巢国正[1]2003年在《大鼠乳腺局部免疫调节机制的研究》文中进行了进一步梳理本研究采用组织学、组织化学和免疫组化染色技术，比较了正常生理状态下大鼠乳腺在不同生理时期相关免疫细胞的形态结构和数量分布的动态变化规律，以探讨乳腺局部免疫的调节机制。 研究结果显示：①乳腺中只存在黏膜型肥大细胞(MMC)，没有结缔组织型肥大细胞(CTMC)；肥大细胞大小在泌乳期与静止期没有明显的不同(P＞0.05)，但形态特点有所不同，泌乳期肥大细胞功能活跃，脱颗粒细胞比静止期多；而静止期乳腺肥大细胞数比泌乳期的多(P＜0.01)，分别为2.8±0.9和9.9±1.8个／视野(40倍物镜下，下同)。②泌乳期和静止期乳腺中淋巴细胞数分别为11.7±2.1和19.6±3.0个／视野，差异显着(P＜0.05)；ANAE~+T细胞数量变化比淋巴细胞更明显，泌乳期和静止期分别为6.7±0.2和11.4±0.6个／视野，差异极显着(P＜0.01)。③泌乳期和静止期乳腺中CD4~+T细胞和CD8~+T细胞的形态特征没有明显变化；CD4~+T细胞数分别为3.1±0.8和4.4±0.4个／视野，无显着性差异(P＞0.05)；CD8~+T细胞数分别为1.3±0.3和2.7±0.5个／视野，静止期比泌乳期显着增多(P＜0.05)；CD4~+／CD8~+比值分别为2.4和1.6，静止期下降；④泌乳期和静止期外周血中淋巴细胞数分别为1.6±0.4和1.5±0.7个／视野，ANAE~+T细胞数分别为1.1±0.3和0.8±0.2个／视野，差异均不显着(P＞0.05)。⑤泌乳期和静止期乳腺中浆细胞数分别为1.3±0.3和1.3±0.4个／视野，差异不显着(P＞0.05)；而IgA~+浆细胞数分别为1.24±0.2和0.8±0.1个／视野，差异显着(P＜0.05)。 上述结果提示，大鼠乳腺的局部免疫特性属于黏膜免疫，且乳腺的局部免疫状态相对机体的全身免疫具有一定的独立性，在生理周期中发生明显的改变，泌乳期乳腺局部免疫水平高于静止期。
朱于敏[2]2006年在《CpG-ODN对两种病原菌分别诱导的动物乳腺炎乳腺的保护研究》文中研究指明本文通过采用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别建立了大鼠的乳腺炎动物模型；并通过免疫调节剂CpG-ODN探索了其对大鼠乳腺局部、整体的防御体系及炎症相关因子的影响，并初步探讨了CpG-ODN的作用机制；并在此基础上将CpG-ODN应用于山羊，进一步印证了其对乳腺健康的有效保护作用及对乳腺炎的预防作用，为乳腺炎的生物防治提供了一条新思路。 1 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别诱导的大鼠实验性乳腺炎模型的建立 30只饲喂基础日粮的泌乳初期SD雌性大鼠随机分成五组(n=6)，产后72 h分别用灭菌0.01 mol·L~(-1)，pH 7.2 PBS(CON组)、低浓度(2×10~5CFU·mL~(-1)，SL组)和高浓度(2×10~(12)CFU·mL~(-1)，SH组)金黄色葡萄球菌，低浓度(2×10~5CFU·mL~(-1)，EL组)和高浓度(2×10~(12)CFU·mL~(-1)，EH组)大肠杆菌各100 μL，经乳头管灌注到大鼠第四对乳腺内(双侧)，灌注后24 h颈静脉放血处死。取部分乳腺组织进行组织学观察。SL和EL组的乳腺病变不明显，仅见腺泡腔内乳汁分泌量减少，SH组和EH组的乳腺腺泡结构破坏严重，腺泡腔内有脱落的上皮细胞，并有较多的嗜中性粒细胞(Polymorpho-nuclear neutrophils，PMN)浸润。SH和EH组乳腺组织中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)水平均有显着(P＜0.05)升高，血清TNF-α和IL-6水平无显着性变化。SH和EH组乳腺组织N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase，NAGase)活性均极显着(P＜0.01)升高，血清NAGase活性极显着(P＜0.01)下降。SL和EL组的上述指标均无显着性变化。由结果可知2×10~(12)CFU·mL~(-1)的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别成功地诱发了大鼠的乳腺炎。 2 肌肉注射CpG-ODN对金黄色葡萄球菌诱导的大鼠实验性乳腺炎乳腺的保护作用研究 72只泌乳初期SD雌性大鼠随机分成对照组和实验组(n=36)，对照组产后0 h于左后腿胫骨前肌内注射100μL0.01mol·L~(-1)，pH 7.2 PBS；实验组肌注CpG-ODN 200μg／只，72 h后经乳导管灌注2×10~(12)CFU·mL~(-1)金黄色葡萄球菌各100 μL／侧到第四对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为0 h)，灌注后8，16，24，48和72 h(n=6)颈静脉放血处死。组织学观察显示乳腺腺泡内PMN浸润高峰出现在感染后24 h，感染初
钟凯[3]2005年在《动物乳腺炎的人工诱导及黄芪多糖等对乳腺的保护研究》文中进行了进一步梳理本文通过建立的动物模型，探讨了内毒素人工诱发乳腺炎时，动物乳腺局部及整个机体免疫功能的变化；并通过分别给动物应用谷氨酰胺和黄芪多糖，探索其在动物发生实验性乳腺炎时，对乳腺局部免疫和机体免疫功能的影响；本实验还在奶牛上人工诱发了实验性乳腺炎，初步探讨了奶牛乳腺炎发病过程中的免疫机理和黄芪多糖对乳腺的保护作用。 1．乳房内灌注内毒素诱发大鼠实验性乳腺炎模型的建立 20只SD受孕大鼠随机分成正常对照组(n=5)和实验组(n=15)，产后72h分别用灭菌生理盐水(physiological saline solution，PSS)和不同剂量(5μg、10μg、50μg)的大肠杆菌内毒素经乳头管灌注到大鼠第四对乳腺内(各剂量5只)，灌注后24h处死大鼠，取乳腺组织固定，进行组织学观察，测定了血清及乳腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、分泌型IgA(sIgA)的含量及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的活力变化。