谢新民[1]2003年在《谷氨酰胺的抗动物应激研究》文中研究表明系列Ⅰ 添喂谷氨酰胺对21日龄断奶仔猪消化道发育和机能的影响 选取体重相近的21日龄来自4窝(大约克夏×大约克夏×二花脸)仔公猪16头，随机分成2组，每组8头。实验组仔猪21日龄断奶，同栏饲养，在饲喂均衡营养乳猪配合饲料基础上，每天灌喂谷氨酰胺2g／头，连续10天；对照组按猪场正常程序28日龄断奶。实验按猪场常规管理(包括仔猪免疫)。在仔猪第32日龄每组各随机取6头仔猪屠宰，取血清和食糜(-20℃保存)；取相同部位的胃底部2×2cm、十二指肠的中部、空肠前段(空肠的前1／3部分)的中部、回肠中部各2cm组织，用生理盐水冲去内容物，苦味酸固定，常规石蜡切片(厚度为6um)，HE染色，树胶封片。用Olymps显微镜观察并照相。应用Image-processing-plus图象分析系统测量胃底腺、肠绒毛长度。 添喂谷氨酰胺的实验组仔猪血清中胃泌素比对照组仔猪极显着的提高(P＜0.01，n=6)；T3／T4比值有所提高，但差异不显着。 实验组仔猪胃食糜中胃蛋白酶活性比对照组仔猪显着升高(P＜0.05，n=6)；仔猪血清中肌酸激酶活性实验组显着高于对照组(P＜0.05，n=6)；谷丙转氨酶的活性有所提高，但无差异显着性(P＞0.05，n=6)；实验组仔猪十二指肠内容物淀粉酶和脂肪酶活性都极显着的低于对照组(P＜0.01，n=6)。 添加谷氨酰胺对21日龄断奶仔猪胃肠道组织结构的影响。实验结果表明：实验组仔猪十二指肠长度比对照组仔猪增加4.75％(P=0.770，n=6)，空肠长度增加8.59％(P=0.361，n=6)，回肠长度增加9.23％(P=0.216，n=6)，小肠总长增加8.57％(P=0.287，n=6)，但是差异不显着。实验组仔猪胃底腺和十二指肠绒毛的长度显着高于对照组(P＜0.05，n=18)；但添加谷氨酰胺对回肠绒毛的影响不大，没有显着性差异。 系列Ⅱ 添喂谷氨酰胺对肉鸡抗急性热应激的效应 34日龄的AA肉鸡，分叁个组：空白对照组(饲料中不添加谷氨酰胺，也不进行急性热应激)，6羽；对照组(饲料中不添加谷氨酰胺，但进行急性热应激)，60羽，按应激时间长短分为5个小组，分别为急性热应激6小时组、12小时组、18小时组、24小时组、48小时组，每个小组12羽；实验组(饲料中添加谷氨酰胺，并进行急性热应激)，30羽，与对照组一样按应激时间长短分5个小组，每个小组6羽；实验组肉鸡饲料中每羽每天添加0.5g谷氨酰胺，与饲料充分拌匀，饲喂10天，在第11天开始进行急性热应激，对照组和实验组肉鸡突然进入41℃环境下，按各自规定的应激时间屠宰取样。整个实验期间所有肉鸡 谢新民：谷氨酸胺的抗动物应激研究按常规饲养方法进行饲养。 谷氨酸胺对急性热应激条件下肉鸡死亡率的影响。结果表明：添喂谷氨酸胺对肉鸡短期内抗急性热应激具有好的效果，急性热应激4小时对照组的死亡率为16．670，而实验组的死亡率仅3．33O，对照组死亡率是实验组的5倍；急性热应激 6，J、时，对照组死亡率为 180，实验组死亡率为 13．790，对照组死亡率是实验组的约l．3倍；急性热应激12，］、时，对照组死亡率为17．07O，实验组死亡率为20．00O，两者差异不大；从急性热应激12，卜时以后，实验组与对照组肉鸡死亡率均降至0O。 急性热应激6小时，肉鸡血浆中谷氨酸胺浓度实验组极显着的高于对照组（poo刀098）；而实验组与空白对照组相比，实验组高于空白对照组，但差异不显着（P二0．0922）；对照组低于空白对照组，差异也不显着（P—0．0602）。急性热应激12，1、时，肉鸡血浆中谷氨酸胺浓度实验组极显着高于对照组（P刃．0046）；实验组与空白对照组相比，差异不显着（P。0．9475）；而对照组显着低于空白对照组（P—0．0153）。急性热应激18，J、时，肉鸡血浆中谷氨酸胺浓度实验组显着高于对照组（P—0．01371）；实验组与空白对照组相比，差异不显着（P＝0．4173）；对照组极显着低于空白对照组（P＝0．004 5）。急性热应激 24。J、时，肉鸡血浆中谷氨酸胺浓度实验组极显着高于对照组（P—0刀044）；实验组与空白对照组相比，有所降低，但差异不显着（P—0刀891）；而对照组极显着的低于空白对照组（P＝0．00042）。急性热应激 48，J、时，肉鸡血浆中谷氨酸胺浓度实验组高于对照组，但差异不显着（P—0．0634）；实验组显着低于空白对照组（P—0．04906）；而对照组极显着低于空白对照组（P＝0．00519）。系列m 添喂谷氨酸胺对急性热应激肉鸡腹腔巨噬细胞活性的影 p 实验设计同系列11。 急性热应激6小时，比较肉鸡腹腔巨噬细胞吞噬活性：实验组极显着高于对照组和空白对照组；但对照组与空白对照组相比差异不显着。急性热应激12小时，实验组与对照组相比，差异不显着；实验组和对照组都显着高于空白对照组。急性热应激18小时，实验组、对照组与空白对照组之间比较，实验组高于空白对照组，对照组低于空白对照组，但叁者之间均无差异显着性。急性热应激24小时，实验组和对照组均低于空白对照组，但无差异显着性。急性热应激48小时，实验组、对照组和空白对照组之间比较，均无差异显着性，但实验组和对照
