导读:本文包含了短基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,病毒,卡介苗,免疫,蛋白,细胞,水貂。
短基因论文文献综述
郝亚茹,张婷,刘洪洋,王志荣,周艳[1]（2019）在《HPV31 L1 C端截短基因可在昆虫细胞表达体系中高水平制备L1 VLP疫苗》一文中研究指出目的利用昆虫细胞表达体系制备人乳头瘤病毒(HPV)31 L1病毒样颗粒(VLP)疫苗。方法化学合成法获得昆虫Sf9细胞偏性密码子优化的、C端删除27个氨基酸编码序列的HPV31 L1截短基因(HPV31 L1MΔC),构建重组杆状病毒,感染Sf9细胞进行表达;分别采用超声破碎、含离子型表面活性剂(1%SDS等)或含非离子型表面活性剂(0.5%TritonX-100)的裂解缓冲液,制备细胞裂解上清;氯化铯超速离心法纯化后经动态光散射及透射电子显微镜鉴定;0.1μg的HPV31 L1MΔC VLP于第0和2周肌肉免疫BALB/c小鼠,第4周采集血清分析中和活性。结果 3种裂解方法制备的上清均显示HPV31 L1MΔC蛋白的特异表达,其表达量约占裂解上清总蛋白的10%;采用非离子型表面活性剂获得的裂解上清纯化后,目的蛋白纯度高,产量达11.5 mg/L;纯化蛋白的水化分子直径为103.3 nm,均一性好;电镜分析为直径50～60 nm的VLP。免疫血清中HPV31中和抗体滴度为1 440。结论 HPV31 L1MΔC在昆虫细胞表达体系制备的VLP产量高、免疫原性好,可用于生产含HPV31 L1 VLP的多价疫苗。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年03期）
廖红,林华,郝中香,佘容,陈世界[2]（2016）在《鲤疱疹病毒2型ORF5截短基因的克隆表达及免疫原性研究》一文中研究指出根据G en Bank上已登录的鲤疱疹病毒2型的O RF5基因序列(登录号:AFJ20457.1)设计1对引物,采用PCR扩增技术获得目的基因。序列分析表明,目的基因长357 bp,是一个完整的开放阅读框,编码119个氨基酸,理论分子质量为13 059.70 u,无信号肽,无跨膜区,含有4个抗原表位。将扩增片段克隆至原核表达载体p ET-32a中,并将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。对表达蛋白进行复性纯化后免疫小鼠和异育银鲫,SD S-PAGE和W estern-blot检测分析表明,重组蛋白的分子质量约为33 ku,与预期相符,表达形式为包涵体,该蛋白能够与抗H is标签的抗体发生特异性反应,也能识别病毒粒子上的ORF5蛋白。对免疫的异育银鲫进行攻毒,结果显示注射生理盐水组的银鲫保护率为0,注射15、25、50 g重组蛋白组的保护率分别为20%、30%、35%,表明免疫重组蛋白组的保护率高于对照组。本研究证实了表达的融合蛋白具有一定的免疫原性,丰富了鲤疱疹病毒2型ORF5基因及基因组的研究,为研发制备新型鲤疱疹病毒2型的疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2016年11期）
张黎,田光玲,王伟松,蔡高峰,吴靖[3]（2015）在《猪细环病毒2型ORF1截短基因的原核表达》一文中研究指出细环病毒(TTV)又称输血传播病毒,是隶属于指环病毒科的一种环形DNA病毒。输血传播病毒于1997年由日本学者从一名输血后的肝炎患者血清中发现[1],人群感染率可达10%以上[2]。1999年,美国学者在猪体内发现猪源细环病毒(Torque teno sus virus,TTSu V),之后世界各地陆续可见TTSu V病例的报道[3]。2011年,王礞礞[4]对我国广东、福建和江西(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2015年19期）