组织病理学观察显示：灌注5μg和10μg内毒素组的大鼠乳腺组织结构不清，但仍可辨认，腺泡腔内出现中性粒白细胞(PMN)；灌注50μg内毒素组的大鼠乳腺组织破坏得更为严重，乳腺组织结构消失，乳腺为大量密集的PMN浸润。与对照组相比，灌注50μg内毒素组的大鼠乳腺组织中TNF-α、sIgA含量及NAGase活力显着升高(P＜0.05)；血清中sIgA含量显着高于正常对照组(P＜0.05)。实验各组大鼠血清中TNF-α含量无显著变化(P＞0.05)，而NAGase活力显着低于正常对照组(P＜0.05)。组织学观察及生化指标测定结果表明，乳头管灌注内毒素诱发大鼠实验型乳腺炎动物模型成功建立。 2．谷氨酰胺对内毒素诱发大鼠实验性乳腺炎的影响 35只SD受孕大鼠随机分成正常对照组(Con，n=5)、阳性对照组(P，n=15)和实验组(T，n=15)。阳性对照组与实验组内分为3个剂量组，分别为P_1、P_2、P_3、T_1、T_2和T_3组。实验组大鼠每天按0.34mmol·kg~(-1)。灌喂谷氨酰胺(glutamine，Gln)，直至实验结束，而对照组大鼠灌喂相应体积的生理盐水(PSS)。孕鼠于产后72h，分别用灭菌PSS和不同剂量(5μg、10μg、50μg)的大肠杆菌内毒素经乳头管灌注到大鼠第四时乳腺内。灌注后24h处死大鼠，取乳腺组织固定，进行组织学观察。观察显示3
苗晋锋[4]2008年在《卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对内毒素（LPS）诱发实验性乳腺炎影响的研究》文中指出本研究首先以山羊为实验动物,利用LPS诱发山羊乳腺炎症,研究BCG-PSN对其乳腺防御系统的影响和保护作用;然后在LPS诱发的大鼠实验性乳腺炎模型上深入揭示BCG-PSN通过免疫调理作用,激活动物乳腺防御体系,保护乳腺的作用机理;并在体外初步研究了BCG-PSN对泌乳奶牛外周血嗜中性粒细胞(PMN)功能的影响.结果如下:1内毒素对山羊乳腺中炎症相关因子活性的影响8只泌乳初期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用LPS(实验组)和灭菌生理盐水(对照组)经乳头管灌注左、右侧乳区.灌注前及灌注后1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊全身及乳腺局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bouin氏液固定,部分-70℃保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现出典型的急性乳腺炎症状.检测乳腺组织中部分炎症相关因子的含量及基因表达水平,结果显示,与对照组相比,实验组N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-Acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGase)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOs)活性及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量显着升高(P＜0.01);相同条件下对两种处理组织样中叁种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增,实验组能检测到明显的目的条带,而对照侧未见明显目的条带。提示LPS灌注引起的乳腺组织中炎性细胞因子及炎症相关酶的过度释放是造成山羊乳腺损伤的原因.2卡介菌多糖核酸对实验性乳腺炎山羊乳腺组织的保护研究泌乳初期健康睢宁白山羊6只,左乳区(实验组)经乳头管灌注卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid of Bacillus Guerin,BCG-PSN)5 mL,右乳区(对照组)灌入等量生理盐水作为对照,连灌6天.第7天按50μg/kg体重分别向左、右乳区灌注LPS.灌注前及灌注后1、2、3、4、5、6、7、8、9,24 h观察山羊全身及乳腺局部变化。灌注24h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bouin氏液固定、部分-70℃保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.与对照组相比,乳腺灌注BCG-PSN能显着降低乳腺组织中部分炎症相关因子的含量及其基因表达水平.其中NAGase、MPO、iNOs活性显着降低(P＜0.05);TNF-α、IL-1β的含量及其mRNA表达水平均显着降低(P＜0.05),IL-6的含量显着降低(P＜0.05),其mRNA表达水平有所降低但差异不显着(P＞0.05).实验结果表明,灌注BCG-PSN可以抑制乳腺组织内TNF-α、IL-1β等炎性细胞因子及炎症相关酶的过度释放、减轻炎症因子对乳腺组织的损伤,对LPS诱发山羊乳腺炎有一定的保护作用.3卡介菌多糖核酸对实验性乳腺炎大鼠乳腺组织的保护研究为探讨BCG-PSN对LPS诱导实验性动物乳腺炎的保护机制,72只清洁级SD大鼠被随机分成实验组和对照组(n=36)。确定怀孕14 d起,隔日左后腿胫骨前肌肌内注射BCG-PSN(实验组)或灭菌生理盐水(对照组)0.33 ml/只,连续五次;产后72h经乳头管灌注LPS 10μg/侧到第四对乳腺(两侧)内.分别于灌注前(定义为0 h)及灌注后3、6、9、12和24 h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品.组织病理学观察显示,BCG-PSN加快了LPS诱发炎症的组织修复进程,促进了炎症后期泌乳量的恢复。酶活性检测结果显示,NAGase、iNOs活性在乳腺组织中和血清中变化规律相反;组织中两种酶活性,实验组和对照组均分别在6 h、9 h达到最高,血清中NAGase活性实验组12 h、对照组9 h最低,iNO活性分别在6 h、3h最低.放射免疫检测结果显示,同对照组相比,BCG-PSN使乳腺组织中炎症相关细胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6的峰值降低,出峰时间前提,而血清中这叁种细胞因子均未表现出明显的变化.