申凤华[2]2008年在《谷氨酰胺、L-肉碱对肉仔鸡抗低温应激能力影响的研究》文中研究说明本研究旨在从生长性能、免疫性能、抗氧化性能等方面研究谷氨酰胺和L-肉碱在促进动物生长,减缓低温造成影响的作用,为生产实践中应用抗应激剂提供理论依据和有益参考。采用L16(45)正交试验设计,将480只1日龄AA肉仔鸡,随机分为16组,每组3个重复,每个重复10羽肉仔鸡。谷氨酰胺添加水平分别为0%、0.4%、0.6%、0.8%,L-肉碱添加水平分别为0 mg/Kg、50 mg/Kg、75 mg/Kg、100 mg/Kg。试验期2周,预饲一周。试验结果如下:1.对生长性能的影响:谷氨酰胺和L-肉碱对冷暴露肉仔鸡全期生长性能影响显着(P<0.05)。谷氨酰胺和L-肉碱对肉仔鸡的平均日采食量影响显着(P<0.05),但二者之间的交互作用不显着(P>0.05);冷暴露第一周,谷氨酰胺和L-肉碱以及二者之间的互作对日增重和料重比有显着影响,冷暴露第二周,谷氨酰胺和L-肉碱对日增重和料重比都无显着影响(P>0.05),但二者的互作差异显着(P<0.05)。2.对免疫器官指数的影响:谷氨酰胺对脾脏指数影响极显着(P<0.01),对胸腺指数和法氏囊指数无显着影响(P>0.05);L-肉碱对胸腺指数影响极显着(P<0.01),对脾脏指数影响不显着(P>0.05),对法氏囊指数有显着影响(P<0.05)。3.对抗氧化指标的影响:谷氨酰胺在冷暴露第一周和第二周对血清中的SOD影响显着(P<0.05),而L-肉碱对血清中的SOD无显着影响(P>0.05),二者的交互效应对血清中的SOD影响极显着(P<0.01);谷氨酰胺对冷暴露期间血清GSH-PX影响显着(P<0.05),L-肉碱对血清GSH-PX无显着影响(P>0.05),二者的互作在冷暴露第二周对血清GSH-PX影响显着(P<0.05);谷氨酰胺显着降低了冷暴露第二周血清MDA水平(P<0.05),L-肉碱对冷暴露期间血清MDA水平影响显着(P<0.05),冷暴露第一周,二者的互作对血清MDA水平影响显着(P<0.05),冷暴露第二周对血清MDA水平影响极显着(P<0.01);谷氨酰胺对冷暴露肉仔鸡血清T-AOC水平影响极显着(P<0.01);在冷暴露第二周L-肉碱及二者的互作对血清T-AOC水平影响极显着(P<0.01)。4.对相关激素水平的影响:谷氨酰胺在冷暴露第二周对血清Cor.有极显着影响(P<0.01),L-肉碱对血清Cor.无显着影响(P>0.05),二者的互作对冷暴露第二周血清Cor.水平影响显着(P<0.05);谷氨酰胺和L-肉碱对血清FT3水平影响不显着(P>0.05);谷氨酰胺对血清FT4水平影响显着(P<0.05),L-肉碱对冷暴露第二周血清FT4水平影响极显着(P<0.01),二者的互作对血清FT4水平影响极显着(P<0.01)。5.对血清生化指标的影响:谷氨酰胺和L-肉碱对冷暴露肉仔鸡血清GLU水平有显着影响(P<0.05);谷氨酰胺对血清TP有极显着影响(P<0.01),L-肉碱对血清TP影响显着(P<0.05);L-肉碱对血清BUN无显着影响,谷氨酰胺以及二者的交互作用对冷暴露第二周肉仔鸡血清BUN影响显着(P<0.05);谷氨酰胺、L-肉碱以及二者的交互作用显着降低了冷暴露第二周肉仔鸡血清ALP水平(P<0.05)。结合生产性能、抗氧化指标、生化指标变化分析可知,A3B2对低温环境下肉仔鸡的作用效果最好,即谷氨酰胺和L-肉碱的最适添加量分别为0.8%、75mg/Kg。
吴艳[3]2008年在《大鼠的运输应激及谷氨酰胺的抗应激研究》文中研究表明本研究利用一个模拟运输振动的装置,建立大鼠模拟运输应激模型,并通过灌饲条件性必需氨基酸谷氨酰胺(Glutamine,Gln)观察了其对大鼠血清及各相关组织中氨基酸谱、相关生化指标和骨骼肌热休克蛋白mRNA表达的影响。探讨了谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠保护的可能机制,深化了对Gln生物学功能的认识,为动物运输应激的防护提供了新思路。1反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠血清及组织中游离的氨基酸以邻苯二甲醛(OPA)为衍生剂,柱前衍生,Waters Spherisorb ODS柱(4.6mm×250mm,5μm)柱分离,梯度洗脱,荧光检测,在40分钟内15种氨基酸全部得到分离。在5.20-333nmol·L~(-1)浓度范围内,氨基酸的峰面积与浓度呈现良好的线性关系,相关系数在0.9993-1之间。不同氨基酸测定的日内、日间精密度分别为2.01%-5.53%和3.65%-5.88%。最低检测限为1.2nmol·L~(-1)。测定大鼠血清及下丘脑、肝脏、肌肉、心脏和肾脏等组织中的游离氨基酸,不同氨基酸在大鼠血清、下丘脑、肝脏、肌肉、心脏和肾脏等组织中的回收率分别为107.10%-122.28%、90.90%-110.95%、98.96%-119.95%、90.33%-111.30%、93.82%-126.51%、90.39%-144.15%之间。本方法处理迅速,操作简单,有好的线性和回归系数,可以作为定性或定量的依据。2谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠血清和组织中氨基酸谱的影响实验采用70只雄性SD大鼠,设阴性对照组(-)10只,其他60只大鼠分别模拟低频(4Hz)和高频(6Hz)两种汽车公路运输振动频率,每种处理实验大鼠30只,并分别设有阳性对照组(+),苯巴比妥组(P)和谷氨酰胺组(Q),每组10只。(-)组和(+)组每天分别灌饲生理盐水(1mL/只),P组和Q组每天分别灌饲苯巴比妥(15mg·Kg~(-1)/只)和谷氨酰胺(500mg·Kg~(-1)/只),连续10天,每天1次。10天后,除(-)组外,其他6组分别模拟低频(L)和高频(H)运输应激2小时。然后处死大鼠,取血清、下丘脑、肝脏和骨骼肌,采用RP-HPLC法分析模拟运输应激后其中游离氨基酸含量的变化。结果:与阴性对照组相比,补充谷氨酰胺后,低频或高频应激大鼠的血清、下丘脑和骨骼肌中与应激密切相关的部分生糖氨基酸,芳香族氨基酸(AAA)和支链氨基酸(BCAA)含量都没有显着差异(P＞0.05),而与阳性对照组相比,上述指标均差异显着(P＜0.05)或差异极显着(P＜0.01)。