重组rSD01H9N2禽流感病毒感染A549细胞及其诱导的免疫反应

重组rSD01H9N2禽流感病毒感染A549细胞及其诱导的免疫反应

论文摘要

为了解禽流感病毒(AIV)与其他病毒重组带来的风险,本试验利用反向遗传技术,以H9N2A/Chicken/Shandong/01/2008(SD01)株为骨架,将其PA基因替换为H1N1A/swine/Shandong/07/2011(SD07)株的PA基因,构建了1株重组病毒rSD01-PA。以A549细胞为模型,感染H9N2AIV SD01及其重组株rSD01-PA。通过间接免疫荧光(IFA)和荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法,检测H9N2AIV及其重组株在A549细胞上的复制情况,以及4种模式识别受体(TLR-3、TLR-7、RIG-I和MDA-5)和4种细胞因子(IFN-β、IL-6、MX和OAS)。结果显示:SD01和重组株rSD01-PA在A549细胞上均能有效复制,且重组株rSD01-PA复制能力较强。同时2株毒均能引起4种模式识别受体和4种细胞因子显著上调。在病毒感染的过程中,rSD01-PA感染A549细胞引起的炎性细胞因子IFN-β、IL-6和MX的表达水平较SD01更高。本试验结果将有助于进一步认识H9N2亚型AIV与其他病毒重组带来的风险以及病毒感染后宿主的防御机制及感染反应。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病毒株和细胞
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 病毒基因的扩增及重组质粒的构建
  •   1.4 重组病毒株的拯救以及序列鉴定
  •   1.5 病毒TCID50的检测以及生长曲线
  •   1.6 间接免疫荧光试验
  •   1.7 模式识别受体及细胞因子mRNA水平的检测
  •   1.8统计分析
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒构建以及拯救病毒的鉴定
  •   2.2 病毒TCID50和病毒生长曲线测定
  •   2.3 间接免疫荧光检测结果
  •   2.4 模式识别受体mRNA的表达量检测结果
  •   2.5 细胞因子mRNA的表达量检测结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 郝梦婵,韩少杰,柴同杰

    关键词: 重组病毒,细胞,复制,模式识别受体,细胞因子

    来源: 中国兽医学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 山东农业大学动物科技学院

    基金: 后勤科研重点资助项目(BWS17J034),国家自然科学基金资助项目(31470258)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.01.15

    页码: 81-87

    总页数: 7

    文件大小: 1071K

    下载量: 76

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