定量RT-PCR结果显示,BCG-PSN能降低乳腺组织中Toll样受体-4(toll-likereceptor-4,TLR-4)mRNA表达水平,实验组与对照组相比,第6、9、24 h差异显着,实验结果说明,BCG-PSN可以通过降低TLR-4的表达,抑制炎性细胞因子及酶的过度分泌,从而缓解LPS及相关因子对乳腺组织的损伤,达到保护乳腺的目的.4卡介菌多糖核酸对实验性乳腺炎大鼠的免疫调节机理研究为探讨BCG-PSN对LPS诱导的实验性乳腺炎大鼠免疫功能的调节机理,72只清洁级SD大鼠被随机分成实验组和对照组(n=36).确定怀孕14天起,隔日左后腿胫骨前肌肌内注射BCG-PSN(实验组)或灭菌生理盐水(对照组)0.33ml/只,连续五次;产后72h经乳头管灌注LPS 10μg/侧到第四对乳腺(两侧)内.分别于灌注前(定义为0 h)及灌注后3、6、9、12和24 h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。PMN标志酶MPO活性检测结果显示,乳腺组织中MPO活性实验组在第6 h达到高峰,而对照组一直到24 h仍维持较高水平,和对照组相比,BCG-PSN显着降低了12、24 hMPO的活性;血清中MPO活性12 h最低。灌注后,组织中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)含量迅速升高,实验组和对照组均在24 h达到峰值,同灌注前相比差异显着;实验组在0和24 h显着高于对照组。流式细胞检测结果显示,BCG-PSN在一定程度上提高了0 h外周血中细胞毒性T淋巴细胞(CD8+)细胞数量;同0 h相比,对照组在24 h CD4+/CD3+显着下降,CD8+/CD3+显着升高,因而CD4+/CD8+显着下降;而实验组无明显变化。定量RT-PCR结果显示,IL-2和干扰素-γ(interferon-γ,INF-γ)mRNA表达,实验组和对照组表现出相同的变化规律,LPS灌注后上升,后有所恢复;白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)mRNA表达实验组和对照组表现出不同的变化规律,对照组,同0 h相比,第3、6 h显着下降,然后恢复到正常的水平,实验组第3 h显着高于0 h而后迅速下降,其中第9 h降低明显;BCG-PSN抑制了INF-γ/IL-4 mRNA表达相对比值的升高.实验结果表明,BCG-PSN在炎症初期加快了PMN向乳腺内迁徙,而在炎症后期促进了机体对PMN的清除;在乳腺灌注LPS后抑制了CD4+/CD8+比值的下降,INF-γ/IL-4 mRNA表达相对比值的升高,维持了T淋巴细胞各亚群数量与功能的平衡.提示BCG-PSN可以通过调节大鼠乳腺防御系统内的特异性及非特异性免疫因子,对乳腺产生保护.5卡介菌多糖核酸对泌乳奶牛外周血PMN吞噬功能及活性氧释放的影响为探讨BCG-PSN对泌乳奶牛外周血PMN吞噬功能及活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)释放的影响,选取处于泌乳初期的健康奶牛,无菌采集颈静脉血,肝素抗凝.(1)不同浓度的BCG-PSN(终浓度分别为0、2、5、10、40、80μg/mL)与全血共孵育2 h,加入FITC标记的大肠杆菌悬液10μL,37℃20min后,放入冰水中终止吞噬反应;溶血素裂解红细胞,0.01mol/L、pH7.2 PBS洗涤两次,重悬后FL1通道检测PMN对大肠杆菌的吞噬率.(2)不同浓度的BCG-PSN(终浓度分别为0、2、5、10、40、80μg/mL)与全血共孵育2 h后,加入乙酸肉豆蔻佛波酯(phorbol myrisateacetate,PMA)刺激PMN,其中PMA刺激的终浓度为100ng/mL,同时每个浓度梯度设无PMA刺激对照(等量PBS代替PMA);37℃作用15min后加入双氢罗丹明123(dihydrorhodamine 123,DHR 123),终浓度为5μM,然后37℃孵育10min;溶血素裂解红细胞,0.01mol/L、pH7.2 PBS洗涤两次,多聚甲醛固定、重悬后流式细胞仪检测.实验结果显示,BCG-PSN可以降低PMA刺激引起的PMN的ROS的大量释放,且这种抑制呈剂量依赖性降低;而对PMN的吞噬功能没有明显的影响.结果说明BCG-PSN对PMN功能的影响不是通过直接影响其吞噬功能发挥作用;而降低炎症反应时PMN氧自由基的过度产生是BCG-PSN减轻机体炎症反应的原因之一.提示,BCG-PSN对奶牛乳腺炎的免疫生理调控有潜在的应用价值.综上所述,BCG-PSN通过调节乳腺防御系统内的特异性与非特异性防御因素、TLR-4及相关炎性因子,减轻LPS诱导造成的乳腺组织损伤。本研究证实,BCG-PSN作为免疫生理调节剂在动物乳腺炎防控中有潜在的应用前景
顾蓓蓓[5]2010年在《视黄醇对脂多糖诱导的大鼠乳腺炎症反应的调节及机制研究》文中研究说明本实验选用健康SD大鼠,利用LPS诱发试验性大鼠乳腺炎模型,研究多功能营养素视黄醇对大鼠乳腺防御机能的影响和保护作用；并建立原代培养的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应模型,进一步在体外研究了视黄醇对大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的调节机制。1视黄醇对试验性乳腺炎大鼠的保护作用研究为研究视黄醇对LPS诱发的试验性乳腺炎大鼠的保护作用,40只清洁级SD孕鼠随机分为正常对照组(NC,n=8)、阳性对照组(PC,n=8)和试验组(T,n=24)。自怀孕第十天起,试验组分别灌胃视黄醇(溶解于大豆油)4000 I.U/kg·d(L, n=8)、8000 I.U/kg·d(M, n=8)、16000 I.U/kg·d (H, n=8),对照组灌胃等量的大豆油,连续灌胃十天。产后72 h分别灌注灭菌生理盐水和10μg/侧LPS到大鼠第四对乳腺(两侧)内,12 h处死大鼠,收集血清及乳腺组织样品。