李晶,时坤,曾范利,宋继伟,杜锐[4]（2015）在《水貂阿留申病病毒VP2截短基因的原核表达》一文中研究指出为获得水貂阿留申病病毒G株(ADV-G株)VP2截短基因表达的蛋白,将ADV-G株VP2基因的主要抗原区片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,通过不同浓度的IPTG,不同诱导时间以及加入不同的化学分子伴侣(甘油、葡萄糖、蔗糖、二甲基亚砜、乙醇)进行诱导表达,确定目的蛋白表达的最佳条件。经SDS-PAGE和Western blot分析,表明终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h目的蛋白的表达量最高,分子质量约为53ku。SDS-PAGE分析表明,葡萄糖和乙醇抑制了目的蛋白的表达,而蔗糖、甘油和二甲基亚砜提高了目的蛋白的表达量,获得的目的蛋白具有良好的反应原性。(本文来源于《动物医学进展》期刊2015年04期）
杨宇航,李晶,张云,郝俊伟,刘东旭[5]（2014）在《牛病毒性腹泻病毒E2截短基因重组卡介苗安全性和最佳免疫剂量的研究》一文中研究指出将6组BVDV-E2截短基因重组卡介苗用生理盐水稀释,分别进行革兰染色和伊红美蓝平板检测,6组重组卡介苗均无杂菌污染。再对6周龄~8周龄雄性豚鼠进行免疫接种,每只腹腔注射1mL(5×106 cfu/只),免疫接种豚鼠无任何症状,精神、食欲、排便及发育等均不受影响,且无死亡,说明重组病毒对试验豚鼠是安全的。使用BVDV抗体检测试剂盒对60头健康牛的母源抗体含量进行检测,不含母源抗体占85.00%。取重组卡介苗中的一组,用生理盐水稀释,使重组卡介苗达到105、106、107、108、109 cfu/mL共5组,每组不含母源抗体的牛3头,免疫接种前对每头牛进行尾颈静脉采血,析出血清,用BVDV抗体检测试剂盒测牛血清中抗体水平。采完血后对牛进行皮下免疫接种,4周后,采取血液,检测牛血清中抗体水平。通过免疫接种后的检测结果可知,重组疫苗对牛最佳免疫剂量为108 cfu/mL,为进一步进行重组疫苗回归本动物的免疫效果研究提供了可靠依据。(本文来源于《动物医学进展》期刊2014年07期）
张继玲,朱善元,王安平,刘俊,王岑[6]（2014）在《鸭肝炎病毒Ⅰ型VP35'端截短基因的原核表达》一文中研究指出鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitit,DVH)是一种由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)感染导致的急性和高度致死性传染病,可引起21日龄以下的雏鸭发生急性肝炎,有的可能腹泻,病死率高达100%,是严重危害养鸭业的疫病之一。DHV主要包括3个血清型,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。3个血清型有明显的差异,无交叉免疫性。目前中国发生和流行的主要是Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-(本文来源于《江苏农业学报》期刊2014年03期）
杨宇航[7]（2014）在《6种BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果分析》一文中研究指出牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（BVD-MDV)，属于黄病毒科，该病毒为单股正链RNA病毒，具有传染性，且有囊膜结构。该病是一种广为传播的世界性传染病，以消化道黏膜发炎、糜烂、坏死和腹泻为主要特征，可引起牛慢性，急性和黏膜病，严重影响母牛的繁殖和生产性能，对牛、鹿、羊、猪、马等可造成不同程度的感染，严重阻碍我国乃至世界养殖业的发展。BVDV E2基因保守性低，变异性最强，糖基化程度高，免疫逃逸率较低。E2基因不仅决定BVDV抗原性的主要部位，还参与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别和吸附。