张莉芳[1]2003年在《当归芍药散防治动脉粥样硬化的实验研究》文中研究说明动脉粥样硬化（Atherosclerosis AS）是心脑血管病的主要病理基础，它所导致的心脑血管疾病是对人类健康最有威胁的一类疾病，其死亡率已占人群死亡率的首位。目前国内外医学对其尚未有满意治疗,虽然从较公认的几种病机学说出发，采用调整血脂、抗氧化、防止血管内皮损伤、抗血栓形成及应用钙拮抗剂等方法，取得了长足发展，但一些副作用及较高的复发率乃致死亡率仍居高不下。鉴于本病的发病机制至今尚未完全明了，探求有效的治法已势在必行。据其发病特点和临床表现，本病属中医学[1-4]“心痛”“胸痛”、“心悸”、“眩晕”等范畴，病机主要为：痰、瘀、虚。中医学对其有较为系统、深刻的认识，并有大量有效方药记载，如何挖掘并发挥这些方药，在目前防治动脉粥样硬化工作中已显颇为重要。《金匮要略》妇人篇“当归芍药散”,由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻六味药组成，具有和血化瘀、祛痰化浊、补脾祛湿之功效。遵循中医“谨守病机，异病同治”原则,并根据我导师阎艳丽教授的临床经验,我们选择该方，通过动物实验对其防治动脉粥样硬化进行了实验研究，旨在为防治动脉粥样硬化提供理想的中医经方治疗，为临床应用提供可靠的实验依据。<WP=4>目的：观察当归芍药散对实验性动脉粥样硬化家兔的影响，并探讨当归芍药散防治动脉粥样硬化的作用机制 方法：1治疗药物（“当归芍药散”）用量计算 按照原方药物用量比例（当归：芍药：川芎：茯苓：白术：泽泻为3：16：8：4：4：8），参照现在临床常用量当归为10g,其他五味药按比例计算，再据“人体—家兔体表面积比值法”[5]换算家兔的用药量为低剂量组：生药24g/kg.d及高剂量组：生药48g/kg.d。2动物分组处理 据文献[6]，采用高脂饲料喂养法复制动脉粥样硬化动物模型。将体重1.5-2.5kg的健康新西兰纯种雄性大白兔50只随机分为5组，每组10只，分别为空白对照组，模型对照组，当归芍药散低剂量（24g/kg.d）组，当归芍药散高剂量(48g/kg.d)组及阳性药物（吉非罗齐0.15g/kg.d）对照组。空白对照组喂普通饲料；模型对照组喂高脂饲料（饲料配方：普通饲料中含1%胆固醇,4%蛋黄粉，10%猪油）；当归芍药散低剂量组喂高脂饲料加当归芍药散汤剂（饲料配方：每kg高脂饲料中含当归芍药散浓缩液48ml,相当于生药480g,当归芍药散汤剂在饲料加工过程中匀掺于高脂饲料中）；当归芍药散高剂量组喂高脂饲料加当归芍药散汤剂（饲料配方：每kg高脂饲料中含当归芍药散浓缩液96ml,相当于生药960g）；阳性药物对照组喂高脂饲料加吉非罗齐（饲料配方：高脂饲料中含0.15%吉非罗齐）。各组每兔每天进食总量相等，限制为100g。动物分笼饲养，自由饮水，连续喂养2个月。3指标测定 分别于实验第二周、第四周、第八周（采血前禁食12小时）耳中央动脉取血，测定其血清总胆固<WP=5>醇（TC）、甘油叁脂（TG）、高密度脂蛋白（HDL-c）含量，并由Friedewald公式：LDL-c=TC—（1/5TG+HDL-c）推算出低密度脂蛋白（LDL-c）的含量，由AI = TC－HDL-c/HDL-c公式计算动脉粥样硬化指数（AI）。第八周取血完毕，气栓法处死家兔，解剖后立即分离并取下全部主动脉（从主动脉起始部到腹主动脉分叉处），剔除血管外结缔组织及脂肪，每组随机取4个主动脉起始部2cm标本， PBS中清洗血块后，置70%乙醇中，以备流氏细胞检测用。另取每个主动脉标本上段2cm，置于10%福尔马林溶液中固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜观察。结果：1 对血清血脂及AI的影响 实验8周后，模型组血清TC、TG、HDL-c、LDL-c含量及AI明显高于空白对照组(P<0.01)；当归芍药散低剂量组TC、TG、LDL-c含量及AI明显低于模型组（TC 9.87±3.40/14.10±7.72 P<0.05, TG 2.04±0.97/4.03±3.63 P<0.05, LDL 5.89±2.91/10.81±6.52 P<0.01，AI 1.73±0.72/4.5±1.66 P<0.01），HDL-c明显高于模型组（3.57±0.77/2.48±0.86 P<0.01）; 当归芍药散高剂量组TC、TG、LDL-c含量及AI明显低于模型组（TC 8.23±3.47/14.10±7.72 P<0.01, TG 1.81±0.56/4.03±3.63 P<0.01, LDL-c 4.07±3.03/10.81±6.52 P<0.01，AI 1.13±0.63/4.5±1.66 P<0.01）， HDL-c明显高于模型组（3.8±0.69/2.48±0.86 P<0.01）。