导读:本文包含了纳豆激酶酶原论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:纳豆激酶酶原基因,原核表达,纤溶活性,纳豆激酶
纳豆激酶酶原论文文献综述
艾海新,连昭,李秀瑜,王宁,王家友[1]（2009）在《纳豆激酶酶原基因的克隆与原核表达方法研究》一文中研究指出目的构建纳豆激酶酶原基因表达载体,使纳豆激酶酶原基因在大肠杆菌中表达。方法通过PCR技术扩增纳豆激酶酶原基因。构建重组质粒,将其转化到大肠杆菌。纳豆激酶酶原基因在IPTG诱导下在大肠杆菌BL21中表达,并用SDS-PAGE分析表达结果。以纤维蛋白平板法测定表达产物的纤溶活性大小。结果在SDS-PAGE电泳图中出现37kD大小的特异蛋白条带,表达量占蛋白总量的42. 9%。诱导后菌体破碎液及破碎后上清液在纤维平板上显示出纤溶活性。菌体破碎液中纤维溶解活性为21.7个IU/ml。结论纳豆激酶酶原基因在大肠杆菌中以可溶蛋白形式表达,其表达产物具有明显的纤溶活性。(本文来源于《东北叁省及内蒙古地区遗传学研究进展学术研讨会论文汇编》期刊2009-08-10）
郭焕成[2]（2005）在《产纳豆激酶菌株的筛选及纳豆激酶酶原基因的克隆与表达研究》一文中研究指出纳豆(natto)在日本是一种历史悠久的传统食品,系由蒸煮后的大豆接种纳豆芽孢杆菌发酵制得。纳豆激酶(nattokinase, NK)是在纳豆芽孢杆菌发酵过程中产生的一种具有强烈纤溶活性的碱性丝氨酸蛋白酶。纳豆激酶具有纤溶作用强,药效时间长,可通过静脉与口服两种途径给药以及不引起出血的副作用等第一代溶栓药物所不具备的优点,使其具有开发成新一代溶栓药的潜力。本研究从五种日本纳豆中分离、筛选出一株产酶活力最高的纳豆芽孢杆菌菌株NT2,并以该菌株基因组DNA 为模板PCR 扩增出编码纳豆激酶酶原即包括前导肽、成熟肽的核苷酸序列,并克隆到pGEM-T载体,以原核表达载体pKK223-3构建了重组表达载体pKK-pro-NK,转化大肠杆菌JM105,经IPTG 诱导表达。表达的纳豆激酶酶原一部分通过自体加工机制切除了前导肽成为成熟肽。纳豆激酶酶原主要分布在超声破菌后的沉淀,纳豆激酶成熟肽50%分布在菌体破碎后的上清中,纤维蛋白平板检测上清具有明显的纤溶活性而沉淀则无活性。表达产物活性测定显示1ml 菌液产生尿激酶活力单位数约为60U。(本文来源于《吉林大学》期刊2005-04-25）
余榕捷,谢秋玲,洪岸,汪炬,孙奋勇[3]（2003）在《纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定》一文中研究指出目的 :利用基因工程技术 ,构建表达具溶栓活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌。方法 :利用PCR方法扩增纳豆激酶酶原 (pro-NK)基因 ,并克隆到表达载体pET3c上 ,构建表达pro -NK和载体上 2 2氨基酸短肽的融合蛋白的表达质粒pENK ;表达质粒pENK分别转化溶源化宿主菌BL2 1(DE3)pLysS-和BL2 1(DE3)pLysS+ ,获得表达菌pENK - (DE3)pLysS-和pENK - (DE3)pLysS+ 。利用SDS -PAGE和纤维蛋白平板法检测目的蛋白的表达及活性。结果 :SDS-PAGE显示两株菌株均表达 4 2kD的目的蛋白。纤维蛋白平板法显示表达产物具溶栓的活性。在pENK -(DE3)pLysS-中融合蛋白不需异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导就有基础表达 ,融合蛋白的表达使表达菌细胞溶解 ,菌落中空 ,表明表达产物具细胞毒作用。结论 :本研究成功实现了在大肠杆菌表达具有溶栓活性的pro -NK融合蛋白 ,为开发纳豆激酶成为新一代溶栓药物的研究奠定基础。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2003年06期）
余榕捷,汪炬,谢秋玲,洪岸[4]（2002）在《纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达》一文中研究指出目的:构建可高效生产有活性的纳豆激酶的大肠杆菌工程菌。方法:将纳豆激酶酶原(pro-nattokinase,pro-NK)基因和纳豆激酶(natokinase,NK)基因,并分别克隆到表达融合蛋白的高效表达载体pJN上,构建出表达质粒pJNK1和pJNK2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。结果:IPTG诱导下,两个融合蛋白的表达量均达到30%。活性检测显示表达纳豆激酶酶原融合蛋白的菌株pJNK-1(BL)诱导后菌体破碎上清的溶栓活性比表达纳豆激酶融合蛋白的菌株pJNK-2(BL)高2-3倍。结论:纳豆激酶酶原融合蛋白部分自减切产生纳豆激酶成熟肽。(本文来源于《生物技术》期刊2002年03期）
纳豆激酶酶原论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
纳豆(natto)在日本是一种历史悠久的传统食品,系由蒸煮后的大豆接种纳豆芽孢杆菌发酵制得。纳豆激酶(nattokinase, NK)是在纳豆芽孢杆菌发酵过程中产生的一种具有强烈纤溶活性的碱性丝氨酸蛋白酶。纳豆激酶具有纤溶作用强,药效时间长,可通过静脉与口服两种途径给药以及不引起出血的副作用等第一代溶栓药物所不具备的优点,使其具有开发成新一代溶栓药的潜力。本研究从五种日本纳豆中分离、筛选出一株产酶活力最高的纳豆芽孢杆菌菌株NT2,并以该菌株基因组DNA 为模板PCR 扩增出编码纳豆激酶酶原即包括前导肽、成熟肽的核苷酸序列,并克隆到pGEM-T载体,以原核表达载体pKK223-3构建了重组表达载体pKK-pro-NK,转化大肠杆菌JM105,经IPTG 诱导表达。表达的纳豆激酶酶原一部分通过自体加工机制切除了前导肽成为成熟肽。纳豆激酶酶原主要分布在超声破菌后的沉淀,纳豆激酶成熟肽50%分布在菌体破碎后的上清中,纤维蛋白平板检测上清具有明显的纤溶活性而沉淀则无活性。表达产物活性测定显示1ml 菌液产生尿激酶活力单位数约为60U。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
纳豆激酶酶原论文参考文献
[1].艾海新,连昭,李秀瑜,王宁,王家友.纳豆激酶酶原基因的克隆与原核表达方法研究[C].东北叁省及内蒙古地区遗传学研究进展学术研讨会论文汇编.2009
[2].郭焕成.产纳豆激酶菌株的筛选及纳豆激酶酶原基因的克隆与表达研究[D].吉林大学.2005
[3].余榕捷,谢秋玲,洪岸,汪炬,孙奋勇.纳豆激酶酶原基因的克隆、融合表达及活性测定[J].中国病理生理杂志.2003
[4].余榕捷,汪炬,谢秋玲,洪岸.纳豆激酶酶原基因和纳豆激酶基因的克隆及在大肠杆菌中表达[J].生物技术.2002