目前，国内外学者从多种途径开发研究BVDV新型疫苗，BVDV E2蛋白作为免疫优势蛋白，是研究新疫苗的首选靶蛋白。重组卡介苗集各种优势于一身，能产生强而持久的免疫，具有多种特异性，构建重组卡介苗已成为当前国内外学者研究的热点。本研究以6种BVDV-E2截短基因重组卡介苗（E11、E12、E13、E21、E22、E23）为研究目标，对免疫的牛进行抗体水平、细胞因子、淋巴细胞增殖和CD4+，CD8+T淋巴细胞亚群检测，为筛选出能预防结核病与牛病毒性腹泻病的新型重组卡介苗做出有益尝试。本研究将实验室保存的6种BVDV-E2截短基因重组卡介苗进行菌液PCR鉴定，通过1%琼脂糖凝胶电泳验证基因片段大小，然后以7H9培养基增菌保存，用固体7H9培养基平板法计数重组BCG，计算菌落形成单位，以备后续免疫牛用。对6种重组卡介苗进行革兰氏染色和伊红美蓝平板检测，无其他细菌污染，同时对6-8周龄雄性豚鼠进行腹腔注射，经观察所有实验豚鼠均健康状况良好且无明显的症状，结果表明：重组卡介苗无杂菌污染且对实验动物无致病性。随机选择60头24月龄左右的健康奶牛，采集血液，使用BVDV抗体检测试剂盒检测血清中母源抗体水平，被检血清中阳性2份，阴性51份，阴性率为85.00%。从BVDV抗体阴性牛中随机选择18头牛，每组3头，分别皮下注射生理盐水和剂量依次为105CFU/mL，106CFU/mL，107CFU/mL，108CFU/mL，109CFU/mL的重组卡介苗，测定体液免疫水平以筛选出重组卡介苗的最佳免疫剂量，结果表明：注射108CFU/mL重组卡介苗组别的牛免疫效果最好，因此确定最佳免疫剂量为108CFU/mL。再从剩余的阴性牛中随机选择27头牛，分为九组，分别为6种BVDV-E2截短基因重组卡介苗组、BCG对照组、BVDV灭活苗组和生理盐水对照组，其中6种重组卡介苗组和BCG对照组皮下注射的剂量为108CFU/mL，BVDV灭活苗组皮下注射BVDV灭活苗106.0TCID50/mL，生理盐水对照组皮下注射1mL生理盐水。分别在0周、4周、8周免疫牛免疫前采血分离血清，12周时采集抗凝血和血液分离血清。48h之内用抗凝血分离淋巴细胞，用于流式细胞检测和淋巴细胞增殖实验。结果表明：所有实验组中的E11组和E23组淋巴细胞刺激指数最高；E22组和E11组的CD4+、CD8+含量最高。对采集的4次血清进行BCG、BVDV抗体水平和IL-4、IL-10、IL-12与IFN-γ等细胞因子检测，结果表明：所有实验组中的E11组与E12组的BCG抗体水平较高； E11组和E13组的BVDV抗体水平较高；E11组和E13组IL-4水平较高；E21组和E13组的IL-10水平较高；E11组、E21组和E13组的IL-12水平较高；E21组和E11组的IFN-γ水平较高。综合上述各指标，BVDV-E2截短基因重组卡介苗E11的免疫效果明显优于E12、E13、E21、E22、E23。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2014-06-01）
刘帅帅[8]（2014）在《鸭甲型肝炎病毒VP0、VP1截短基因的表达及初步应用》一文中研究指出鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis, DVH)是由小RNA病毒DHV(Duck Hepatitis Virus)引起的一种以雏鸭肝炎和出血为主要病变的传染性极强的疾病。VP0、VP1作为DHV的主要结构蛋白,有很好的免疫原性。通过对VP0、VP1基因截短,筛选出亲水性强的优势抗原区并进行表达,制备了VP0、VP1截短基因的多克隆抗体(PcAb),建立了检测鸭甲型病毒性肝炎抗原抗体的快速检测方法。1.VP0、VP1截短基因的表达以VP0、VP1基因为模板,经PCR扩增得到VP0F1、VP0F2、VP0F3、VP1F1、 VP1F2共5段序列,将VPOF1-3, VP1F1-2各自拼接得到VP0、VP1截短基因。将VP0、VP1截短基因克隆到表达载体pET28a,构建pET28a-VP0/VP1(截短)重组质粒,在16℃C过夜条件下经IPTG诱导获得VP0、VP1截短蛋白并进行纯化。