出核信号论文_侯强

导读:本文包含了出核信号论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:信号,圆环,蛋白,病毒,论文,HeLa,NLS。

出核信号论文文献综述

侯强^[1]（2018）在《核定位信号肽介导猪圆环病毒2型Cap蛋白出核机制的研究》一文中研究指出核定位信号肽(Nuclear localization signal,NLS)是一段由带正电荷的碱性氨基酸及其旁侧的调控元件组成的短肽,它能介导蛋白或核酸进入细胞核。目前研究发现,在生物体内各种功能性分子中,核定位信号肽广泛存在。蛋白分子通过核定位信号肽与转运蛋白结合,穿过核孔复合体(Nuclear pore complexes,NPC)进入出细胞核,从而完成自身结构的修饰、折迭包装或与特定靶分子结合,进而实现特定生物学信息的传递。PCV2 Cap蛋白是构成PCV2核衣壳结构的主要蛋白分子。根据研究报道,Cap蛋白N端1~41位氨基酸为富含精氨酸的NLS,能够介导蛋白进入细胞核,但是目前Cap蛋白进入细胞核后是否出核以及出核的调控机制未知。基于以上问题,我们针对PCV2 Cap蛋白进行了如下研究:1.猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的制备与鉴定。从临床病料中扩增获得PCV2 Cap基因,并进行序列比对和抗原性分析,发现扩增获得的PCV2 Cap基因属于PCV2d亚型,在抗原性方面与国内PCV2a、PCV2b代表性毒株、以及疫苗株之间存在4个差异部位;利用杆状病毒表达系统将Cap基因进行表达,将目的蛋白进行Western blot、IFA、质谱以及透射电镜检测。结果表明,PCV2d Cap蛋白在昆虫细胞内成功表达并具有良好的免疫原性;PCV2d Cap蛋白在昆虫细胞内完成自组装,形成与天然病毒结构相似的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP),为PCV2d亚单位疫苗研制及诊断抗原开发提供了前期研究基础。2.制备了一株能够特异性识别PCV2病毒样颗粒的单克隆抗体。利用昆虫细胞表达系统分别制备了两种形式的Cap蛋白:PCV2 VLP和去掉NLS的Cap蛋白(tCap),以前者作为免疫原制备杂交瘤细胞,后者进行阳性克隆的筛选,获得一株能够分泌特异性识别tCap的杂交瘤细胞株(1F6),通过Western blot、IFA和免疫电镜对其生物学特性进行鉴定。结果显示,1F6能够特异性识别PCV2 VLP、天然PCV2和线性结构的Cap蛋白,为下一步研究Cap蛋白的出核及调控机制提供了基础。3.NLS通过磷酸化修饰调控PCV2 Cap蛋白出核。通过流式拍照技术对Cap及其突变体的胞内动态分布进行分析,发现NLS介导Cap蛋白进入细胞核后,然后介导Cap蛋白出核,NLS是PCV2Cap蛋白出核所必需和充分的组件;通过质谱技术对Cap蛋白的翻译后修饰进行分析,发现Cap蛋白NLS存在一个磷酸化修饰位点(S17),进一步通过流式拍照技术和激光共聚焦技术对该位点与Cap蛋白胞内转运的关系进行分析,发现NLS通过S17位点的磷酸化修饰启动PCV2 Cap蛋白的出核转运;另外,通过激光共聚焦技术对Rep(Rep’)蛋白和Cap蛋白的胞内转运关系进行分析,发现Cap蛋白的胞内转运不受Rep(Rep’)蛋白的影响。综上所述,本研究制备并鉴定了PCV2d亚型病毒样颗粒及针对该病毒样颗粒的单克隆抗体,证明了NLS是介导PCV2 Cap蛋白出核所必需和充分的组件,NLS通过磷酸化修饰调控Cap蛋白出核,为进一步理解PCV2病毒的复制机制提供了基础和理论依据。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-05-01）

