导读:本文包含了表达检测载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:雌激素受体,雄激素受体,酵母,残留检测
表达检测载体论文文献综述
张海洁,崔子鹤,肖霞,李瑞超,刘源[1]（2019）在《人雌、雄激素受体基因酵母表达载体的构建及其在性激素类药物残留检测中的应用》一文中研究指出[目的]:本研究旨在利用配体受体结合活性构建一种可以用于多种具有雌、雄激素样活性物质残留的检测方法。[方法]:以同源重组的方式将人雌激素或雄激素受体基因序列和在受体响应元件调解下的半乳糖苷酶(LacZ)基因整合到同一载体质粒(ER-5ERE、AR-5HRE)中,利用醋酸锂转化法将该质粒转入W303-1A酵母细胞,分别构建雌激素或雄激素受体酵母表达系统;将11种不同浓度的雌激素或8种雄激素分别与重组酵母细胞共同作用,30℃培养12 h后,加入酵母细胞裂解液和底物ONPG,以验证构建成功的雌激素或雄激素受体酵母表达系统是否对各种激素具有反应活性;为了验证尿样前处理方法,将2 mL加标牛尿样品过夜酶解使结合型激素转化为游离型激素后,过经甲醇活化和超纯水平衡的C18固相萃取柱,甲醇水淋洗后用甲醇洗脱,氮吹至干,2mL甲醇复溶,以HPLC-MS检测方法进行方法学验证。[结果]:雌激素受体酵母表达系统对不同浓度的雌酮、雌二醇、雌叁醇、己烯雌酚、己烷雌酚、炔雌醇、马烯雌酮、马萘雌酮、双烯雌酚、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇等11种雌激素类物质具有良好剂量效应关系,半数有效浓度分别为2.33μg/L、0.58μg/L、58.60μg/L、0.62μg/L、0.33μg/L、0.33μg/L、0.44μg/L、5.96μg/L、0.73μg/L、273μg/L、147μg/L;雄激素受体酵母表达系统对不同浓度的双氢睾酮、睾酮、甲基睾酮、诺龙、雄烯二酮、美雄酮、宝丹酮、康力龙等8种雄激素具有良好剂量效应关系,半数有效浓度分别为7.17μg/L、58.76μg/L、20.64μg/L、15.66μg/L、407.53μg/L、194.20μg/L、271.73μg/L、153.54μg/L。加标浓度为1μg/L、10μg/L、50μg/L的尿样回收率范围分别在78%～117%、78%～107%和70%～101%,变异系数分别为13.04%、8.11%和8.05%。[结论]:本实验分别成功构建了雌激素与雄激素受体酵母表达系统,并验证了该表达系统对性激素具有良好的药理学活性。HPLC-MS方法检测加标尿样中含性激素的浓度并计算回收率,回收率范围和变异系数良好,说明尿样样品前处理方法可行,为后续重组人雌、雄激素受体基因酵母细胞在性激素类药物残留检测中的应用奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会论文集》期刊2019-10-13）
左登攀,陈相儒,赵添羽,张永亮,王颖[2]（2019）在《N端融合检测标签的pMDC32植物表达载体系列的构建》一文中研究指出Gateway植物表达载体pMDC32主要组成元件包括启动子、Gateway盒(attR1-ccdB-attR2)、终止子和用于选择转基因植物的筛选标记基因。所用的启动子是组成型启动子为烟草花叶病毒(CaMV)双增强启动子(2×CaMV 35S)。本实验室已在表达载体pMDC32attR2区C端插入3*Flag序列的pMDC32-MCS-3*flag载体,为了便于实验中目的基因N端融合检测标签,本文在以pMDC32为骨架基础上进一步构建了可在目的蛋白N端带有3*Flag、3*HA和3*Flag-3*HA检测标签的系列表达载体,分别命名为pMDC32-3*Flag-MCS、pMDC32-3*HA-MCS和pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,3种载体构建策略分别如下。首先合成了3*Flag-3*HA基因并连在pUC57-simple-225载体上,通过KpnⅠ/Sa/Ⅰ双酶切获得3*Flag-3*HA (KpnⅠ/SalⅠ)片段,插入已用KpnⅠ/SalⅠ双酶切获得pMDC32 (KpnⅠ/SalⅠ)线性化载体中,获得重组载体pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindIII/SalⅠ酶切位点,3′端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacI)。pMDC32-3*Flag-MCS构建首先基于携带3*Flag-3×HA基因的pUC57-simple-225载体PCR扩增3*Flag(KpnⅠ/SpeI)片段,再将3*Flag(KpnⅠ/SpeⅠ)片段插入已用KpnⅠ/SpeⅠ双酶切获得的pMDC32 (KpnⅠ/SpeⅠ)线性化载体中,获得pMDC32-3*Flag-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端使用SPeI酶切位点,3′端使用SacⅠ)。