说明当归芍药散高、低剂量组均能有效调整血脂，降低AS发生系数的作用，其中高剂量组较低剂量组有更好效果。2对主动脉平滑肌细胞的影响 模型对照组家兔主动脉平滑肌细胞的凋亡率、增殖率、Bcl-2和Bax蛋白表达<WP=6>量均高于空白对照组（P<0.01或P<0.05）；当归芍药散低、高剂量组家兔主动脉平滑肌细胞的凋亡率均明显高于模型对照组（分别为13.85±3.83/8.85±0.95 P<0.05, 15.63±2.15/8.85±0.95 P<0.01）。高剂量组中过高表达可以促进细胞凋亡的Bax表达量明显高于模型组 ( 1.78±0.21 / 1.54±0.04 P<0.05)。而低、高剂量组增殖率明显低于模型对照组（分别为18.23±1.12/21.59±0.14 P<0.01, 16.54±1.53 /21.59±0.14 P<0.01 ）,高剂量组中对凋亡起抑制作用的Bcl-2的表达量也相应低于模型对照组（1.47±0.03 /1.71±0.04 P<0.01）。3主动脉病理组织学观察 空白对照组家兔主动脉血管壁内?
吉梅[2]2006年在《当归芍药散（汤剂）调血脂、保护血管内皮细胞功能的实验研究》文中指出近年来关于动脉粥样硬化(AS)发生机理的研究已进入较深的层次。现已公认,血脂异常(dyslipidemia)是导致AS发生发展的重要危险因素,而血管内皮细胞(VEC)功能损伤是AS病理过程中最重要的始动环节。现有结果显示,继发于内皮损伤的内皮通透性、粘附性、血管舒张性、血液凝固性及所释放的大量细胞因子活性的改变及其相互之间的影响、渗透,导致了AS的形成与发展。故调节血脂代谢、保护VEC功能可有效防治AS及由此引发的心脑血管疾病。大量研究显示中药在调血脂、抗AS方面具有独特的优势,故开发利用有效的中药来调节血脂、保护内皮细胞功能,进一步防治AS及其相关的心脑血管疾病具有重要意义。当归芍药散(DSS)出于《金匮要略》,组方严谨、用药精当,原为妇科良方,具有祛痰除湿、和血化瘀、调养肝脾之效。近年来,根据中医学“谨守病机、异病同治”的原则,并结合现代药理学研究成果,其应用范围不断拓展,已施治于多种病症。但文献所及,尚未发现其治疗血脂异常及AS的相关研究报道。本课题组前期已对其进行了防治血脂异常及AS的实验研究,证实该方确有较好的调血脂、抗AS的作用。本实验严守该方原用药比例,对实验性血脂异常大鼠从调血脂、保护VEC功能方面做进一步研究,以探讨其抗AS的可能机制。
蔡景竹[3]2005年在《当归芍药散（汤剂）防治大鼠实验性血脂异常的基础研究》文中研究表明血脂异常(dyslipidemia)是指由于脂质代谢或运转异常使血浆中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油叁酯(TG)超过正常范围和(或)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低下的一种病症，惯称高脂血症(hyperlipidemia，HLP)。血脂异常是导致动脉粥样硬化并进而引发心脑血管疾病的主要病理基础，故有效防治血脂异常是控制心脑血管疾病发生发展的重要途径。 当归芍药散(DSS)首载于《金匮要略》，系由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻组成，本为妇科良方，具有祛痰湿、化瘀血、调养肝脾之功效，根据中医学“谨守病机，异病同治”的原则，其应用范围不断拓展，已施治于多种病症。本课题组临床中发现，DSS调血脂效果满意，而文献所及，尚未发现此方面的实验报道，故选择该方并严守原药物用量比例，进行防治大鼠实验性血脂异常的基础研究。 目的：观察当归芍药散(汤剂)对血脂异常的防治作用并探讨其机理，为临床应用该方提供理论依据。 方法 1 当归芍药散(汤剂)对高脂乳剂所致大鼠血脂异常的影响：
于永军[4]2005年在《当归芍药散（煎剂）对实验性心肌缺血的影响》文中研究指明缺血性心脏病(ischemia heart disease, IHD)即冠状动脉性心脏病(coronary heart disease, CHD),简称冠心病,属中医“胸痹”、“心痛”等范畴。近年来该病在我国呈上升趋势,严重威胁人类健康,探索有效防治药物具有重大意义。当归芍药散(DSS)原为《金匮要略》妇人良方,系由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻组成。根据“谨守病机,异病同治”原则,目前其应用已拓展到临床各科。本人导师临床发现该方对冠心病疗效确切,而资料所及尚未见到有关其防治心肌缺血的实验报道,故选择该方并谨守原用药比例,进行本研究。目的:观察当归芍药散对心肌缺血动物模型的影响,并初探其作用机制,为临床应用本方防治CHD 提供实验依据。方法:1 当归芍药散对异丙肾上腺素(ISO)所致大鼠心肌缺血的影响:50 只健康雄性Wistar 大鼠随机分为5 组,即空白对照组、模型组、DSS 低剂量组(14g 生药/kg·d)、DSS 高剂量组(28g 生药/kg·d)和阳性对照组(复方丹参滴丸0.081g/Kg·d),每组10 只。空白对照组和模型组灌服蒸馏水,其余各组灌服相应药物,每天1 次,连续7 天。从第5 天开始,除空白对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组均于给药后1h 腹腔注射ISO(5mg/kg),连续注射3 天进行造模。期