而镇静药物苯巴比妥对抗运输应激则没有效果。本实验证实,谷氨酰胺具有保护大鼠抵抗运输应激的作用。3谷氨酰胺对模拟运输应激大鼠主要相关生化指标及HSP72mRNA表达的影响实验设计同第二部分,分析肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)、乳酸脱氢酶(LactateDehydrogenase,LDH)的活性以及血糖(blood glucose)、肌糖原(muscle glycogen)、肝糖原(liver glycogen)的变化及骨骼肌HSP72mRNA表达的影响。结果显示:与阴性对照组相比,补充谷氨酰胺后,低频或高频应激大鼠的血清、肝脏和骨骼肌CK、LDH、血糖以及肌糖原、肝糖原都没有显着差异(P＞0.05),L(+)和H(+)组HSP72mRNA表达显着升高(P＜0.05),LQ和HQ组HSP72mRNA表达极显着升高(P＜0.01)。镇静药物苯巴比妥对抗运输应激则没有效果。本实验结果表明,谷氨酰胺具有保护大鼠抵抗运输应激的作用。
高福久[4]2010年在《谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊抗低温应激能力影响的研究》文中指出本研究旨在从肉羊抗氧化性能、相关激素、血液生化指标和瘤胃纤维分解菌四方面,研究日粮中添加谷氨酰胺和L-肉碱在减缓低温应激的作用,为生产实践中应用抗应激剂提供理论依据和有益参考。本试验采用L9(34)正交试验设计,将9只肉羊随机分成3组,每组3个重复。由10℃降至0℃时于6:00、9:00、12:00、15:00、18:00,5个时间点采集瘤胃液和血液。谷氨酰胺添加水平分别为0%、0.6%、1.2%,L-肉碱添加水平分别为0 mg/Kg、75 mg/Kg、150 mg/Kg。预饲期7d,试验期2d,间隔10d。试验结果如下:1.谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊抗氧化指标的影响:冷处理时间对血清SOD影响不显着,谷氨酰胺、L-肉碱以及二者复合使用能显着提高血清SOD的水平;冷处理时间对血清MDA影响极显着,谷氨酰胺和L-肉碱能显着提高血清MDA的水平,二者复合使用有提高血清MDA的趋势;冷处理时间对血清T-AOC影响极显着,谷氨酰胺和L-肉碱有提高血清T-AOC的趋势,二者复合使用能显着提高血清T-AOC的水平。2.谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊相关激素的影响:冷处理时间对血清FT3影响不显着,谷氨酰胺有提高血清FT3的趋势,L-肉碱以及谷氨酰胺和L-肉碱复合使用能显着提高血清FT3水平;冷处理时间对血清FT4影响极显着,谷氨酰胺和L-肉碱有提高血清FT4的趋势,二者复合使用能显着提高血清FT4水平;冷处理时间对血清Cor.有极显着影响,谷氨酰胺和L-肉碱有降低血清Cor.的趋势,二者复合使用能显着降低血清Cor.的水平。3.谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊血液生化指标的影响:冷处理时间对血清TP有极显着影响,谷氨酰胺、L-肉碱以及二者复合使用有提高血清TP的趋势;冷处理时间对血清BUN影响不显着,谷氨酰胺和L-肉碱能显着降低血清BUN的水平,二者复合使用有降低血清BUN的趋势;冷处理时间对血清ALP影响不显着,谷氨酰胺、L-肉碱以及二者复合使用有提高血清ALP的趋势。4.谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊纤维分解菌的影响:冷处理时间对瘤胃RA浓度影响不显着,谷氨酰胺有降低瘤胃RA浓度的趋势,L-肉碱能显着降低瘤胃RA的浓度,二者复合使用有降低瘤胃RA浓度的趋势;冷处理时间对瘤胃RF浓度影响不显着,谷氨酰胺能显着提高瘤胃RF浓度,L-肉碱有提高瘤胃RF浓度的趋势,二者复合使用能显着提高瘤胃RF的浓度;冷处理时间对瘤胃BS浓度影响不显着,谷氨酰胺有提高瘤胃BS浓度的趋势,L-肉碱能显着提高瘤胃BS的浓度,二者复合使用有提高瘤胃BS浓度的趋势。结合谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊抗氧化指标、相关激素指标、生化指标和瘤胃纤维分解菌的变化分析可知,A3B2组对低温环境下肉羊的作用效果最好,即谷氨酰胺和L-肉碱的日粮最适添加量分别为1.2%、75mg/Kg。
段晓燕[5]2012年在《谷氨酰胺（Gln）对免疫应激蛋鸡经济性状和免疫功能影响的研究》文中研究表明在蛋鸡生产实践中，频繁免疫等应激所造成的负效应越来越引起业界同仁的关注。试验探讨谷氨酰胺（Gln）对免疫应激产蛋高峰期蛋鸡经济性状和免疫功能的影响。选择半开放鸡舍3层阶梯式常规笼养的健康37周龄海兰褐产蛋鸡300只，随机分为5组，每组5重复，每重复12只。Ⅰ组为对照组，饲喂基础日粮，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组为免疫应激组，在日粮中分别添加0%、0.6%、0.8%和1.0%的Gln。试验第4天对Ⅱ-Ⅴ组蛋鸡分别进行肌肉注射新城疫冻干苗和灭活苗，对照Ⅰ组蛋鸡同部位注射等量生理盐水。试验期35d，其中预试期7d，正试期28d。结果表明：试验一谷氨酰胺(Gln)对免疫应激蛋鸡经济性状的影响免疫应激导致蛋鸡生产性能和蛋品质下降。