
孙小宁,裴志花,卞路,张丹丹,马红霞[7]（2015）在《家蝇幼虫双翅肽MdDpt I成熟肽基因的克隆与原核表达》一文中研究指出对鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库(SSH)中筛选得到的家蝇双翅肽I(Musca domesticaDiptericin I,MdDptI)基因进行克隆、表达,并对表达产物的抑菌活性进行初步研究。以沙门氏菌诱导家蝇幼虫cDNA为模板,采用cDNA末端快速扩增技术(RACE),对MdDptI基因进行扩增,并对扩增产物进行测序和生物信息学分析,进一步去掉信号肽并构建重组表达质粒pET-28a-MdDptI,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析。借助亲和纯化获得目的蛋白,并验证目的蛋白的生物活性。MdDptI基因全长为419 bp,包含一个300 bp的完整开放阅读框(ORF),编码99个氨基酸,其cDNA序列与GenBank中登录号为FJ794602.1的家蝇双翅肽基因同源性为95%。构建了家蝇MdDptI基因的成熟肽原核表达质粒pET-28a-MdDpt-I,并获得成功表达,表达产物约为12 ku,与预期结果一致。纯化后的目的蛋白表现出一定的抑菌活性。本试验获得了MdDptI基因的全长序列,构建了原核表达载体,并成功获得表达纯化。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2015年01期）
尉冰,朱俊丰,桑力轩,杨芳莉,孙霄云[8]（2014）在《小鼠IL-33成熟肽基因克隆及原核表达》一文中研究指出目的:近年,白细胞介素-33(IL-33)作为IL-1细胞因子超家族成员被发现。目前研究证明其在小鼠及人各组织内皮与上皮细胞中均有广泛表达。本研究旨在克隆小鼠IL-33(mIL-33)成熟肽基因,构建其原核表达质粒并实现在大肠杆菌中表达,为研究IL-33成熟肽的生物学功能奠定基础。方法:以peDNA3.1-IL-33质粒为模板,用PCR技术扩增mIL-33成熟肽的编码区,将PCR产物与pUC-T载体连接后,测序。将测序正确的mIL-33成熟肽基因片段与原核表达载体pET-21a连接,构建pET21a-mIK-33表达质粒,电转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物。结果:mII-33成熟肽基因的PCR产物和重组质粒经凝胶电泳和酶切鉴定、测序分析,其序列与GenBank中的数据一致。SDS-PAGE检测到mIL-33成熟肽在大肠杆菌中的明显表达。结论:成功克隆了mIL-33的成熟肽基因,构建其原核表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达了mIL-33的成熟肽,为后续功能研究奠定了基础。(本文来源于《第九届全国免疫学学术大会论文集》期刊2014-10-18）
潘福星,朱梅胜,冯培祥,王冬冬,范丹丹[9]（2014）在《比格犬α7干扰素成熟肽基因的原核表达及表达产物活性的分析》一文中研究指出从比格犬的脾中提取基因组DNA,采用RT-PCR方法扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因。将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,PCR检测及测序鉴定结果表明,克隆的目的基因为比格犬α7干扰素成熟肽,与GenBank中登录的犬干扰素序列(NM001006654)的同源性达到100%。在此基础上构建重组原核表达质粒pET-32a-CaIFN-α7,并转化至表达宿主BL21(DE3)中。该工程菌在37℃经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳,结果在分子质量约38.4ku处出现了目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在。经Bandscan软件分析,表达产物约占菌体总蛋白的48.5%。用Protein Refolding Kit对包涵体进行纯化复性,重组CaIFN-α7在犬肾细胞(MDCK)上具有较高的抗病毒活性。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2014年03期）