LPS灌注乳腺12 h后,乳腺组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase, NAGase)活性,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-8(interleukin-8, IL-8)均显着升高,血清中MPO、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、总抗氧化能力(total anti-oxidizing capability, T-AOC)及乳腺组织中白细胞介素-2 (interleukin-2, IL-2)水平显着降低。与阳性对照组相比,灌胃视黄醇显着降低乳腺组织中MPO、NAGase的活性及TNF-α水平,显着提高血清中IL-2水平；低、中剂量视黄醇能降低中性粒细胞(neutrophil,PMN)在乳腺组织中的浸润,提高血清SOD活性及T-AOC,改善因LPS引起的外周血T淋巴细胞CD4+与CD8+比值的失衡。结果证实视黄醇对LPS诱发的试验性乳腺炎大鼠有一定的保护作用。2视黄醇对试验性乳腺炎大鼠炎性细胞因子释放的影响为探讨视黄醇对试验性乳腺炎大鼠炎性细胞因子释放的调节作用机制,72只清洁级SD怀孕大鼠被随机分成对照组(C,n=36)和试验组(T,n=36)。怀孕第十天起,每天灌胃视黄醇8000I.U/kg·d(溶解于大豆油),连续灌胃十天；对照组灌胃等体积的大豆油。产后72 h经乳头管灌注LPS 10μg/侧到第四对乳腺(两侧)内,分别于灌注前(定义为0 h)及灌注后2、4、8、16和24 h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。试验结果显示,视黄醇处理显着降低了LPS灌注后乳腺组织中Toll样受体-4(toll-like receptor-4, TLR-4)、核转录因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB) p65 mRNA表达,显着抑制NF-κB与DNA的结合活性,显着降低乳腺组织中(?)(?)NF-α与白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的释放。结果表明,灌胃视黄醇通过降低TLR-4 mRNA的表达,抑制NF-κB p65 mRNA表达及NF-κB与DNA的结合活性,抑制其下游相关炎症因子TNF-α及IL-1β的过度释放,减轻炎症因子对乳腺组织的损伤。3视黄醇对试验性乳腺炎大鼠中性粒细胞活性的影响为探讨视黄醇对试验性乳腺炎大鼠中性粒细胞活性的影响,72只清洁级SD怀孕大鼠被随机分为对照组(C,n=36)和试验组(T,n=36)。怀孕第十天起,每天灌胃视黄醇8000 I.U/kg·d(溶解于大豆油),连续灌胃十天；对照组灌胃等体积的大豆油。产后72 h经乳头管灌注LPS 10μg/侧到第四对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为O h)及灌注后2、4、8、16和24 h(n=6)颈静脉放血处死动物,采集样品。MPO活力及组织病理学观察显示,视黄醇加快了LPS诱发炎症的组织修复进程,降低PMN在组织中的积聚与持续激活,显着降低LPS灌注后IL-8的释放,降低乳腺组织与血清中NAGase活力,促进细胞间粘附分子-1 (intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)的优先表达,降低外周血PMN活性氧的释放。试验结果表明,灌胃视黄醇能调节PMN活性,加快PMN的动态迁徙,降低其活性氧的过度释放,对PMN引起的氧化应激具有一定的保护作用。4大鼠乳腺上皮细胞的优化培养及其炎症反应模型的建立乳腺上皮细胞是乳腺组织的功能细胞,在受到病原微生物刺激时,乳腺上皮细胞也可产生“自主”抵抗。本研究旨在优化大鼠乳腺上皮细胞培养体系,并建立其炎症反应模型,为进一步深入研究动物乳腺防御机制奠定基础。选择妊娠15-18天的健康SD大鼠,无菌采集乳腺组织,分离大鼠乳腺上皮细胞。结果表明通过胶原酶和透明质酸酶联合消化能成功分离大鼠乳腺上皮细胞,并且在添加了胰岛素、转铁蛋白、表皮生长因子、氢化可的松等营养因子的DMEM/F12培养液中生长情况良好。对角蛋白及β-酪蛋白的鉴定结果表明,通过此法分离培养的大鼠乳腺上皮细胞纯度在95%以上,并具备较好的生物学功能。LPS刺激细胞24 h,TNF-α、IL-1p及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS) mRNA表达均极显着升高,并且LPS刺激浓度在1-10μg/mL范围内呈现剂量依赖效应,由于细胞毒性的作用20μg/mL LPS处理时上述细胞因子的表达有轻微下降,但仍显着高于对照组。10μg/mL LPS刺激显着提高TNF-αIL-1β、一氧化氮(nitric oxide, NO)(?)的释放。结果表明,本试验成功建立了大鼠乳腺上皮细胞原代培养体系及其炎症反应模型。5视黄醇对试验性诱发的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的调节及机制研究为进一步研究视黄醇对原代培养的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的调节及机制,分离并原代培养大鼠乳腺上皮细胞,待细胞铺满整个培养瓶的90%,分为对照组和试验组,试验组于基础培养液中添加1μmol/L视黄醇(溶解于DMSO),对照组于基础培养液中添加等量的DMSO,处理24 h后更换培养液,用10μg/mL的LPS处理细胞,分别于不同时间点收集细胞。LPS能显着上调大鼠乳腺上皮细胞TLR-4蛋白水平及NF-κB与DNA的结合活性,而视黄醇处理能显着降低LPS处理后TLR-4蛋白水平,极显着降低NF-κB与DNA的结合活性。LPS处理大鼠乳腺上皮细胞后引起各个时间点炎性因子TNF-α、IL-1β、中性粒细胞趋化因子-1 (cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1, CINC-1)、iNOS、ICAM-1 mRNA表达极显着的升高,视黄醇能显着下调2.4,8,12h TNF-αmRNA表达,2,4,8hIL-1βmRNA表达及8,12 h iNOS、ICAM-1 mRNA表达,而对CINC-1 mRNA表达无显着影响。试验结果表明,视黄醇预处理通过下调TLR-4/NF-κB信号途径减轻LPS介导的大鼠乳腺上皮细胞的炎症反应。综上所述,视黄醇能增强大鼠乳腺防御机能,通过下调TLR-4/NF-κB信号途径,抑制中性粒细胞在组织中持续激活,减轻炎性相关因子造成的乳腺组织损伤。本研究证实,视黄醇作为营养免疫生理调节剂在动物乳腺炎防控中有潜在的应用前景。