日粮未添加Gln的免疫应激Ⅱ组蛋鸡产蛋率迅速下降、料蛋比增加（P<0.05）；日粮添加0.6%Gln更有助于免疫应激蛋鸡产蛋率恢复，降低料蛋比（P<0.05）；免疫应激对蛋鸡平均日采食量和平均蛋重影响较小（P>0.05），日粮添加Gln对免疫应激蛋鸡采食量较低、平均蛋重影响差异不显着（P>0.05）；试验前期，日粮添加Gln可改善免疫应激蛋鸡的哈夫单位、蛋白高度和蛋黄颜色（P>0.05），但未见其剂量效应差异（P>0.05）。试验二谷氨酰胺(Gln)对免疫应激蛋鸡经济性状调控的机制探讨（1）日粮添加Gln可显着提高新城疫免疫应激蛋鸡的新城疫HI抗体滴度水平（P<0.05），以0.6%Gln效果更好。（2）蛋鸡免疫应激后3h，其B淋巴细胞转化率显着提高（P<0.01），T淋巴细胞转化率高于对照组（P>0.05）；日粮中未添加Gln的免疫应激Ⅱ组蛋鸡B、T淋巴细胞转化率均高于日粮添加Gln的免疫应激组（P>0.05）；日粮添加0.6%、0.8%Gln有助于免疫应激蛋鸡B、T淋巴细胞转化率恢复至对照组水平（P>0.05）。（3）蛋鸡免疫应激后3h，日粮中未添加Gln的免疫应激Ⅱ组蛋鸡血浆皮质醇含量显着升高（P<0.01），免疫后6h，免疫应激Ⅱ组的血浆皮质醇含量仍高于对照组（P>0.05），日粮添加Gln能显着降低免疫应激蛋鸡血浆皮质醇的含量（P<0.01）；（4）免疫应激导致蛋鸡血浆E2、LH和FSH含量降低。应激12h内，日粮中未添加Gln的免疫应激Ⅱ组蛋鸡血浆E2含量显着低于对照组（P<0.05）；应激6h内，免疫应激Ⅱ组的LH含量显着降低（P<0.05），48h后各组相比差异不显着；应激6h内，免疫应激Ⅱ组的FSH含量显着下降（P<0.05），随着时间延长，各组FSH含量逐渐恢复。日粮添加Gln能显着提高免疫应激蛋鸡血浆E2、LH和FSH含量（P<0.05），以0.6%Gln为好。（5）免疫应激后3h，日粮未中添加Gln的免疫应激Ⅱ组蛋鸡血浆的IL-1、IL-6和TNF-α含量升高（P>0.05）；免疫应激6h后，免疫应激组蛋鸡IL-6和TNF-α含量显著高于对照组（P<0.01）；日粮添加Gln促进了免疫应激蛋鸡血浆炎性细胞因子IL-1、IL-6和TNF-α的水平对机体免疫应激反应的调控强度（P<0.05），但未见Gln添加的剂量效应差异（P>0.05）。结论：免疫应激条件下，蛋鸡的生产性能和蛋品质下降。日粮添加Gln有助于提高免疫应激蛋鸡的产蛋率、改善料蛋比，有改善蛋品质的趋势，并且以日粮中添加0.6%Gln剂量时效果较好。Gln改善免疫应激蛋鸡经济性状与其能改变免疫应激蛋鸡淋巴细胞转化率、调控免疫应激激素（皮质醇）、生殖激素（E2、LH和FSH）的分泌、强化炎性细胞因子（IL-1、IL-6和TNF-α）的调控效应有关。
戴四发[6]2012年在《谷氨酰胺和γ-氨基丁酸对肉鸡抗热应激和肉品质的影响及机理探讨》文中研究指明本文通过体内试验研究了循环热应激(30-34℃)对肉鸡生长性能、屠宰性能、胴体性状、血清生化指标、肌肉品质、骨骼肌中G1n和GABA代谢、HSP70、AMPK信号通路相关指标的影响及外源性Gln和GABA的添加效果和互作效应,探讨了可能存在的机理,分析了骨骼肌部分指标与肌肉品质间的相关性。并进一步通过体外试验探讨了热应激条件下家禽骨骼肌细胞HSP70、AMPK问的调控关系及外源性Gln、GABA的干预作用,为氨基酸用于家禽抗热应激提供理论基础。1.体内试验：按照2因素2水平(2×2)加正对照组(PC组)的实验设计进行。选择健康的10日龄(d)健康AA公鸡360只,在适温条件下,常规饲养至21d时随机分为5组(每组6重复,每重复12只)。其中,四个热应激组(2×2)在22-42d进行循环热应激处理(每日9：00-14：00,温度从30℃升至34℃,14：00-18：00温度从34℃降至30℃,其他时间平均23℃左右),在基础日粮中分别添加Gln(0、5g/kg)和GABA (0、100mg/kg)。PC组在适温条件饲养(约23℃),饲喂基础日粮。于28、35、42d进行生长性能分析,并分别从各重复组抽取3只接近平均体重的样鸡用于屠宰性能、胴体品质、血清生化指标、肌肉品质、骨骼肌中Gin和GABA代谢、HSP70、AMPK信号通路相关组分的分析,对部分指标与肌肉品质之间的相关性进行分析,结果如下：1.1循环热应激降低了22-42d肉鸡增重(WG)和采食量(FI),42d时的屠体重(CW)、半净膛重(HEW)、全净膛重(EW)、胸肌重(BMW)、胸肌率(BMY)、腿肌重(LMW)、腹脂重(AFW)、腹脂率(AFY)、肌间脂肪宽(IFW)、皮下脂肪厚(SFT)；增加了肉鸡料重比(F/G)和腿肌率(LMY)。日粮添加5g/kg Gln增加了22-42d热应激肉鸡WG、FI、CW、HEW、EW、BMW、BMY、LMW、AFW、AFY、 IFW、SFT;降低了F/G,对LMY有降低趋势。日粮添加100mg/kg GABA增加了22-42d热应激肉鸡WG、FI、EW、BMW、BMY、AFW、AFY、SFT;对CW、HEW、IFW有增加趋势。两种氨基酸在影响循环热应激肉鸡WG、FI、F/G、EW、EY、BMW、 BMY、AFW、AFY、IFW和SFT方面存在协同效应。在影响生产性能方面,Gln的作用具有较好的持续性,GABA在第1周时作用较强,随后明显减弱。1.2循环热应激降低了28d、35d、42d肉鸡血清TP、葡萄糖、甘油叁酯、Gin、Glu、T4、Ins水平、ALP活性,22d、35d血清GABA水平；增加了22d、35d、42d肉鸡血清CS、GN水平、GOT、GPT、LDH、CK、NOS活性。日粮添加5g/kg Gln增加了22d、35d、42d热应激肉鸡血清TP、Gln、Ins水平,降低了血清甘油叁酯、CS、GN水平、GOT、CK、NOS活性。