王依瑮[5]2017年在《当归芍药散对血管性痴呆大鼠行为学的影响及其机制探究》文中研究说明目的:目前,国际上治疗痴呆的策略很多,也投入大量的人力、物力进行治疗痴呆的药物开发,但至今临床上能够有效治疗痴呆的药物却仍不多见。当归芍药散出自张仲景所着《金匮要略》,以当归、芍药、川芎、白术、茯苓、泽泻等六味药组成,最初用于治疗妇科疾患,因具有活血化瘀的功效,也常将之用于血瘀证的治疗。方中芍药(白芍)养血、川芎活血、当归兼具活血养血;更配以茯苓、白术、泽泻健脾渗湿。当归芍药散整方活血养血、健脾利湿,具有补本虚、兼祛标实特点,全方补中寓泻,又泻中求补。目前已有许多研究报道,当归芍药散能够有效改善痴呆患者的临床症状及提高患者的生存质量。当归芍药散出自张仲景所着《金匮要略》,目前已有许多研究证明当归芍药散能够有效改善痴呆患者的临床症状。这些研究证明当归芍药散在治疗VD方面有着巨大的研究价值,但其作用靶点仍有待进一步的深入探索。本研究采用双侧颈总动脉结扎方法制备血管性痴呆大鼠模型,通过行为学试验检测血管性痴呆大鼠学习记忆能力的改变,以及检测血管性痴呆大鼠体内相关生化指标的变化,阐明当归芍药散对血管性痴呆大鼠神经保护作用的机制及可能的作用靶点,为治疗血管性痴呆提供新的科学依据。方法:本研究分别应用Morris水迷宫以及条件恐惧试验从宏观方面观察当归芍药散对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响。采用经典的双侧劲总动脉结扎方法制备血管性痴呆大鼠模型,假手术组大鼠仅暴露分离双侧颈总动脉,不进行结扎处理。选用300±20g体重的SD雌性大鼠进行造模,造模完成后,按随机区组设计原则进行分组,每组12只,分为模型组、当归芍药散低剂量组、当归芍药散高剂量组以及阳性对照药组(尼莫地平)。选择体重相近的SD雌性大鼠12只设为假手术组,饲养于广州中医药大学实验动物中心SPF级清洁鼠房。当归芍药散低剂量组给予1.8g/Kg/d,当归芍药散高剂量组给予7.2g/Kg/d灌胃,假手术组和模型组以等体积蒸馏水灌胃,每日灌胃给药1次,持续给药4周。随后进行Morris水迷宫和条件恐惧试验。当归芍药散对血管性痴呆大鼠脑中神经元细胞存活的影响:采用Western Blot检测大鼠脑中Bcl-2、Bax、Cleavage Caspase-3等凋亡相关因子蛋白水平的变化。采用尼氏染色法检测血管性痴呆大鼠脑中海马CA1区神经元细胞存活情况的变化。当归芍药散对血管性痴呆大鼠脑中氧化应激反应相关指标的影响:采用试剂盒检测大鼠脑中MDA、SOD和ROS等与氧化应激反应相关指标的变化。当归芍药散对血管性痴呆大鼠脑中Aβ转运相关蛋白LRP1、RAGE的影响:采用荧光定量PCR法和Western Blot检测大鼠脑中A β转运相关蛋白LRP1、RAGE的基因水平和蛋白水平的变化。ELISA检测大鼠海马A β 1-42含量的变化。结果:1.当归芍药散对血管性痴呆大鼠学习记忆能力的影响Morris水迷宫测试结果:在可视平台试验中,各实验组大鼠之间的逃避潜伏期并没有出现明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。在为期5天的定位航行测试中,各实验组大鼠的逃避潜伏期随着训练时间呈缩短趋势。与模型组比较,假手术组大鼠的逃避潜伏期缩短更为显着,差异有统计学意义(P<0.01)。且当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠的逃避潜伏期均较模型组大鼠缩短更为显着,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。随后进行的空间探索测试结果,与模型组比较,假手术组大鼠穿越原平台位置的次数以及在平台所在象限的游泳行程均显着增多,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。