刘玉鹏,彭中友,郭日红,雷明明,于建宁[10]（2013）在《水牛生长分化因子9成熟肽基因克隆及重组蛋白质和多克隆抗体的制备》一文中研究指出为了获得水牛生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF9)重组蛋白质和抗GDF9抗体,根据GDF9基因编码区序列(GenBank:FJ529501.1)设计1对引物,用水牛基因组DNA为模板扩增水牛GDF9成熟肽基因序列,并与其他反刍动物的GDF9成熟肽基因序列进行同源性比较。将该序列克隆到表达载体pRSET-A的BamHⅠ和HindⅢ酶切位点之间以构建重组表达载体,并将重组表达载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),转化菌经IPTG诱导表达重组蛋白质。经Ni-NTA凝胶纯化后的重组蛋白质与矿物油佐剂混合免疫新西兰兔制备抗GDF9抗血清,使用ELISA方法检测血清抗体效价,从抗血清中进一步纯化GDF9抗体。结果显示,成功获得了水牛GDF9成熟肽基因序列,该序列在牛和其他反刍动物之间高度同源。成功构建了重组表达载体并转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导后表达了分子量为1.96×104的GDF9重组蛋白质,其最高表达量达到菌体蛋白质总量的30%左右。成功制备了抗GDF9抗血清,血清效价达到1∶51 200,抗血清经纯化后得到了高纯度的GDF9抗体。GDF9重组蛋白质和抗GDF9抗体有望应用于提高羊繁殖性能和促进动物胚胎发育的研究和技术开发。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2013年02期）
人成熟肽基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为获得一株能够稳定表达猪β防御素-1 (PBD1)成熟肽蛋白的重组干酪乳酸杆菌,本研究将PBD1成熟肽基因克隆至含有短小干酪乳酸杆菌信号肽的pUCK-SP载体中,再将SP-PBD1亚克隆到干酪乳酸杆菌整合性表达质粒pMJ67的Lac启动子下游,获得重组质粒pMJ67-SP-PBD1,电转化入干酪乳酸杆菌,经红霉素抗性筛选和基因组DNA PCR测序鉴定,证实猪PBD1基因整合到了干酪乳酸杆菌中。采用半定量RT-PCR分析显示,经2%乳糖诱导18 h后的重组菌中猪PBD1 mRNA含量最高。Western blot检测显示,经乳糖诱导的重组菌表达了约5.8 ku的目的蛋白,与PBD1成熟蛋白理论分子量相符。抑菌试验结果显示重组PBD1对葡萄球菌具有明显抑制作用。表明猪PBD1基因在重组干酪乳酸杆菌中获得了表达,且具有抑菌活性。本研究为进一步研发具有广谱抗菌作用的微生态制剂奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人成熟肽基因论文参考文献
[1].田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠.蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备[J].工业微生物.2019
[2].杨兴武,郭奎,韩昊莹,赵宇,郑慧华.猪PBD1成熟肽基因在干酪乳酸杆菌中的表达及其抑菌活性的检测[J].中国预防兽医学报.2019
[3].李原野,殷玥,陈瑛琪,张继宗,杨晓宇.藏猪IFN-λ3成熟肽基因克隆及原核表达、抗病毒效价测定[J].东北农业大学学报.2018
[4].许国洋,付利芝,杨金龙,曹国文,张素辉.鸡Gal-13成熟肽基因序列在毕赤酵母中的表达与抑菌活性分析[C].中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会论文集.2016
[5].张飞燕,王振华,张钧利,潘康成,唐慧琴.藏猪IGF-1成熟肽基因的克隆及原核表达[C].中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会论文集.2016
[6].许国洋,付利芝,杨金龙,曹国文,张素辉.Gal-13成熟肽基因在毕赤酵母中的表达与抑菌活性分析[J].中国兽医学报.2015
[7].孙小宁,裴志花,卞路,张丹丹,马红霞.家蝇幼虫双翅肽MdDptI成熟肽基因的克隆与原核表达[J].中国兽药杂志.2015
[8].尉冰,朱俊丰,桑力轩,杨芳莉,孙霄云.小鼠IL-33成熟肽基因克隆及原核表达[C].第九届全国免疫学学术大会论文集.2014
[9].潘福星,朱梅胜,冯培祥,王冬冬,范丹丹.比格犬α7干扰素成熟肽基因的原核表达及表达产物活性的分析[J].中国兽医科学.2014
[10].刘玉鹏,彭中友,郭日红,雷明明,于建宁.水牛生长分化因子9成熟肽基因克隆及重组蛋白质和多克隆抗体的制备[J].江苏农业学报.2013