日粮添加100mg/kg GABA增加了22d、35d、42d热应激肉鸡血清TP、Gln、GABA、T3水平、ALP活性,对甘油叁酯、Gln、T4、 CS、Ins、GN水平、GOT、GPT、LDH、CK、NOS活性的影响存在明显的时间特异性。两种氨基酸在影响循环热应激肉鸡血清TP、甘油叁酯、GABA、Gln、T3、T4、 Ins、GN水平、ALP、LDH和CK活性方面存在明显的协同效应,在影响转氨酶(GOT、 GPT)和NOS方面仅在第1周时较显着。1.3循环热应激增加了28、35、42d肉鸡胸肌pH、L*、水分、CP、CF、CA、 TL、F、MFDS,腿肌pH、L*、CA, DL、SF、MFDS;降低了肉鸡胸肌DL、CLMFDM,腿肌a*、b*、CP、CF、CL、TL、CL、MFDM。日粮添加5g/kg Gln降低了胸肌L*、SF、MFDS,腿肌L*、DL、SF、MFDS,增加了胸肌CP、CF、CA、TL、 DL、MFDM,腿肌a*、CP、CF、水分、CL、MFDM.日粮添加100mg/kg GABA降低了胸肌pH、TL、SF、腿肌pH、DL、SF,增加了胸肌a*、水分、CP、CF,腿肌a*、CF。两种氨基酸在影响循环热应激肉鸡胸肌pH、b*、水分、CP、WHC、TL、SF,腿肌pH、L*、a*、水分、CP、WHC、TL、SF方面存在明显的协同效应。此外,通过日粮Gln和GABA可以提高肌肉在冷藏过程中的色泽稳定性。1.4循环热应激降低了28d、35d、42d肉鸡胸肌、腿肌的Gln、Glu、GABA含量、Glnase、GAD活性,增加了胸肌、腿肌的GS、GABA-T活性。日粮添加5g/kg Gln增加了胸肌的Gln、Glu含量、Glnase、GAD活性,腿肌的Gln、Glu、GABA含量、GAD活性；降低了胸肌、腿肌的GS活性,对胸肌的GABA含量、GABA-T活性、腿肌的Glnase、GABA-T活性有不同程度的影响。日粮添加100mg/kg GABA增加了胸肌的Gln、Glu含量、Glnase、GAD活性,腿肌Gln含量、GAD活性；降低了胸肌的GABA-T活性、腿肌的GS活性。两种氨基酸对循环热应激肉鸡胸肌、腿肌的Gln、 GABA含量、Glnase、GS、GABA-T活性的影响存在明显的协同效应。42d肉鸡胸肌、腿肌的Gln、GABA含量、Glnase、GS活性与L*、CP、CF、CL、MFDS和MFDM间存在显着的相关性。1.5循环热应激降低了28d、35d、42d肉鸡胸肌、腿肌糖原、葡萄糖、乳酸含量,增加了胸肌、腿肌的AMP/ATP、AMPK含量、AMPK活性、HSP70含量、AMPKa2mRNA、HSP70mRNA表达量。日粮添加5g/kg Gln增加了胸肌、腿肌的HSP70含量、HSP70mRNA表达量、胸肌的葡萄糖、腿肌的糖原；降低了胸肌、腿肌的AMP/ATP、 AMPK含量、AMPK活性。日粮添加100mg/kg GABA增加胸肌的糖原、葡萄糖、腿肌的葡萄糖、乳酸,降低了胸肌、腿肌的AMP/ATP、AMPK活性、腿肌的HSP70含量、HSP70mRNA表达量。两种氨基酸对循环热应激肉鸡胸肌的葡萄糖、乳酸、腿肌的糖原、乳酸、胸肌和腿肌的AMP/ATP、AMPK活性、HSP70mRNA表达量存在明显的协同效应。42d肉鸡胸肌和腿肌的糖原、葡萄糖、乳酸与水分、CP、CF, AMP/ATP. AMPK含量、AMPK活性与L*、水分、CP、CF、WHC、DL、CL、MFDS和MFDM间,HSP70含量与WHC、TL、DL间存在较为显着的相关性。2.体外试验：研究热应激影响家禽骨骼肌细胞HSP70、AMPK的调控关系及外源性Gln. GABA的干预作用。以1-2×106个/mL密度的成肌细胞进行试验。处理后置于37℃水浴中进行3h修复,收集细胞供分析。2.1热应激条件下HSP70表达与AMPK活性变化时差性分析共5组,每组6重复,基础培养基培养3h后进行热应激处理(42℃和45℃,0-120min)。结果表明：热应激提高了细胞的HSP70表达量和AMPK活性,以45℃处理的提高速度更快,程度更大,且以AMPK活性的变化速度快于HSP70表达量的变化。2.2HSP70表达与AMPK活性问的调控关系分析(1)QD抑制HSP70表达试验：共7组,每组6重复。用添加浓度为0-50umol/L的QD的基础培养基预培养3h,进行42℃和45℃、30min的热应激处理。结果表明：QD对HSP70表达的抑制作用存在明显的温度特异性,仅45℃时表现显着。同时,45℃时的AMPK活性具有不同程度的增加,显示HSP70能在一定程度上抑制/AMPK活性。(2)AICAR激活AMPK试验：共7组,每组6重复。用添加浓度为0-0.5mmol/L的AICAR的基础培养基培养3h处理。结果表明：AICAR能有效激活适温条件下的骨骼肌细胞AMPK活性,但对HSP70的表达量无影响。2.3Gln、GABA对细胞HSP70与AMPK的影响各取5组,每组6重复。在基础培养基中分别添加0-20mmol/L Gln和0-0.8mmol/L GABA预培3h后,进行45℃,30mmin热应激处理。结果表明：Gln能有效增加热应激条件下骨骼肌细胞的HSP70表达量,同时抑制AMPK活性的增加。GABA能在一定程度上抑制AMPK活性的增加,但对HSP70表达量无影响。2.4Gln、GABA对极端热应激骨骼肌细胞成活率的影响各取3组,每组6重复。分别用添加0、10、20mmol/L Gln和0、0.4、0.8mmol/L GABA的基础培养基预孵3h后,采用48℃高温处理3h、6h,分析细胞成活率。结果表明：添加10、20mmol/L Gln提高了热应激处理3h、6h后的骨骼肌细胞成活率；添加0.4、0.8mmol/L GABA对细胞成活率无明显影响。