且当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠穿越原平台位置的次数以及在平台所在象限的游泳行程也均较模型组大鼠增多,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05;P<0.05,P<0.05)。条件恐惧试验结果:3h后的测试结果显示,各实验组大鼠之间的凝滞持续时间并没有显着的差异,差异无统计学意义(P>0.05)。24h后的测试结果显示,与模型组比较,当归芍药散大鼠对新凝滞持续时间显着增高,差异有统计学意义(P<0.01),且当归芍药散高剂量组大鼠凝滞持续时间也较模型组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.当归芍药散对血管性痴呆大鼠脑中神经元凋亡相关蛋白的影响Western Blot检测结果显示,与模型组比较,当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠脑中凋亡相关因子Bcl-2与Bax蛋白表达水平的比值显着增高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。与模型组比较,当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠脑中凋亡相关因子Cleavage Caspase-3的蛋白水平显着降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。尼氏染色法检测血管性痴呆大鼠脑中神经元存活情况结果显示,与模型组比较,当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠脑中海马CAI区神经元细胞存活数量增多,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。3.当归芍药散对血管性痴呆大鼠脑中氧化应激反应相关指标的影响试剂盒检测结果显示,与模型组比较,当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠脑中氧化应激反应相关指标MDA的表达水平显着降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。与模型组比较,当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠脑中氧化应激反应相关指标SOD的活性升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05)。与模型组比较,当归芍药散高剂量组和阳性对照药组大鼠脑中氧化应激反应相关指标ROS的活性显着降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.01)。4.当归芍药散对血管性痴呆大鼠脑中A β转运相关蛋白LRP1、RAGE的影响荧光定量PCR法检测结果显示,与模型组比较,当归芍药散低剂量组、当归芍药散高剂量组以及阳性对照药组LRP1的mRNA水平显着增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。各实验组大鼠之间RAGE的mRNA水平无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。Western Blot检测结果显示,与模型组比较,当归芍药散低剂量组、当归芍药散高剂量组以及阳性对照药组LRP1的蛋白表达水平显着增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.05)。各实验组大鼠之间RAGE的蛋白表达水平无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测大鼠海马A β1-42结果显示,与假手术组比较,模型组A β 1-42含量显着增多,差异有统计学意义(P<0.05);各实验用药组与模型组比较均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:行为学测试结果表明,当归芍药散能够改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力。生化指标检测及形态学结果表明,当归芍药散可能通过调控血管性痴呆大鼠脑中神经元细胞凋亡相关蛋白以及氧化应激反应相关指标,发挥神经保护作用。虽然当归芍药散没有对RAGE产生明显的影响,且大鼠海马A β含量也没有发生变化,但是当归芍药散可能通过其他与LRP1相关的机制发挥作用。本研究的结果表明,当归芍药散有希望给血管性痴呆的治疗带来新的治疗策略。