萧鹏^[2]（2014）在《小鼠TET3蛋白入核信号的鉴定及其出核机制初探》一文中研究指出基因激活与DNA去甲基化相关。TET家族蛋白能够通过甲基氧化作用介导DNA去甲基化。小鼠TET3蛋白是由1668个氨基酸组成的DNA甲基氧化酶,其在胞质内翻译和修饰,在核内发挥甲基氧化功能。TET3蛋白分子量大,难以被动扩散入核,所以,TET3可能存在一个或多个入核信号(NLS)。本文采用生物信息学手段在TET3蛋白预测到五个常规NLS,并对这些NLS进行了功能和唯一性验证。(1)本论文构建了一系列截短TET3片段与EGFP融合蛋白表达载体,载体导入细胞系后观察这些融合蛋白的核定位情况,结果发现,TET3的NLS大概位置在1310-1668之间；进一步的突变实验证明TET3蛋白的KKRK序列具有核定位功能,并且序列比对发现,KKRK序列在NCBI公布的所有物种TET3蛋白中保守。(2)融合蛋白表达载体转染细胞试验发现,在胞质蛋白EGFP-GH和EGFP-GST后面连接含有KKRK的TET3片段,均导致了这些胞质蛋白的入核；甚至单独的KKRK连接到这些胞质蛋白,也导致了它们的入核,而将去除KKRK的TET3片段连接在胞质蛋白后面,则不会入核。试验证明了KKRK是TET3入核的充分必要条件。前人的研究证实,介导含有KKRK短肽蛋白入核的辅助蛋白是importin-α和importin-β,据此本文推测TET3入核也是由importin-α和importin-β介导的。(3)论文试验中发现某些TET3片段有出核的现象,文献报道LBM(莱普霉素B)能抑制TET3的出核,论文推测可能是TET3某个或者某些氨基酸的乙酰氨基葡萄糖基化修饰导致了其出核；这种修饰是通过影响TET3自身NES(出核信号)的空间构象,还是影响与其他出核蛋白的结合,有待后续实验验证。此外,在高糖情况TET3出核,表明了营养可能影响基因组的5hmC水平。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-06-01）

出核信号论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

基因激活与DNA去甲基化相关。TET家族蛋白能够通过甲基氧化作用介导DNA去甲基化。小鼠TET3蛋白是由1668个氨基酸组成的DNA甲基氧化酶,其在胞质内翻译和修饰,在核内发挥甲基氧化功能。TET3蛋白分子量大,难以被动扩散入核,所以,TET3可能存在一个或多个入核信号(NLS)。本文采用生物信息学手段在TET3蛋白预测到五个常规NLS,并对这些NLS进行了功能和唯一性验证。(1)本论文构建了一系列截短TET3片段与EGFP融合蛋白表达载体,载体导入细胞系后观察这些融合蛋白的核定位情况,结果发现,TET3的NLS大概位置在1310-1668之间；进一步的突变实验证明TET3蛋白的KKRK序列具有核定位功能,并且序列比对发现,KKRK序列在NCBI公布的所有物种TET3蛋白中保守。(2)融合蛋白表达载体转染细胞试验发现,在胞质蛋白EGFP-GH和EGFP-GST后面连接含有KKRK的TET3片段,均导致了这些胞质蛋白的入核；甚至单独的KKRK连接到这些胞质蛋白,也导致了它们的入核,而将去除KKRK的TET3片段连接在胞质蛋白后面,则不会入核。试验证明了KKRK是TET3入核的充分必要条件。前人的研究证实,介导含有KKRK短肽蛋白入核的辅助蛋白是importin-α和importin-β,据此本文推测TET3入核也是由importin-α和importin-β介导的。(3)论文试验中发现某些TET3片段有出核的现象,文献报道LBM(莱普霉素B)能抑制TET3的出核,论文推测可能是TET3某个或者某些氨基酸的乙酰氨基葡萄糖基化修饰导致了其出核；这种修饰是通过影响TET3自身NES(出核信号)的空间构象,还是影响与其他出核蛋白的结合,有待后续实验验证。此外,在高糖情况TET3出核,表明了营养可能影响基因组的5hmC水平。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。