根据研究结果可以得出结论：(1)本研究采用的30-34℃循环热应激对22-42d肉鸡生长性能、胴体性状、血清主要代谢物、激素和代谢酶等生化指标产生了显着的负面影响,也显示了机体对热应激的适应性。日粮添加5g/kg Gin、100mg/kg GABA能有效缓解循环热应激对上述指标带来的负面作用,同时表现出了明显的协同效应和时间特异性。(2)从物质代谢角度分析,循环热应激显着影响了血清和骨骼肌中的Gln、Glu、 GABA水平,以及叁种氨基酸间的代谢酶。通过日粮添加5g/kg Gln、100mg/kg GABA可以有效改善循环热应激条件下肉鸡骨骼肌中Gln、GABA的代谢状况,同时表现出了一定的协同效应和骨骼肌组织差异性。(3)循环热应激明显造成了肉鸡机体的低能量状态,激活了骨骼肌中AMPK信号通路,促进了骨骼肌中HSP70转录和表达。通过日粮添加5g/kg Gln、100mg/kg GABA可以改善机体的能量状况,抑制骨骼肌AMPK信号通路,且表现出了一定的协同效应。同时说明,Gin的这种积极作用可能在一定程度上与促进HSP70表达有关,而GABA的改善作用与HSP70无关,可能与其神经系统和生理调控方面功能有关。(4)循环热应激对胸肌、腿肌的化学组成和肉品质指标产生了显着的负面影响。通过日粮中添加5g/kg Gln、100mg/kg GABA对于缓解热应激对这些指标带来的负面影响具有积极作用,其中的机制与骨骼肌中Gin代谢变化、(?)AMPK信号通路激活状况、HSP70表达量的变化有密切关系,且表现出了一定的协同效应和骨骼肌组织差异性。(5)通过体外骨骼肌细胞试验证明,热应激能激活肌细胞AMPK信号通路,促进HSP70的表达。热应激细胞中HSP70的表达可在一定程度上抑制AMPK信号通路的激活,起到保护细胞作用。在适温条件下细胞中AMPK的激活并不能导致HSP70表达量的变化。同时证明,外源性Gln、GABA均能抑制热应激骨骼肌细胞AMPK信号通路,但仅有Gln能有效保护热应激细胞,其作用与促进HSP70表达密切相关。
周玉香[7]2006年在《谷氨酰胺对早期断奶犊牛断奶应激以及小肠上皮细胞能量利用影响的研究》文中认为本论文采用细胞培养技术和胃肠外营养技术，全面系统地研究了谷氨酰胺(Gln)对早期断奶犊牛小肠上皮细胞能量利用、免疫功能、抗氧化能力和小肠粘膜结构的调控作用，以及对骨胳肌、小肠粘膜蛋白质、DNA和RNA含量的影响，为早期断奶犊牛抗应激调控提供了技术依据。研究共分为叁部分：第一部分为早期断奶犊牛应激状况的研究。选用体重和出生日期相近的3头中国荷斯坦犊牛，40±1d一次性断奶，研究了早期断奶应激对犊牛血液Gln含量、免疫和抗氧化功能、小肠吸收功能、氮沉积以及血液生化指标等的影响。结果表明，早期断奶应激引起犊牛血液Gln含量显着下降；机体的免疫和抗氧化功能显着降低；采食量下降、小肠吸收功能降低以及氮沉积减少；血浆葡萄糖含量极显着降低，血浆尿素氮和β-羟丁酸含量极显着增高；血浆生长激素和胰岛素水平下降，胰高血糖素水平升高。第二部分为早期断奶犊牛小肠上皮细胞能量利用的研究。选用体重和出生日期相近的3头中国荷斯坦犊牛，40±1d一次性断奶，断奶后第2d早晨空腹屠宰。无菌条件下，取下整个小肠，去除肠系膜，分离空肠段，取空肠中段用含不同水平的Gln和葡萄糖的DMEM培养液，进行小肠上皮细胞体外培养试验。结果表明，在小肠粘膜上皮细胞体外培养液中，加入血液水平2倍的Gln，有利于小肠上皮细胞的贴壁生长、小肠上皮细胞的分泌和细胞的能量储备。第叁部分为不同水平Gln对早期断奶犊牛抗应激调控的研究。选用体重和出生日期相近的12头中国荷斯坦犊牛，随机分为四组。40±1d一次性断奶。采用胃肠外营养技术(TPN)，经颈静脉灌注丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)二肽的方式，研究了不同水平Gln对早期断奶犊牛免疫和抗氧化等功能的影响。Ala-Gln灌注剂量为试验Ⅰ组(对照组，不灌注)，试验Ⅱ组(低水平)0.34g／kgBW／d，试验Ⅲ组(中等水平)0.68 g／kgBW／d，试验Ⅳ组(高水平)1.36 g／kgBW／d，连续灌注7d。结果表明，(1)通过胃肠外营养补充中等水平的Ala-Gln，可使早期断奶犊牛日增重显着增加。同时，提高了犊牛的采食量和饲料利用率，提高氮沉积和蛋白质合成，降低了腹泻的发生率。(2)通过胃肠外营养补充中等水平的Ala-Gln，可提高早期断奶犊牛机体的抗氧化能力和机体免疫功能。(3)通过胃肠外营养补充中等水平的Ala-Gln，可使早期断奶犊牛小肠绒毛高度和粘膜厚度增加，隐窝深度降低；骨骼肌蛋白质水平升高；空肠粘膜DNA含量以及骨骼肌和空肠粘膜RNA含量增高。
史红霞[8]2009年在《谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70表达的影响》文中研究指明本试验用不同剂量的谷氨酰胺(Gln)体外培养奶牛乳腺上皮细胞,分别检测在正常培养温度和高温应激条件下细胞的生长、增殖情况及HSP70mRNA的表达水平,旨在探讨不同剂量的G1n对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长、增殖、减缓应激损伤的作用及其与细胞HSP70mRNA的表达的关系。本研究分为两个部分：一、不同浓度的谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70mRNA表达的影响收集37℃,细胞培养基中G1n添加剂量依次为0,0.0625,0.25,0.5,2,4,8mmol／L的奶牛乳腺上皮细胞及细胞培养液,利用MTT法检测细胞增殖,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,RT-PCR分析Bcl-2/Bax及HSP70mRNA的表达量。