pMDC32-3*HA-MCS构建以pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS载体以BamHI/BglⅡ进行双酶切后回收pMDC32-3*HA的载体,自连接获得pMDC32-3*HA-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindⅢ/SalⅠ酶切位点,3'端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacⅠ)。本实验对Gateway表达载体pMDC32改造后获得N端带有检测标签的载体,均能够在植物中进行瞬时表达目的基因及进行转基因遗传转化,并获得很好的表达效果,为重要基因功能研究及植物遗传转化获得转基因遗传材料提供了便利。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
胡汝检,左登攀,吴占雨,王颖,韩成贵[3]（2019）在《表达检测带标签的pGD系列衍生载体的构建》一文中研究指出pGD作为一种常用的双元表达载体,在植物细胞中能够高效地表达载体上的目的蛋白。为了便于对表达的目的蛋白进行血清学检测,本文构建了pGD带有N端标签的系列载体,包括:pGD-3*Flag-MCS、pGD-3*HA-MCS和pGD-3*Flag-3*HA-MCS叁种表达载体。具体步骤如下,本载体以pGD为骨架构建,以含有合成的携带3*Flag-3*HA基因的质粒pUC57-simple-225为模板,通过Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得3*Flag (Bam HⅠ/BglⅡ)片段,插入pGD (BglⅡ)线性化载体中(注:BamHⅠ与BglⅡ为同尾酶),获得重组载体pGD-3*FlagMCS。通过BglⅡ和HindⅢ双酶切获得3*HA (BglⅡ/HindⅢ)片段,插入pGD (BglⅡ/HindⅢ)线性化载体中,获得重组载体pGD-3*HA-MCS通过Bam HⅠ和HindⅢ双酶切获得3*Flag-3*HA (Bam HⅠ/HindⅢ)片段,插入pGD (BglⅡ/HindⅢ)线性化载体中(注:Bam HⅠ与BglⅡ为同尾酶),获得重组载体pGD-3*Flag-3*HA-MCS,分别转化大肠杆菌感受态细胞MC1022,经PCR检测后选取阳性克隆提质粒,送公司测序,测序结果比对正确,说明成功获得重组载体。另外,构建了pGD-MCS-6*Myc表达载体,将人工合成带有酶切位点的6*Myc基因序列克隆通过Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得6*Myc (Bam HⅠ/BglⅡ)片段克隆到pGD(Bam HⅠ)线性化载体中。以上4种重组表达载体已应用于实验室的瞬时表达实验中,均能够很好地表达带有标签的目的蛋白,并利用标签特异性抗体对靶标蛋白进行检测。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
段欣强,张洪亮,周保琨,杨瑞梅,单虎[4]（2018）在《犬细小病毒VP2基因乳酸菌表达载体的构建及蛋白检测》一文中研究指出本研究旨在克隆犬细小病毒VP2(CPV-VP2)基因,构建乳酸菌重组表达载体,以乳酸菌表达CPV-VP2目的蛋白,通过重组目的蛋白检测及分析,为CPV乳酸菌口服疫苗研究提供支撑。以PCR方法扩增CPV-VP2编码目的基因,纯化后连接表达载体pMG36e,构建重组乳酸菌表达载体p MG36e-VP2,电转至乳酸球菌MG1363感受态,经PCR鉴定、双酶切鉴定及测序分析,挑选阳性重组菌株,命名为:pMG36e-VP2-MG1363。使用诱导剂Nisin诱导表达,SDS-PAGE和Western Blotting鉴定重组蛋白。结果显示,成功构建重组表达载体pMG36e-VP2,SDS-PAGE,结果表明,重组目的蛋白分子大小约65 kD,与理论值相符; Western Blotting结果表明,重组目的蛋白可被犬源CPV阳性血清所识别,具有良好免疫反应性。本研究用乳酸菌成功表达犬细小病毒蛋白,为该病新型疫苗的研究提供基础。(本文来源于《中国兽医杂志》期刊2018年10期）