结果经SDS-PAGE及western blot分析,证明VP0、VP1截短蛋白纯化效果良好,免疫原性强。2.鸭甲型病毒性肝炎抗体间接ELISA检测方法的建立以纯化的VP0截短蛋白为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗鸭IgY为酶标二抗,建立了检测鸭甲型病毒性肝炎抗体的间接ELISA方法。通过优化各种条件,最终确定VP0截短蛋白最佳包被浓度为2μg/mL,鸭血清最佳稀释度为1：320,HRP标记的兔抗鸭IgY最佳稀释度为1：4000,该方法特异性强、敏感性高、重复性好。3.VP0、VP1截短蛋白多克隆抗体的制备以纯化的鸭甲型肝炎病毒VP0、VP1截短基因的重组蛋白为免疫原,四次免疫体重约2.5kg的白兔。效价较高时颈动脉采血,收集并纯化血清,制备抗VP0、VP1截短蛋白多克隆抗体。以纯化的DHAV为包被抗原,用间接ELISA检测VP0、VP1截短蛋白多抗的效价,结果显示抗VP0截短蛋白多抗的效价为51200,抗VP1截短蛋白多抗的效价为12800。4.鸭甲型病毒性肝炎抗原夹心ELISA检测方法的建立以纯化的VP0截短蛋白多抗为包被抗体,以鸭多抗为检测抗体,建立了检测鸭甲型病毒性肝炎抗原的夹心ELISA方法。通过对各级条件的优化,确定VP0截短蛋白多抗最佳包被稀释度为1：16000,鸭多抗最佳稀释度为1：200,HRP标记的兔抗鸭IgY最佳稀释度为1：3000。由试验结果可知该方法重复性好、特异性强。综上可知,本研究通过筛选VP0、VP1基因的亲水强的优势抗原区,成功表达了抗原性强的VP0、VP1截短蛋白,制备了抗VP0、VP1截短蛋白的兔多抗,并建立了检测鸭甲型病毒性肝炎抗原抗体的特异性强、重复性好的快速ELISA检测方法,这对该病的诊治和预防有重要意义。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
李珂[9]（2014）在《鸡弓形虫致密颗粒蛋白截短基因sGRA8的克隆表达及ELISA诊断方法的建立》一文中研究指出弓形虫病(Toxoplasmosis)是一种由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的世界性分布人畜共患寄生虫病,人和动物的感染率都很高,严重危害人类健康,对孕妇和免疫缺陷、免疫抑制患者的损害尤甚,并给世界各国的畜牧业造成巨大的经济损失。国内散养鸡群中的弓形虫病感染不容忽视,平均在30%左右。人类通过接触病鸡或食用未煮熟的鸡可感染弓形虫,因此加强对鸡弓形虫感染的检测,对防控弓形虫病及人类健康有着重要的公共卫生学意义。目前,对畜禽弓形虫感染的检测手段主要有病原学诊断、免疫学诊断和核酸检测技术叁类。ELISA法具有灵敏性高、特异性高、重复性好等特点,且对检测设备要求不高,是一种优良的检测手段。市场上销售的检测鸡弓形虫抗体的ELISA试剂盒特异性差、抗体检出时间短,对感染后期的抗体无法检出。近些年在国内外,关于猪、牛、羊等家畜动物弓形虫感染及抗体检测技术的研究和报道较多,但对鸡等禽类弓形虫感染检测的研究较少。本实验室对GRA8全基因进行了克隆表达,并进行了Western blot和ELISA验证,表明GRA8是一种具有很好诊断价值的鸡弓形虫病诊断抗原,但由于GRA8基因被正确插入原核表达质粒中,原核重组表达质粒在大肠埃希菌中表达GRA8的水平低,所以本研究利用TMHMM、SignalP4.1和DNAstar等生物学软件进行了信号肽及疏水区预测,构建了切除信号肽及疏水区的截短型sGRA8原核表达载体,通过Western blot验证表明该重组蛋白具有很好的抗原性,可以做为鸡弓形虫病的诊断抗原。大量表达、纯化该重组蛋白后,进行ELISA板包被,经抗原包被量、一二抗、封闭液和底物等相关条件的摸索和优化后,确定了sGRA8的最佳工作浓度为1.7μg/ml,阴、阳性血清的最佳稀释倍数为1：10,二抗最佳稀释倍数为1:6000, sGRA8的最佳包被条件为37℃包被2h后4℃过夜,选用5%脱脂奶粉作为封闭液,最佳封闭时间为1h,抗体的反应时间为1h,酶标抗体最佳作用时间为1h,最佳显色时间10min。