张大松[6]2006年在《CpG-ODN对两种病原菌联合诱导的大鼠实验性乳腺炎保护作用的研究》文中指出本文通过建立的实验动物(大鼠)模型，探讨了同时采用金黄色葡萄球菌和大肠杆菌人工诱发乳腺炎时，大鼠乳腺局部及整个机体免疫功能的变化；并通过给大鼠注射免疫增强剂CpG-ODN，探索其在大鼠发生实验性乳腺炎时，对乳腺局部免疫和机体免疫功能的影响。 1．两种病原菌联合诱导大鼠实验性乳腺炎的研究 18只饲喂基础日粮的泌乳初期SD雌性大鼠随机分成叁组(n=6)，产后72h分别用灭菌0.01mol·L~(-1)，pH7.2PBS(CON组)、低浓度组(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在混悬液中的浓度都为1×10~5CFU·mL~(-1)，L组)和高浓度(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在混悬液中的浓度都为1×10~(12)CFU·mL~(-1)，H组)，经乳头管灌注到大鼠第四对乳腺内，灌注后24h颈静脉放血处死。取部分乳腺组织进行组织学观察。低浓度(L组)乳腺的病变主要以腺泡上皮发生轻度的脂肪变性，腺泡腔的分泌物中有透明滴状物为主要特征，高浓度(H组)的乳腺腺泡结构破坏严重，腺泡中有较多的嗜中性粒细胞浸润。实验组乳腺和血清IL-1β水平较对照组均有所升高，其中H组乳腺和血清IL-1β水平分别极显著(P＜0.01)和显着(P＜0.05)高于对照组。L组乳腺和血清IL-6水平较对照组均有所升高，但差异不显着，H组乳腺IL-6则有显着(P＜0.05)下降，H组血清IL-6水平则极显着(P＜0.01)低于对照组；实验组组乳腺TNF-α水平均高于对照组，其中L组升高差异不显着，H组乳腺则极显着高于对照组(P＜0.01)，血清TNF-α水平均下降，其中L组下降差异不显着，H组则极显着(P＜0.01)低于对照组。实验组乳腺NAGase活性均高于对照组，其中H组极显着(P＜0.01)高于对照组；实验组血清NAGase活性均低于对照组，其中H组极显着(P＜0.01)下降。H组乳腺和血清MPO活力均显着(P＜0.05)高于对照组。实验组乳腺白蛋白含量均高于对照组，其中H组乳腺白蛋白显着高于对照组(P＜0.05)，L组血清白蛋白含量高于对照组，H组血清白蛋白显着低于对照组(P＜0.05)。由上述结果可知高低浓度的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌联合诱导的大鼠乳腺炎模型均已成功建立。 2．CpG-ODN对两种细菌联合诱导的大鼠实验性乳腺炎的作用研究
朱玮[7]2011年在《β-葡聚糖增强大鼠乳腺上皮细胞的自主防御及其机制研究》文中研究表明本实验选用健康SD大鼠,旨在利用LPS诱发实验性大鼠乳腺炎模型,研究p-葡聚糖对大鼠乳腺防御机能的影响和保护效应；在此基础上,揭示大鼠乳腺上皮细胞对LPS作用的自主防御反应,并深入研究和阐明β-葡聚糖增强大鼠乳腺上皮细胞自主防御的作用以及机制。结果如下：1β-葡聚糖通过激活Dectin1对人工诱导实验性乳腺炎大鼠的保护利用LPS诱导的实验性乳腺炎大鼠模型研究β-葡聚糖对动物乳腺的保护。自怀孕第10天起,实验组大鼠灌喂生理盐水(阳性对照组,PC,n=8)、0.1mg/kg·dβ-葡聚糖(低剂量组,PL, n=8)、1mg/kg·d β-葡聚糖(中剂量组,PM,n=8)、10mg/kg·β-葡聚糖(高剂量组,PH,n=8),对照组大鼠灌喂生理盐水(阴性对照组,NC,n=8),连续灌喂10天。产后72h分别灌注灭菌生理盐水至对照组和10μg/侧LPS到实验组大鼠第四对乳腺(两侧)内,12h后处死大鼠,采集乳腺组织和血清用于相关指标的测定和分析。结果表明：LPS能显着增加大鼠乳腺Dectin1(P<0.05)和TLR4(P<0.05)的mRNA和蛋白的表达水平；显着增加大鼠乳腺及血清中肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)(P<0.05)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)(P<0.05)勺浓度,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acety1-β-D-glucosaminidase, NAGase)(P<0.05)、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase, iNOs)(P<0.05)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)(P<0.05)勺活性。与阳性对照组相比,灌喂β-葡聚糖能显着增强Dectin1的mRNA和蛋白的表达,降低TLR4的mRNA和蛋白的表达；降低大鼠乳腺及血清中TNF-α、IL-1β的浓度,大鼠乳腺NAGase、iNOs、MPO的活性,但能提高大鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)的浓度。形态学观察也发现,β-葡聚糖处理组的乳腺腺泡内仅见少量的PMN浸润,且乳腺的泌乳功能得以恢复。结果显示,β-葡聚糖能通过激活Dectin1受体最终产生对实验性乳腺炎大鼠的保护效应。2大鼠乳腺上皮细胞对LPS的自主防御反应与β-葡聚糖的保护效应研究利用LPS与原代培养的大鼠乳腺上皮细胞共孵育研究乳腺上皮细胞的自主防御反应和p-葡聚糖产生的保护效应。设置实验组为阳性对照组(PC,等量DMSO,n=5)、低剂量组(PL,1μg/mL β-葡聚糖,n=5)、中剂量组(PM,5μg/mL β-葡聚糖,n=5)、高剂量组(PH,25μg/mL β-葡聚糖,n=5)以及阴性对照组(NC,等量DMSO, n=5),处理细胞12h。更换无血清培养液,10μg/mLLPS处理实验组细胞40min,收集细胞及细胞液。与阴性对照组相比,LPS能显着提高CD14(P<0.05)、MD2(P<0.05)的mRNA表达；显着提高TLR4(P<0.05)的mRNA和蛋白表达；显着提高MyD88(P<0.05)、Dectin1(P<0.05)的蛋白表达；显着降低IκBα(P<0.05)、β-casein (P<0.05)的蛋白表达；显着提高NF-κB的转录活性(P<0.05)；显着提高TNF-α (P<0.05)和IL-1β(P0.05)的浓度。