梁芳,邓祖丽颖,许申平,张燕,崔波[5]（2018）在《蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建》一文中研究指出【目的】建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失。本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础。【方法】根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体。【结果】利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25%同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带。从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMV CP基因的125 bp片段和ORSV CP基因的164 bp片段。将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体p CAMBIA1300连接,命名为p CAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125 bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与p CAMBIA1300-CyMV连接,命名p CAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289 bp的片段。【结论】所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年08期）
王圣尧,罗沙柳,叶棋浓,刘婕[6]（2018）在《人PGK1基因真核表达载体的构建及其功能检测》一文中研究指出目的构建带FLAG标签的人癌基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase1,PGK1)的真核表达载体,并验证其表达产物的生物学功能。方法采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人PGK1基因,并将其克隆到真核载体pc DNA3. 0-FLAG上,酶切鉴定和测序鉴定后,通过Western印迹检测其表达;将FLAG-PGK1载体转染乳腺癌细胞ZR75-1,利用乳酸试剂盒测定乳腺癌细胞外乳酸含量,并通过CCK8法和划痕实验测定乳腺癌细胞的生长和迁移。结果从乳腺文库中,PCR扩增出约1260 bp DNA片段,克隆到pc DNA3. 0-FLAG载体上,测序结果与目的序列一致。Western印迹检测到目的基因表达,且位置正确。乳酸含量测定结果显示,PGK1可促进细胞乳酸含量增加;细胞生长曲线结果显示,转染FLAG-PGK1的乳腺癌细胞生长较空载体生长快;细胞划痕实验表明PGK1促进细胞迁移。结论成功构建了FLAG-PGK1的真核表达载体,其表达促进了乳腺癌细胞生长和迁移,同时也促进了乳酸的增加,为进一步研究PGK1在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。(本文来源于《军事医学》期刊2018年07期）
安冬[7]（2018）在《牛CD300a基因荧光定量PCR检测方法的建立及其真核表达载体的构建》一文中研究指出CD300a分子是CD300分子超家族中的一个重要成员,是白细胞的表面抗原之一,在调节不同的免疫细胞过程中起着重要的作用。CD300a广泛表达于髓系细胞及淋巴系细胞,且表达的差异性取决于细胞的类型,并参与调节细胞的生长过程,同时与过敏性疾病、感染性疾病、慢性炎症等疾病关系紧密。本研究根据GenBank中的牛源CD300a基因序列设计一对特异性引物,应用牛单核巨噬细胞cDNA作为模版,扩增CD300a基因片段,建立检测该基因的SYBR Green I荧光定量PCR方法,并做出荧光定量PCR的标准曲线。再设计另外一对带有酶切位点引物,扩增CD300a全基因,构建CD300a全基因的真核表达载体,并在HEK-293T细胞进行转染。结果表明,本研究成功建立了牛CD300a基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,灵敏性达10拷贝/μL;定量PCR标准曲线的扩增效率E=90.0%,相关系数R~2=0.999,表明此方法可用于检测牛CD300a在细胞中的表达。对牛CD300a全基因的克隆测序发现,其基因全长为900bp,含一个跨膜螺旋结构域,在氨基酸序列第182-204位,膜外区为1-181位,膜内区为205-300位;在第25氨基酸残基位上预测拥有信号肽剪切位点。此外,成功构建真核表达载体pEGFP-CD300a,并通过脂质体转染至HEK-293T细胞,证明CD300a蛋白在HEK-293T细胞中成功表达。以上结果表明,研究成果为研究牛CD300a在免疫调控中的作用提供了基础。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2018-06-01）