用构建的间接ELISA抗体检测法与RB公司的鸡弓形虫抗体检测试剂盒,对人工感染鸡弓形虫7-130d的阳性血清和阴性血清进行平行抗体检测的结果显示：7-45d内的符合率为98.26%,RB公司的试剂盒对60d后的血清无法检出阳性,而构建的间接ELISA对7-130d的阳性血清的检测敏感度达到80%-100%,且对7种鸡球虫、法氏囊、新城疫和大肠杆菌等鸡常见病原体阳性血清的检测未出现交叉反应。所以本方法是一个敏感性高、特异性强、检测时间长的鸡弓形虫检测法。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-05-01）
杨宇航,宋纪伟,时坤,曾范利,李健明[10]（2014）在《应用流式细胞术检测BVDV-E_2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果》一文中研究指出为评价牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对小鼠的免疫效果,用BVDV-E2截短基因重组卡介苗pMV361-E11、pMV361-E12、pMV361-E13、pMV361-E21、pMV361-E22、pMV361-E23及卡介苗、BVDV灭活苗和生理盐水对试验小鼠进行腹腔免疫,在叁免后14d取其脾脏对T、B淋巴细胞、树突状细胞及Th1细胞等细胞因子进行流式细胞术检测,评价各重组卡介苗的免疫效果。结果显示,pMV361-E23重组卡介苗组中各细胞因子的表达量尽管有个别因子在同组中不是最高,但均高于同组生理盐水的表达量(除INF-γ检测中略低外);pMV361-E12组中IL-12的含量高达9.7。表明pMV361-E23和pMV361-E122组截短重组卡介苗免疫效果较好,为预防牛病毒性腹泻病以及新型疫苗的研制奠定基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2014年04期）
短基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据G en Bank上已登录的鲤疱疹病毒2型的O RF5基因序列(登录号:AFJ20457.1)设计1对引物,采用PCR扩增技术获得目的基因。序列分析表明,目的基因长357 bp,是一个完整的开放阅读框,编码119个氨基酸,理论分子质量为13 059.70 u,无信号肽,无跨膜区,含有4个抗原表位。将扩增片段克隆至原核表达载体p ET-32a中,并将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。对表达蛋白进行复性纯化后免疫小鼠和异育银鲫,SD S-PAGE和W estern-blot检测分析表明,重组蛋白的分子质量约为33 ku,与预期相符,表达形式为包涵体,该蛋白能够与抗H is标签的抗体发生特异性反应,也能识别病毒粒子上的ORF5蛋白。对免疫的异育银鲫进行攻毒,结果显示注射生理盐水组的银鲫保护率为0,注射15、25、50 g重组蛋白组的保护率分别为20%、30%、35%,表明免疫重组蛋白组的保护率高于对照组。本研究证实了表达的融合蛋白具有一定的免疫原性,丰富了鲤疱疹病毒2型ORF5基因及基因组的研究,为研发制备新型鲤疱疹病毒2型的疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
短基因论文参考文献
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[3].张黎,田光玲,王伟松,蔡高峰,吴靖.猪细环病毒2型ORF1截短基因的原核表达[J].黑龙江畜牧兽医.2015
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论文知识图