进而研究Gln对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长、增殖的作用及其与热休克蛋白(HSP)70表达的关系。本研究结果表明,体外培养的奶牛乳腺上皮细胞其活性受Gln添加剂量的影响。Gln添加剂量为2mmol/L时,检测的细胞增殖能力最强,Bcl一2/Bax mRNA表达量比值最高,说明此添加剂量细胞活性最好。Gln对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞HSP70mRNA的表达有诱导作用,这种作用随G1n剂量的增加而增加。二、高温应激条件下谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70mRNA表达的影响本试验对乳腺上皮细胞进行37℃.39℃.41℃.43℃四个不同温度处理,根据细胞应激损伤程度筛选出热应激温度；对细胞进行0～8mmol/L不同剂量Gln预处理,再施加41℃高温处理,分别检测细胞的生长增殖情况及HSP70mRNA(?)勺表达量。旨在探讨不同温度对细胞的损伤情况和在高温应激条件下Gln对细胞生长、增殖、减缓应激损伤的作用,及诱导表达的HSP70对细胞应激损伤的作用。结果表明,以37℃培养条件为对照组,随着处理温度的增加细胞的凋亡率显着增加,其中以43℃最显着,41℃次之,39℃最轻。在41℃条件下,Gln添加剂量为0～0.25mmol/L时,对细胞增殖的抑制作用最明显,添加剂量为4和8mmol/L时能够提高细胞的活性；Gln添加剂量为0-0.5mmol/LG1n时,HSP70mRNA表达量低干对照组：添加剂量为4和8mmol/L时,HSP70mRNA表达量与对照组相比较分别提高了50.62%、91.56%,差异极显着,高剂量的Gln和高表达的HSP70能提高应激状态下细胞的活性。
刘丛[9]2014年在《VC、VE及Gln复合营养素对大鼠抗冷应激能力的影响及最佳剂量的筛选》文中认为本试验旨在分析低温条件下，日粮中联合添加不同水平的VC、VE以及Gln复合营养素在大鼠抗冷应激中的作用，确定其适宜添加量，对新型饲料复合营养素的研发提供基础数据，为更深层次的揭示寒冷环境对动物应激反应和对抗低温损伤提供更多的理论依据。试验对象选取12周龄左右，体质量（200±10）g清洁级健康雌性Wistar大鼠110只，随机分为冷应激对照组、常温对照组和9个复合营养素试验组，每组10只，根据L9（34）正交试验设计表确定每组灌胃剂量。正常饲养温度设置为21±0.05℃，湿度40±0.1％，采食饮水不限。预饲一周后对大鼠进行灌胃，试验组为VC、VE、Gln复合营养素，两对照组灌等体积水。伺服一周后利用人工智能气候室将温度迅速降至11±1℃，24h后腹主动脉采血，分离血清和淋巴细胞。采用双抗夹心Elisa方法检测血清激素去甲肾上腺素（NE）、血清生化指标（SOD、GSH-PX、MDA、T-AOC）和血清免疫指标（IgA、IgG、IgM、IL-2）含量的变化；采用q-PCR及Western Blotting方法检测HSP70mRNA及蛋白表达水平的变化；采用主成分分析（PCA）和综合平衡法对各指标数据进行分析筛选，确定复合营养素的最佳配伍剂量。试验结果如下：（1）VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠血清NE和抗氧化指标的影响经24h低温应激后大鼠血清NE含量普遍上升，即冷应激组与常温组相比差异极显着（p<0.01），试验组与对照组相比，第6组与常温组无明显差异性变化，其他试验组与冷应激组之间差异极显着（p<0.01）。血清氧化还原指标SOD浓度变化：冷应激组与常温组相比，含量极显着下降（p<0.01），试验组与冷应激组相比普遍有上升趋势；其中，2、3、8组无明显差异变化，4和7、5和6组间也无显着性差异。血清抗氧化指标GSH-PX浓度变化：冷应激组与常温组相比，含量极显着下降（p<0.01）；试验组与冷应激组相比普遍有升高趋势，其中，8组、9组与常温对照组差异显着（p<0.05）。血清总抗氧化能力T-AOC浓度变化：冷应激组与常温组相比，血清含量极显着下降（p<0.01）；试验组与冷应激组相比，血清浓度均有上升趋势；其中，1、2、3、4、5、8、9组间不存在差异，与冷应激对照组相比差异显着（p<0.05）。血清氧化还原指标MDA浓度变化：冷应激组与常温组相比，含量极显着升高（p<0.01），试验组与冷应激组相比，血清浓度有下降趋势；第5组与常温对照组无特异性差异，其余各组与冷应激对照组差异极显着（p<0.01）。（2）VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠血清免疫指标的影响细胞因子IL-2血清含量：冷应激组与常温组相比，血清浓度含量极显着降低（p<0.01），试验组与冷应激组相比，血清浓度普遍有上升趋势；其中，第2组与冷应激组不存在差异显着性，第6组与冷应激对照组存在显着性差异（p<0.05）。血清免疫球蛋白IgA浓度变化：冷应激组与常温组以及各试验组相比，含量差异极显着下降（p<0.01），试验组与冷应激组相比，血清免疫球蛋白浓度普遍有上升趋势；其中，第6、7组无明显差异，1、3、4组有显着性差异，其他各组间存在极显着性变化（p<0.05）；关于血清IgG含量，第8组与常温对照组无特异性差异，3与5组差异显着（p<0.05），6与7组差异不显着，其他各组含量差异极显着不同；关于血清IgM的含量：4、6与冷应激组相比，血清含量无明显差异性，1、7、8组与冷应激组比差异显着性升高（p<0.05），3、5与常温组相比，血清含量呈现差异性显着变化（p<0.05）。