开丽霞,刘安康,朱贵坤,肖正泮,韦双双[8]（2017）在《乙肝病毒核心抗原展示载体的原核表达与电镜检测》一文中研究指出目的将多克隆酶切位点MCS插入乙肝病毒核心抗原(HBcAg)的loop区,构建乙肝病毒核心抗原展示载体。方法将多克隆酶切位点MCS插入到HBcAg的c/e1 loop区,取代了HBcAg c/e1 loop区的Pro79与Ala80氨基酸残基,成功构建了pET28a-HBcAg-MCS原核表达载体,将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用不同IPTG浓度梯度进行原核诱导表达与NI-NTA亲和层析纯化,利用SDS-PAGE电泳和透射电镜检测。结果成功表达了HBcAg-MCS融合蛋白,且最佳的IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,利用镍柱纯化得到了较纯的HBcAg-MCS融合蛋白,进一步利用负染法透射电子显微镜检测到HBcAg-MCS融合蛋白呈现病毒样颗粒结构。结论 HBcAg-MCS融合蛋白能够自发形成病毒样颗粒结构,为乙肝核心抗原HBcAg作为展示载体的广泛应用打下基础。(本文来源于《热带医学杂志》期刊2017年10期）
武亚丹,张秀春,冼淑丽,余乃通,王健华[9]（2017）在《本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果》一文中研究指出RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法。为快速检测RNAi载体的沉默效果,通过构建木薯eIF4E3基因的过量表达载体pAI-Ca4E3以及靶标木薯eIF4E3基因的RNAi表达载体p1300-Ca4E3,利用农杆菌注射法将表达载体在本生烟叶片中进行瞬时表达。半定量RT-PCR检测结果显示单独注射过量表达载体pAI-Ca4E3或与表达载体pCAMBIA1300共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天和第6天都能检测到木薯eIF4E3基因的高效表达,并且二者木薯eIF4E3基因表达量基本相同,说明木薯eIF4E3基因能在本生烟中高效瞬时表达,但是过量表达载体pAI-Ca4E3与干扰载体p1300-Ca4E3共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天还是第6天后都几乎检测不到木薯eIF4E3基因的表达,说明过量表达载体表达的木薯eIF4E3基因已被干扰载体有效沉默。研究结果表明,已建立同时表达靶标基因和干扰靶标基因的干扰载体的本生烟瞬时表达系统,并结合半定量RT-PCR进行RNAi载体沉默效果检测的方法。该方法在农杆菌注射4 d后就能有效的检测RNAi载体的沉默效果,具有快捷、操作简便等特点,为RNAi技术应用于基因功能研究提供简单、快捷、有效的证据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2017年12期）
武亚丹,张秀春,冼淑丽,余乃通,王健华[10]（2017）在《本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果》一文中研究指出RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法。为快速检测RNAi载体的沉默效果,通过构建木薯eIF4E3基因的过量表达载体pAI-Ca4E3以及靶标木薯eIF4E3基因的RNAi表达载体p1300-Ca4E3,利用农杆菌注射法将表达载体在本生烟叶片中进行瞬时表达。半定量RT-PCR检测结果显示单独注射过量表达载体pAI-Ca4E3或与表达载体pCAMBIA1300共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、5天和6天都能检测到木薯eIF4E3基因的高效表达,并且二者木薯eIF4E3基因表达量基本相同,说明木薯eIF4E3基因能在本生烟中高效瞬时表达,但是过量表达载体pAI-Ca4E3与干扰载体p1300-C;a4E3共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天还是第6天后都几乎检测不到木薯eIF4E3基因的表达,说明过量表达载体表达的木薯eIF4E3基因已被干扰载体有效沉默。研究结果表明:已建立同时表达靶标基因和干扰靶标基因的干扰载体的本生烟瞬时表达系统,并结合半定量RT-PCR进行RNAi载体沉默效果检测的方法。该方法在农杆菌注射4天后就能有效的检测RNAi载体的沉默效果,具有快捷、操作简便等特点,为RNAi技术应用于基因功能研究提供简单、快捷、有效的证据。(本文来源于《中国植物病理学会2017年学术年会论文集》期刊2017-07-25）
表达检测载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
