O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达

O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达

论文摘要

为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3扩增后进行酶切,用T4连接酶连接得到重组的真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3。对重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3进行PCR鉴定并测序。用脂质体将重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3转染BHK-21细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)及Western blot检测重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3,并在BHK-21细胞中得到表达。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 病毒、载体及细胞
  •     1.1.2 酶和相关试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 pVAX-VP0、pVAX-VP1、pVAX-VP3载体构建
  •     1.2.2 pVAX-VP0VP1VP3载体构建
  •     1.2.3 质粒的转染
  •     1.2.4 间接免疫荧光法检测pVAX-VP0VP1VP3的表达
  •     1.2.5 Western
  • 2 结果
  •   2.1 FMDV结构蛋白基因扩增
  •   2.2 pVAX-VP0、pVAX-VP1、pVAX-VP3载体构建与鉴定
  •   2.3 pVAX-VP0、pVAX-VP1、pVAX-VP3的扩增
  •   2.4 pVAX-VP0VP1VP3载体构建与鉴定
  •   2.5 重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3在BHK-21细胞中的表达
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李淑萍,孙世琪,莫亚霞,胡永浩,郭慧琛

    关键词: 口蹄疫病毒,重组真核表达载体,构建和表达,病毒样颗粒

    来源: 动物医学进展 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疾病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室

    基金: 动物重大疫病新概念防控产品研发项目(2017YFD0501100),牛羊重要疫病免疫防控新技术研究项目(2017YFD0500900)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16437/j.cnki.1007-5038.20180427.001

    页码: 1-6

    总页数: 6

    文件大小: 1655K

    下载量: 228

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