（3）VC、VE及Gln复合营养素对冷应激大鼠淋巴细胞HSP70表达的影响HSP70q-PCR检测结果：冷应激对照组HSP70mRNA转录量与常温组相比极显着升高（p<0.01），试验组与冷应激组相比，有下降趋势。其中，6、9、8组与常温对照组相比无明显变化，其他各组与常温对照组相比差异极显着（p<0.05）。经过冷应激后，HSP70表达变化为：冷应激对照组与常温对照组相比表达量极显着升高（P<0.01），与q-PCR检测结果相一致，其中，8、9组与常温对照组相比呈显着性差异变化（P<0.05），其他组与常温对照组相比差异极显着（P<0.01），降低趋势明显。（4）抗应激复合添加剂最优配伍剂量的筛选采用主成分分析（PCA）与综合平衡法相结合，利用SPSS19.0，经过对11项指标原始数据进行PCA分析与综合平衡法验证，最终确定复合营养素最佳剂量：VC:300mg/kg，VE:100mg/kg，Gln:2500mg/kg。结论如下：抗冷应激复合营养素对降低大鼠冷应激敏感性、抵抗冷应激作用具有较理想的保护效果。四种添加剂饲料添加的最佳配伍剂量为VC:300mg/kg，VE:100mg/kg，Gln:2500mg/kg。
李金敏[10]2009年在《谷氨酰胺对慢性冷应激雏鸡肝脏损伤的影响》文中研究表明冷应激是北方高寒地区动物,尤其是新生动物最普遍的应激原之一。由于冷应激可以导致动物生长性能及抗病力下降,已成为制约北方畜牧业健康发展的难题之一。因此开发抗冷应激药物或营养物质已成为当前营养生理学的研究热点之一。目前已有研究表明谷氨酰胺(Glutamine,Gln)对于创伤、感染、早期断奶等应激反应具有缓解作用。本试验以15d龄雏鸡为研究对象,复制雏鸡慢性冷应激模型,同时,在日粮中添加低、中、高叁种剂量的Gln粉剂,检测受试雏鸡肝脏病理组织学变化、肝功能、血清及肝脏的抗氧化功能及NO代谢水平、肝细胞凋亡率和肝脏HSP70 mRNA表达水平,结果如下:1.冷应激组血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)含量均高于对照组,Gln添加组上述指标相对于冷应激组均有不同程度的降低,以Gln高剂量组降低最明显;冷应激组血清总蛋白(TP)、白蛋白/球蛋白(A/G)均低于对照组,Gln添加组这两个指标相对于冷应激组均有不同程度的升高,以中、高剂量组最明显。表明添加中、高剂量的Gln对冷应激所致雏鸡肝功能的损伤具有缓解作用。2.冷应激组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和肝组织SOD活性持续降低,肝组织GSH-Px活性早期保护性升高,中、后期明显降低,丙二醛(MDA)含量升高,肝脏GSH-Px mRNA表达量先升高后降低;添加中、高剂量的Gln可以显着提高GSH-Px、SOD活性,降低MDA含量,提高肝脏GSH-Px mRNA表达量。表明添加中、高剂量的Gln对冷应激造成的氧化损伤具有缓解作用。3.冷应激时血清中NO含量和NOS活性升高,肝脏中NO含量、NOS活性及iNOS mRNA表达水平呈现先降低后升高的趋势;Gln添加组血清及肝脏NO含量和NOS活性、肝脏iNOS mRNA表达水平均有不同程度的降低,表明Gln可以通过影响血清及肝脏内NO的代谢以及肝脏iNOS mRNA的表达水平,来发挥其对雏鸡肝脏的保护作用。4.冷应激组雏鸡肝细胞凋亡率相对于对照组明显增加,线粒体和内质网损伤,添加Gln后降低了肝细胞凋亡率及细胞器的损伤程度。从细胞水平上说明Gln对冷应激引起的肝细胞凋亡具有缓解作用。5.冷应激中、后期肝脏HSP70 mRNA表达水平显着降低,而添加Gln提高了冷应激全过程肝脏HSP70 mRNA的表达水平。从分子水平上说明Gln能缓解冷应激对雏鸡肝脏的损伤。上述指标检测结果从器官、细胞和分子水平上探讨了慢性冷应激对雏鸡肝损伤作用及Gln的保护作用,揭示了Gln可在多个环节抵抗慢性冷应激对雏鸡肝脏的损伤,发挥其保护作用。
参考文献：
[1]. 谷氨酰胺的抗动物应激研究[D]. 谢新民. 南京农业大学. 2003
[2]. 谷氨酰胺、L-肉碱对肉仔鸡抗低温应激能力影响的研究[D]. 申凤华. 黑龙江八一农垦大学. 2008
[3]. 大鼠的运输应激及谷氨酰胺的抗应激研究[D]. 吴艳. 南京农业大学. 2008
[4]. 谷氨酰胺和L-肉碱对肉羊抗低温应激能力影响的研究[D]. 高福久. 黑龙江八一农垦大学. 2010
[5]. 谷氨酰胺（Gln）对免疫应激蛋鸡经济性状和免疫功能影响的研究[D]. 段晓燕. 西北农林科技大学. 2012
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[7]. 谷氨酰胺对早期断奶犊牛断奶应激以及小肠上皮细胞能量利用影响的研究[D]. 周玉香. 内蒙古农业大学. 2006
[8]. 谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70表达的影响[D]. 史红霞. 南京农业大学. 2009
[9]. VC、VE及Gln复合营养素对大鼠抗冷应激能力的影响及最佳剂量的筛选[D]. 刘丛. 黑龙江八一农垦大学. 2014
[10]. 谷氨酰胺对慢性冷应激雏鸡肝脏损伤的影响[D]. 李金敏. 东北农业大学. 2009
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