Gateway植物表达载体pMDC32主要组成元件包括启动子、Gateway盒(attR1-ccdB-attR2)、终止子和用于选择转基因植物的筛选标记基因。所用的启动子是组成型启动子为烟草花叶病毒(CaMV)双增强启动子(2×CaMV 35S)。本实验室已在表达载体pMDC32attR2区C端插入3*Flag序列的pMDC32-MCS-3*flag载体,为了便于实验中目的基因N端融合检测标签,本文在以pMDC32为骨架基础上进一步构建了可在目的蛋白N端带有3*Flag、3*HA和3*Flag-3*HA检测标签的系列表达载体,分别命名为pMDC32-3*Flag-MCS、pMDC32-3*HA-MCS和pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,3种载体构建策略分别如下。首先合成了3*Flag-3*HA基因并连在pUC57-simple-225载体上,通过KpnⅠ/Sa/Ⅰ双酶切获得3*Flag-3*HA (KpnⅠ/SalⅠ)片段,插入已用KpnⅠ/SalⅠ双酶切获得pMDC32 (KpnⅠ/SalⅠ)线性化载体中,获得重组载体pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindIII/SalⅠ酶切位点,3′端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacI)。pMDC32-3*Flag-MCS构建首先基于携带3*Flag-3×HA基因的pUC57-simple-225载体PCR扩增3*Flag(KpnⅠ/SpeI)片段,再将3*Flag(KpnⅠ/SpeⅠ)片段插入已用KpnⅠ/SpeⅠ双酶切获得的pMDC32 (KpnⅠ/SpeⅠ)线性化载体中,获得pMDC32-3*Flag-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端使用SPeI酶切位点,3′端使用SacⅠ)。pMDC32-3*HA-MCS构建以pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS载体以BamHI/BglⅡ进行双酶切后回收pMDC32-3*HA的载体,自连接获得pMDC32-3*HA-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindⅢ/SalⅠ酶切位点,3'端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacⅠ)。本实验对Gateway表达载体pMDC32改造后获得N端带有检测标签的载体,均能够在植物中进行瞬时表达目的基因及进行转基因遗传转化,并获得很好的表达效果,为重要基因功能研究及植物遗传转化获得转基因遗传材料提供了便利。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达检测载体论文参考文献
[1].张海洁,崔子鹤,肖霞,李瑞超,刘源.人雌、雄激素受体基因酵母表达载体的构建及其在性激素类药物残留检测中的应用[C].中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会论文集.2019
[2].左登攀,陈相儒,赵添羽,张永亮,王颖.N端融合检测标签的pMDC32植物表达载体系列的构建[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[3].胡汝检,左登攀,吴占雨,王颖,韩成贵.表达检测带标签的pGD系列衍生载体的构建[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[4].段欣强,张洪亮,周保琨,杨瑞梅,单虎.犬细小病毒VP2基因乳酸菌表达载体的构建及蛋白检测[J].中国兽医杂志.2018
[5].梁芳,邓祖丽颖,许申平,张燕,崔波.蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建[J].西南农业学报.2018
[6].王圣尧,罗沙柳,叶棋浓,刘婕.人PGK1基因真核表达载体的构建及其功能检测[J].军事医学.2018
[7].安冬.牛CD300a基因荧光定量PCR检测方法的建立及其真核表达载体的构建[D].内蒙古农业大学.2018
[8].开丽霞,刘安康,朱贵坤,肖正泮,韦双双.乙肝病毒核心抗原展示载体的原核表达与电镜检测[J].热带医学杂志.2017
[9].武亚丹,张秀春,冼淑丽,余乃通,王健华.本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果[J].分子植物育种.2017
[10].武亚丹,张秀春,冼淑丽,余乃通,王健华.本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果[C].中国植物病理学会2017年学术年会论文集.2017