与阳性对照组相比,所有剂量组β-葡聚糖能显着降低CD14(P <0.05)、MD2(P<0.05)的mRNA表达；低剂量组和高剂量组β-葡聚糖能显着降低TLR4(P<0.05)、MyD88(P<0.05)的蛋白表达；所有剂量组β-葡聚糖能显着提高Dectin1(P<0.05)mRNA和蛋白表达；所有剂量组β-葡聚糖能显着提高Syk (P<0.05)及β-casein (P<0.05)的蛋白表达；中剂量组和高剂量组能显着提高IκBα(P<0.05)的活性及显着降低NF-κB(P<0.05)的转录活性；所有剂量组β-葡聚糖能显着渐少TNF-a(P<0.05)和IL-1β(P<0.05)的分泌。结果表明LPS能上调大鼠乳腺上皮细胞TLR4/MyD88/IκBα(-)/NF-κB通路,p-葡聚糖则能通过上调Dectin1/Syk/IκBα(-)通路,下调TLR4/MyD88/IκBa(-)通路,降低NF-κB的转录活性,减少炎性细胞因子的分泌,恢复乳腺上皮细胞β-casein的分泌水平,并具有剂量依赖性。3β-葡聚糖对大鼠乳腺上皮细胞自主防御信号通路相关蛋白表达时序的影响利用LPS与原代培养的大鼠乳腺上皮细胞共孵育研究β-葡聚糖调节大鼠乳腺上皮细胞自主防御的信号通路,并分析通路相关蛋白表达的时序。设置实验组加入5μg/mLβ-葡聚糖,对照组加入等量DMSO处理细胞12h。更换无血清培养液,10μg/mLLPS处理所有细胞0、0.5及1h,于各个时间点收集细胞及细胞培养液。相比0h对照组,LPS作用0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)能显着提高乳腺上皮细胞TLR4、MyD88、及Syk的蛋白表达,且TLR4及MyD88的表达在0.5h达到峰值；LPS作用0.5h(P<0.01)、1h(P<0.01)能极显着降低IκBα勺表达；LPS作用0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)显着提高NF-κB的转录活性；LPS作用0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)显着提高TNF-a约浓度且在0.5h达到峰值。与对应时间点对照组相比,β-葡聚糖能显着降低LPS共孵育0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)的乳腺上皮细胞MyD88的蛋白表达；显着提高0.5h(P<0.05) Dectin1的蛋白表达；显着提高0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)Syk及IκBα的蛋白表达；显著降低0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)NF-κB的转录活性；显着降低0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)TNF-α的分泌。此外,LPS作用0.5h能极大增强乳腺上皮细胞TLR4的荧光表达,β-葡聚糖能极大增强LPS作用0.5h乳腺上皮细胞Dectin1的荧光表达。LPS能通过激活大鼠乳腺上皮细胞TLR4的表达,促进胞内适应子蛋白MyD88的活化,从而激活NF-κB的转录活性；β-葡聚糖能通过激活大鼠乳腺上皮细胞Dectin1的表达,激活胞内Syk的活性并拮抗胞内适应子蛋白MyD88的活化,降低NF-κB的转录活性,减少炎性细胞因子的分泌。4β-葡聚糖调节大鼠乳腺上皮细胞TLR-4及Dectin1信号通路的机理研究分别用TLR-4抑制剂5μmol/L、Syk抑制剂150nmol/L以及NF-κB抑制剂10μmol/L预处理原代培养的大鼠乳腺上皮细胞2h,更换无血清培养液。实验分组设置为：对照组加入等量DMSO,实验组1单独加入5μg/mL β-葡聚糖,实验组2加入等量DMSO及实验组3加入5μg/mL β-葡聚糖,处理细胞12h。再更换无血清培养液,对照组加入等量DMSO,实验组1加入等量DMSO,实验组2单独加入10μg/mL LPS及实验组3加入10μg/mL LPS,所有细胞处理0、0.5、1及2h,收集细胞及细胞培养液。研究p-葡聚糖、LPS对3种抑制剂预处理的乳腺上皮细胞的影响,重点分析相关信号通路发生的变化。在TLR4被抑制条件下,相比0h对照组,实验组1能显着提高所有时间点Syk(P<0.05)的蛋白表达及0h(P<0.05)、0.5h(P<0.05)及1h(P<0.05)Dectin1(P<0.05)的蛋白表达,且都在1h达到峰值；实验组2能显着提高所有时间点TLR-4(P<0.05)及MyD88(P<0.05)的蛋白表达,其中TLR-4在0.5h达到峰值,MyD88在1h达到峰值,显着降低Oh(P<0.05)及0.5h(P<0.05)IκBα的表达,极显着提高所有时间点NF-κB(P<0.01)的转录活性且保持稳定,显着提高0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)TNF-α和1h(P<0.05)IL-1β的浓度；实验组3能显着提高所有时间点Dectin1(P<0.05)的蛋白表达,显着提高0h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)Syk的蛋白表达,显着提高所有时间点NF-κB(P<0.05)的转录活性,其中0.5h(P<0.01)及1h(P<0.01)差异极显着。与同时间点实验组2进行比较,实验组1所有时间点Syk(P<0.05)的蛋白表达及0h(P<0.05)、0.5h(P<0.05)及1h(P<0.05)Dectin1(P<0.05)的蛋白表达显着提高,所有时间点TLR-4(P<0.05)及MyD88(P<0.05)的蛋白表达显着降低,0h(P<0.05)及0.5h(P<0.05)IkBα的表达显著提高,所有时间点NF-κB(P<0.01)的转录活性极显着降低,0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)TNF-α和1h(P<0.05)IL-1β的浓度显著降低；实验组3所有时间点Dectin1(P<0.05)的蛋白表达及0h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)Syk的蛋白表达显着提高,0h(P<0.05)及2h(P<0.05) NF-κB (P<0.05)的转录活性显着降低,其他同实验组1。