cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式

cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达模式

论文摘要

目的:探讨cdh5-mRNA在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中的表达模式。方法:收取tuebingen野生型斑马鱼多个发育时间节点的胚胎,提取其总RNA,体外逆转录后RT-PCR扩增cdh5基因片段,将cdh5基因片段插入pCS2+质粒载体中,挑选阳性单克隆菌落,通过双酶切、测序等方法鉴定pCS2+-cdh5重组质粒;重组质粒单酶切后用T3RNA体外转录体系制备地高辛标记的cdh5基因的反义mRNA探针,对斑马鱼全胚胎进行原位杂交,显微镜下观察各发育节点胚胎cdh5-mRNA杂交信号并拍照。结果:构建并鉴定了pCS2+-cdh5重组质粒,各发育节点胚胎经全胚胎原位杂交后发现在tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育至3.7~12 hpf时cdh5-mRNA呈低丰度泛在表达,18~36 hpf时在后脑及血管处表达、在造血系统高表达,48 hpf后仅在脑部和血管处低表达。结论:在野生型斑马鱼胚胎期发育过程中可以检测到cdh5-mRNA在后脑和血管处有表达,并且在造血组织高表达。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验动物
  •     1.1.2 实验试剂
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 野生型斑马鱼总RNA的提取及cdh5基因克隆
  •     1.2.2 pCS2+-cdh5 重组质粒的构建与鉴定
  •     1.2.3 cdh5反义mRNA探针制备
  •     1.2.4 野生型斑马鱼胚胎原位杂交
  • 2 结果
  •   2.1 cdh5 基因片段 RT-PCR扩增
  •   2.2 pCS2+-cdh5重组质粒酶切鉴定
  •   2.3 pCS2+-cdh5重组质粒菌落 PCR 鉴定
  •   2.4 pCS2+-cdh5重组质粒测序鉴定
  •   2.5 野生型斑马鱼cdh5基因mRNA全胚胎原位杂交
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 吴西军,姚冬静,刘庆,杨小燕,王念雪,王一慧,舒莉萍,何志旭

    关键词: 斑马鱼,胚胎发育,基因,基因表达,遗传载体,全胚胎原位杂交

    来源: 贵州医科大学学报 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心,贵州医科大学免疫学教研室,河北省人民医院儿科,贵州医科大学附院呼吸与危重症医学科,贵州医科大学附院儿童血液肿瘤科

    基金: 国家自然科学基金地区项目(81760025),中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2017PT31042,2018PT31048),贵阳市科技计划项目(筑科合同201500103),贵州省教育厅青年成长基金[黔教合(2018)192]

    分类号: Q132

    DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.11.001

    页码: 1241-1246

    总页数: 6

    文件大小: 3128K

    下载量: 161

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