论文摘要
分子克隆是现代生物学研究的核心技术之一,是基因工程、蛋白质工程中的重要手段。为提高分子克隆实验的操作效率,本研究设计并合成基于聚合酶引物不完全延伸（polymerase incomplete primer extension,PIPE）现象的质粒克隆位点序列。并以此为基础统一相关引物的设计方案,避免传统酶切——连接法中需针对不同载体MCS序列设计不同引物的缺点。该方案利用13 bp定长接头序列,在同一体系中使用2对引物、2种线性化模板同时扩增载体和插入片段,通过20个循环,在1次PCR过程中即合成可供转化使用的带缺口质粒产物。在NEB Q5酶系统中,利用此法将3种荧光素酶序列插入pET-15b及pET-21b（+）载体,均获得成功。且利用商品化感受态细胞（转化效率> 5×108cfu/μg）转化后所获得转化子数量均在300个以上,其中含插入片段的阳性克隆比例可达85%以上。基于本方案的设计及作用原理,可将其应用于10 kb以内载体和插入片段的快速重组。且具有通用性强、耗时少、阳性克隆得率高和成本低等优点,是传统DNA重组方法的有益补充,可作为各实验室的常规分子克隆手段之一。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 陈凡,喻艳莉,李奕雅
关键词: 聚合酶引物不完全延伸,聚合酶链式反应,分子克隆,克隆位点序列
来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年10期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学
单位: 闽南师范大学生物科学与技术学院
基金: 福建省自然科学基金项目(No.2018J01464),漳州市科技计划项目(No.ZZ2018J18),福建省中青年教师教育科研项目(No.JAT170353,JAT170354)资助~~
分类号: Q785
DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.10.16
页码: 1166-1174
总页数: 9
文件大小: 382K
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标签：聚合酶引物不完全延伸论文; 聚合酶链式反应论文; 分子克隆论文; 克隆位点序列论文;