在Syk被抑制条件下,相比Oh对照组,实验组1能显着提高所有时间点Dectin1(P<0.05)的蛋白表达,显着提高1h(P<0.05)、2h(P<0.05)Syk(P<0.05)的蛋白表达；实验组2能显着提高所有时间点TLR4(P<0.05)及0.5h(P<0.05)MyD88的蛋白表达,显着降低2h(P<0.05)IKBα的表达,极显着提高0.5h(P<0.01)、1h(P<0.01)及2h(P<0.01)NF-κB的转录活性,显着提高0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)TNF-α和0.5h(P<0.05)IL-1β的浓度；实验组3能显着提高所有时间点Dectin1(P<0.05)的表达,显着提高1h(P<0.05)及2h(P<0.05)Syk的表达,极显着提高0.5h(P<0.01)、1h(P<0.01)及2h(P<0.01)NF-κB的转录活性。与同时间点实验组2进行比较,实验组1所有时间点Dectin1(P<0.05)的蛋白表达及1h(P<0.05)、2h(P<0.05)Syk(P<0.05)的蛋白表达显着提高,所有时间点TLR4(P<0.05)及0.5h(P<0.05)MyD88的蛋白表达显着降低,2h(P<0.05)IKBα的表达显著提高,0.5h(P<0.01)、1h(P<0.01)及2h(P<0.01)NF-κB的转录活性极显着降低,0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)TNF-α和0.5h(P<0.05)IL-1β的浓度显著降低；实验组3MyD88在0.5h的蛋白表达有所降低,但差异不显着,0.5h、1h及2h NF-κB的转录活性差异不显着,其他同实验组1。在NF-κB被抑制条件下,相比0h对照组,实验组1能显着提高0h(P<0.05)、0.5h(P<0.05)及极显着提高1h(P<0.01)Dectinl和Syk的蛋白表达,显着提高1h(P<0.01)TLR4的蛋白表达；实验组2能显着提高所有时间点TLR4(P<0.05)的蛋白表达且在0.5h达到峰值,显着提高所有时间点MyD88的蛋白表达且在1h达到峰值,显着降低1h(P<0.05)及2h(P<0.05)IκBα的表达,显着提高0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)NF-κB的转录活性,显着提高0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)TNF-α和0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)IL-1β的浓度；实验组3能显着提高0h(P<0.05)、0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)Dectin1(P<0.05)的表达,显着提高所有时间点Syk的蛋白表达,显着提高0.5h(P<0.05)、2h(P<0.05)及极显着提高1h(P<0.01)NF-κB的转录活性。与同时间点实验组2进行比较,实验组1能显着提高Oh(P<0.05)、0.5h(P<0.05)及1h(P<0.05)Dectin1和Syk的蛋白表达,0h(P<0.05)、0.5h(P<0.05)及2h(P<0.05)TLR4的蛋白表达显着降低,所有时间点MyD88的蛋白表达显着降低,1h(P<0.05)及2h(P<0.05)IκBα的表达显著提高,0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)NF-κB的转录活性显着降低,0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)TNF-α和1h(P<0.05)IL-1β的浓度显著降低；实验组3在0.5h(P<0.05)、1h(P<0.05)及2h(P<0.05)TLR4和MyD88的蛋白表达显着降低,所有时间点Syk的蛋白表达显着提高,1h(P<0.05)及2h(P<0.05)NF-κB的转录活性显着提高,其他同实验组1。在乳腺上皮细胞中TLR-4被抑制后,对Dectin1/Syk通路无明显抑制作用,对NF-κB的活性有一定的抑制作用；在Syk激酶被抑制后,对TLR-4/MyD88通路及NF-κB的活性无明显抑制；在乳腺上皮细胞中抑制NF-κB后,对Dectin1/Syk及TLR-4/MyD88通路无明显抑制。总体来说,在乳腺上皮细胞中分别使用叁种抑制剂时,β-葡聚糖单独作用可激活Dectinl/Syk通路,LPS单独作用可激活TLR-4/MyD88通路,β-葡聚糖和LPS共同作用则可抑制TLR-4/MyD88通路,激活Dectinl/Syk通路。
苗培[8]2007年在《王不留行提取液对实验大鼠的泌乳量和催乳素的合成与释放的影响》文中研究表明催乳素(Prolactin,PRL),广泛存在于动物体内,又称为促乳素、生乳素,是腺垂体催乳素细胞(Lactotrope)分泌的一种多肽激素。1928年Stricker和Grneter证明垂体前叶提取物能够使假妊娠母兔泌乳,将其命名为促乳素;1933年从动物垂体中已分离提纯出催乳素。传统认为它主要参与乳腺发育、泌乳功能和生长发育的调控。长期以来人们一直认为PRL是垂体前叶嗜酸细胞、妊娠子宫蜕膜和免疫细胞等分泌的一种蛋白激素。王不留行,又名王不留、麦蓝子,为石竹科麦蓝菜(Vaccaria segetalis Garcke)属一年生无毛草本植物,以种子入药,性平,味甘苦,可活血通经,催生下乳,消肿止痛,主治妇女闭经、乳汁不下、痈肿等症。为传统常用中药。王不留行在中医上被广泛用来治疗许多疾病,但是,很少了解到王不留行能够诱导和刺激乳腺分泌的生物学功能。本实验主要以哺乳期的Wistar大鼠为研究对象,对大鼠的泌乳量、大鼠幼仔的体重、催乳素(PRL)含量以及乳腺组织学变化进行了初步探讨,实验主要分为叁个部分。