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新疆哈密地区原驼乳中乳酸菌多样性及产细菌素菌株的筛选

2020-12-02阅读(802)

新疆哈密地区原驼乳中乳酸菌多样性及产细菌素菌株的筛选

论文摘要

目的:骆驼乳及其乳粉作为新疆的特色乳品,由于其营养价值高、低敏、对部分病原体具有一定的拮抗作用和医疗保健作用等优点深受追捧。由于骆驼特殊的生存环境和饲喂方式,造就了驼乳独特的微生物菌群。驼乳中天然存在微生物不仅影响驼乳的营养,也对驼奶的消费者的健康存在潜在的影响。驼乳丰富的微生物也为筛选有效的乳酸发酵菌株和相关益生菌提供了独特的来源,研究驼乳中乳酸菌的构成和分布,对发酵驼乳制品的研发和利用具有潜在的价值。方法:本研究用三种选择性培养基对采集的新疆哈密地区骆驼原乳中乳酸菌进行分离培养,结合rep-PCR指纹图谱技术和16s rRNA测序技术将其鉴定到种的水平;然后,采取琼脂扩散法里牛津杯法筛选出具有高效广谱抗菌的乳酸菌菌株;最后,通过高通量测序技术分析原驼乳中微生物多样性,并与乳酸菌的培养法的研究结果进行对比。结论:1.对新疆哈密地区原驼乳进行传统分离培养后得到227株纯培养物,通过革兰氏染色和接酶触反应实验筛选出91株乳酸菌,根据16s rRNA基因序列测序技术结果统计,91株乳酸菌菌株属于Lactococcus、Leuconostoc、Enterococcus、Lactobacillus和Streptococcus 五个属11个种或亚种,而Leuconostoc属在总菌株数量中的百分比占到了36.26%,为原驼乳的优势乳酸菌属。2.采用牛津杯法,对筛选的乳酸菌菌株上清发酵液进行抑菌实验,选取的致病菌株包括Lister monocytoferes（李斯特菌）、Salmonella typhimurium（鼠伤寒沙门氏菌）、Salmonella enteric（肠炎沙门氏菌）、Lapactic Escherichiacoli（致泻大肠杆菌）、Enterotoxigenic Escherichiacoli（产肠毒素大肠杆菌）、Enterohemorrhagic escherichia coli（出血性大肠杆菌）,排除酸干扰后的结果显示HMT10-38、HMT17-12、HMT53-20、HMT61-40这4株乳酸菌对这6株指示菌有最显著的抑菌作用。蛋白酶酶解实验表明,4株乳酸菌发酵上清液中可能存在着细菌素或者其他具有抑菌作用的肽。3.高通量测序技术分析原驼乳中乳酸菌的多样性,结果显示有乳酸菌Lactococcus、Leuconostoc、Enterococcus、Lactobacillus和Streptococcus、Bacillus、Brochothrix共7个属,其中Leuconostoc和Lactococcus相对丰度较高。且鉴定出了Enterococcus、Ochrobactrum Staphylococcus、Pseudomonas四种潜在的致病菌,与传统分离技术进行对比结果比较接近。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩略词表
  • 第一章 文献综述
  •   1.1 驼奶的概述
  •     1.1.1 骆驼奶
  •     1.1.2 驼奶的营养价值
  •     1.1.3 驼奶中的微生物
  •     1.1.4 驼奶的研究和发展现状
  •   1.2 其他乳及乳制品
  •     1.2.1 山羊奶
  •     1.2.2 马奶及酸马奶
  •     1.2.3 牦牛奶
  •   1.3 乳酸菌
  •     1.3.1 乳酸菌定义
  •     1.3.2 乳酸菌的分类
  •     1.3.3 乳酸菌的益生功能与抑菌作用
  •   1.4 乳酸菌分离、鉴定技术
  •     1.4.1 rep-PCR技术
  •     1.4.2 16s rRNA 技术
  •     1.4.3 高通量测序技术
  •   1.5 研究目的及意义
  •   1.6 研究内容
  •   1.7 技术路线
  • 第二章 新疆哈密地区原驼乳中乳酸菌多样性研究
  •   2.1 引言
  •   2.2 实验材料
  •     2.2.1 样品的采集
  •     2.2.2 主要药品与试剂
  •     2.2.3 主要仪器和设备
  •     2.2.4 实验所用培养基
  •   2.3 实验方法
  •     2.3.1 乳酸菌的分离纯化
  •     2.3.2 菌种的保藏
  •     2.3.3 革兰氏染色观察法
  •     2.3.4 酶触实验观察法
  •     2.3.5 菌株的DNA提取
  •     2.3.6 菌株rep-PCR指纹图谱分析
  •     2.3.7 菌株16s rRNA序列分析
  •   2.4 实验结果
  •     2.4.1 原驼奶中可以培养的乳酸菌的分离结果
  •     2.4.2 可培养乳酸菌细菌的形态特征
  •     2.4.3 乳酸菌rep-PCR指纹图谱分析
  •     2.4.4 部分菌株16s rRNA扩增检测结果
  •     2.4.5 部分菌株16s rRNA基因序列测序结果
  •     2.4.6 基于部分菌株16s rRNA基因序列构建系统发育树
  •   2.5 本章小结
  • 第三章 新疆哈密地区原驼奶中乳酸菌的抑菌活性
  •   3.1 引言
  •   3.2 实验材料
  •     3.2.1 实验菌株来源
  •     3.2.2 主要使用的仪器
  •     3.2.3 指示菌
  •     3.2.4 所需培养基
  •   3.3 实验方法
  •     3.3.1 对实验所用乳酸菌发酵液的制备
  •     3.3.2 指示菌菌悬液的制备
  •     3.3.3 采用牛津杯法进行抑菌实验
  •     3.3.4 乳酸菌的复筛
  •   3.4 结果与分析
  •     3.4.1 具有抑菌作用的乳酸菌初筛结果
  •     3.4.2 乳酸菌抑菌作用的复筛结果
  •   3.5 本章小结
  • 第四章 驼乳菌群结构的高通量测序及分析
  •   4.1 引言
  •   4.2 实验材料
  •     4.2.1 实验样品来源
  •     4.2.2 主要药品与试剂
  •     4.2.3 主要仪器和设备
  •   4.3 实验方法
  •     4.3.1 总DNA提取
  •     4.3.2 16S rDNA扩增及测序
  •     4.3.3 高通量测序法及测序结果分析
  •   4.4 实验结果
  •     4.4.1 乳酸菌多样性分析
  •     4.4.2 驼乳中细菌多样性分析
  •     4.4.3 不同驼乳样品间的p多样性分析
  •   4.5 本章小结
  •     4.5.1 培养法和免培法分析原驼乳中乳酸菌多样性的比较
  •     4.5.2 驼奶中微生物群落结构
  •     4.5.3 驼奶中潜在的治病菌
  • 第五章 绪论与展望
  •   5.1 结论
  •   5.2 展望
  •   5.3 本文的创新点
  • 参考文献
  • 致谢
  • 作者简介
  • 石河子大学硕士研究生学位论文 导师评阅表

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 张苗苗

    导师: 倪永清

    关键词: 原驼乳,乳酸菌多样性,基因序列,高通量测序

    来源: 石河子大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 石河子大学

    分类号: TS201.3

    总页数: 66

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