一、灌服王不留行提取物对大鼠泌乳量的影响:灌服王不留行提取液两个剂量(WBLX100和WBLX200)的大鼠的泌乳量明显要比对照组大鼠(Nacl)高得多,实验从第叁天到实验结束期间差异比较明显,尤其是王不留行提取液(WBL200)的效果与对照组(Nacl)相比差异巨大(使用的是利用SNK的ANOVA检验方差分析,P＜0.01)。在灌服18h和23h这两个时间段,灌服王不留行提取液(WBL200)后大鼠的泌乳量存在明显的差异。二、灌服王不留行提取物对大鼠体重和催乳素的影响:在实验期间,所有接受灌服王不留行提取液(WBLX100和WBLX200)小鼠体重增加量和体重增加率都明显比对照组(Nacl)高,中药治疗组(WBLX100和WBLX200)与对照组(Nacl)之间的差异十分显着(one way ANOVA S-N-K检验方差分析)。灌服王不留行提取液(WBLX100和WBLX200)的催乳素含量明显比对照组(Nacl)催乳素含量高很多,灌服王不留行提取液(WBLX100和WBLX200)23h后的催乳素含量稍微比灌服18h后的催乳素含量高。在溴隐亭(CB154)治疗的实验中,皮下注射CB154的实验组中的催乳素含量要比对照组中的催乳素含量低得多,灌服王不留行提取液的实验组要比经过皮下注射CB154的实验组的催乳素含量高得多,尽管皮下注射CB154后在灌服王不留行提取液与单独进行皮下注射CB154相比,效果差不多。叁、灌服王不留行提取物对大鼠乳腺组织学的影响:灌服王不留行提取液的实验组的乳腺明显比对照组的乳腺发育程度高,对照组的乳腺腺泡独立分布着,而治疗实验组的乳腺腺泡呈分枝状。大量的上皮细胞增生导致导管延伸和腺泡发育引起导管间充满分泌泡。当腺泡增大和分化成泌乳期合成并分泌乳汁的小叶泡时,由于大量消耗了脂肪细胞的脂肪,脂肪基质面积大量减少。乳腺导管增生并出现空泡,脑垂体嗜酸细胞增多,说明王不留行可能通过刺激脑垂体增加PRL的分泌,进而促进大鼠乳腺增生,乳汁分泌增加。总之,研究表明,王不留行提取液能够刺激大鼠的泌乳量和催乳素的合成与释放以及具有催乳的特性。
范春玲, 郭婷, 齐欣[9]2010年在《奶牛乳腺局部免疫的调节机制-奶牛乳腺肥大细胞5-羟色胺的表达》文中研究表明5-HT是重要的免疫调节因子,它可通过多种受体直接作用于多种免疫细胞,是神经-内分泌-免疫调节网络中的重要成分。肥大细胞是乳腺免疫的重要活性细胞[1-2],参与乳腺非特异性(天然)免疫和
刘萍[10]2007年在《甘草甜素对人工诱导小鼠乳腺炎的免疫保护效应研究》文中研究指明奶牛乳腺炎至今不仅对奶牛业造成严重的经济损失，而且由于治疗过程中抗生素的广泛应用，给人类的健康带来严重的、现实的和潜在的危害。为了进一步认识奶牛乳腺炎发生的免疫病理机制和寻找更理想的防治方法提供基础研究数据，本试验对保定地区5个奶牛场临床型奶牛乳腺炎的病原进行了分离鉴定；并用分离到的金黄色葡萄球菌建立了小鼠实验性乳腺炎模型，观察和分析了乳腺炎模型的局部及整体的临床表现和免疫病理变化；探讨了甘草甜素对小鼠实验性乳腺炎，乳腺局部和整体病理机制及免疫功能的影响。结果表明：将43份临床型乳腺炎奶样进行细菌分离鉴定，生化结果表明共分离到10种91株细菌，以金黄色葡萄球菌(21.98％)、链球菌(19.78％)、大肠杆菌(19.78％)感染为主。小鼠实验性乳腺炎模型，以细菌菌落数(Colony-Forming Units，CFU)为接菌单位，将雌孕鼠分为正常对照组、生理盐水组及1.0×10~2CFU／50μL、4.0×10~2CFU／50μL、7.0×10~2CFU／50μL、1.0×10~3CFU／50μL、1.0×10~4CFU／50μL不同浓度金黄色葡萄球菌悬液组，产后8～10d经乳头管注入到小鼠的第4对(腹部)乳腺内，24h观察炎症反应。结果7.0×10~2CFU／50μL金葡菌组乳腺上皮脱落，腺泡腔内大量炎性细胞浸润，以嗜中性白细胞为主，充血，腺泡内空泡减少，腺泡分泌量减少，间隔增宽，炎症明显。而随着金黄色葡萄球菌用量的加大，乳腺组织的炎症程度加剧。间质宽度、TNF-α及IFN-γ含量与对照组相比极显著升高(P＜0.01)，金葡菌在乳腺组织内大量繁殖，CFU急剧增加。小鼠体温升高、临床表现等全身症状以及病理变化真实反映了急性乳腺炎自然发病过程，因此选择7.0×10~2CFU／50μL金葡菌继续下面的试验。甘草甜素对小鼠实验性乳腺炎的影响，将受孕雌鼠随机分成正常对照组、阳性对照组和试验组。正常对照组于产后8～10d经乳头管注入50μL灭菌生理盐水；阳性对照组和试验组小鼠分别于产后8～10d经乳头管注入50μL7.0×10~2CFU细菌悬液人工发病。分别于接菌-12h、0h、12h、36h时，正常对照组和阳性对照组腹腔注射灭菌生理盐水0.2mL，试验组分成3个剂量组，将甘草甜素分别配制成2.2 mg／mL、4.4 mg／mL、8.8 mg／mL叁个剂量，分别腹腔注射甘草甜素溶液0.2mL。分别于接菌后6h、18h、42h、66h脱颈致死。取乳腺组织固定，进行组织病理学观察及间质宽度的测定，甲苯胺蓝染色观察乳腺肥大细胞的变化，取乳腺匀浆液，用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α及IFN-γ含量变化。结果甘草甜素各组小鼠精神状态良好、体温平稳，能够抑制金葡菌在乳腺组织内繁殖，显著降低CFU(P＜0.01)，因而减少了对乳腺组织的刺激，病理变化减轻，间质宽度缩小，充血减轻。甘草甜素不同剂量组肥大细胞数在感染6～42h与生理盐水组、阳性对照组相比无统计学差异(P＞0.05)，且组间无差异性(P＞0.05)，但甘草甜素组脱颗粒肥大细胞少于阳性对照组，数据表明甘草甜素能够很好地抑制肥大细胞脱颗粒。ELISA试验结果显示甘草甜素显着降低乳腺内TNF-α和IFN-γ的浓度，且呈剂量依赖性，但高于正常对照组。甘草甜素调节乳腺内TNF-α和IFN-γ水平在一定范围内，即参与机体免疫反应又控制组织的过度炎症。结论：保定地区5个奶牛场临床型乳腺炎其病原体以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌感染为主；用金黄色葡萄球菌建立的小鼠实验性乳腺炎模型其局部等症状和病理机制与自然感染的乳腺炎炎症病理过程类同，可以用做乳腺炎的免疫病理学和筛选有效药物使用；甘草甜素对小鼠实验性乳腺炎有一定的保护和免疫调节作用。
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