杨旭杰[6]2006年在《当归芍药散（汤剂）防治血脂异常组方作用的协同性研究》文中认为血脂异常(dyslipidemia)是由于脂质代谢或转运异常使血浆中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油叁酯(TG)超过正常范围和(或)高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低下的一种病症,惯称高脂血症(HLP)。它是导致动脉粥样硬化(AS)进而引发心脑血管疾病的主要病理基础。近年来,血脂异常的发病率呈现上升趋势,寻找疗效确切、毒副作用小的防治药物已成为医药界关注的热点。当归芍药散(DSS)为《金匮要略》妇科良方,具有调养肝脾、和血化瘀、利水渗湿的功效。我的导师阎艳丽教授根据祖国医学对血脂异常病因病机的认识并遵循“谨守病机,异病同治”的原则,临床用其治疗血脂异常疗效满意,而资料所及尚未发现相关论述,故在前期的研究工作中,本课题组初步进行了DSS调血脂作用的药效学研究,本实验以此为基础,在严守经方药物用量比例的前提下,进一步探讨其组方药物之间相互作用的协同性,并为当归芍药散证本质的研究提供参考和借鉴。目的:观察当归芍药散(汤剂)全方组、和血化瘀药组(血药组)、利水渗湿药组(水药组)防治血脂异常组方作用的协同性,并初步探讨其作用机理。方法:
徐玉华, 朱雅萍, 徐玉华[7]2011年在《中医治未病思想防治高脂血症研究进展》文中指出我国60~80年代高脂血症的患病率非常低,而近20多年来随着人民生活状况的改善,高脂血症的患病率逐年升高,根据《中国居民营养与健康现状》调查的最新数据表明,我国居民成人血脂异常患病率为18.6%,约1.6亿人……[1]。中国人群
陈静, 叶平, 阎艳丽, 宋晓雨, 李清[8]2005年在《当归芍药散防治高脂血症的实验研究》文中指出[目的]观察当归芍药散对高脂血症的防治作用并初步探讨其作用机制。[方法]采用饲养法建立家兔高脂血症模型,观察当归芍药散对高脂家兔的血清脂质、肝脏脂质的影响。[结果]当归芍药散可以显着降低高脂血症模型家兔血清总胆固醇(TC)、甘油叁酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白B100(ApoB100)水平,升高高密度脂蛋白(HDL-C)和载脂蛋白AI(ApoAI)水平,降低肝组织TC、TG,抑制脂质在肝脏的沉积。[结论]当归芍药散防治高脂血症的作用机制可能与以上因素密切相关。
高华[9]2008年在《《金匮要略》瘀血证治规律探讨》文中进行了进一步梳理本文以《金匮要略》中的瘀血证及其辨证论治规律为主要研究对象。《金匮要略》首次提出“瘀血”的名称并明确了瘀血证的临床表现及治法方药。本文简述了《金匮要略》中瘀血证的概念和临床表现,讨论了瘀血的病因病机及相关病证,阐述了《金匮要略》中活血化瘀的治则治法,系统总结了《金匮要略》活血化瘀方药的应用规律、对后世活血化瘀法的影响,以及在现代临床的应用。认为《金匮要略》对于经络内瘀血以通经活络为主,对于离经之血以攻下瘀血为主。本论文通过对《金匮要略》中瘀血证的临床表现、病因病机、治则治法以及方药应用规律的系统研究,探讨张仲景瘀血证的辨证论治规律,以期为瘀血的基础研究及临床医疗提供理论支持与借鉴。
曾宇[10]2013年在《当归芍药散抗衰老活性的药效学和药代动力学研究》文中提出阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease, AD),又称老年性痴呆病[1],是一种进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病,出现的全面持久的智能减退,包括记忆力、判断力、计算力、思维能力和语言功能的减退,丧失独立工作能力和生活能力。其病理变化主要表现为脑内胆碱能神经元的原发性变性和减少、β样淀粉样蛋白沉积脑内所形成的老年斑以及神经原纤维缠结。随着人类寿命的延长,全球进入老龄化社会。目前AD已成为继癌症、心血管疾病和中风之后威胁老年人健康的又一大疾病。我国的流行病学调查资料显示,AD在65岁以上人群中的发病率为3%-5%,接近西方发达国家水平。衰老、基因突变及遗传为AD明确的致病原因,此外炎症及应激,神经递质减少,代谢异常等都为其可能的致病原因[2-3]。AD至今无有效的治疗方法,目前主要是对症治疗。多年以来,乙酰胆碱酯酶抑制剂如加兰他敏、石杉碱甲,谷氨酸受体调控剂如盐酸美金刚胺,脑循环改善剂如尼麦角林等,γ-氨基丁酸类促智药如吡拉西坦等被广泛应用于AD的治疗[4-7]。但由于AD病人需要长期服药,西药的副作用比较大,不断寻求副作用小的药物以有效地治疗AD成为现代社会人们广泛关注的重要问题。脏腑失调,气血亏虚,脑髓失养是形成AD的必要条件,肾之精气化精生髓汇聚而为脑,五脏气血之精华皆上荣于脑,脑髓之功能发挥,须依赖气血滋养。老年人脏腑功能失调,气血生化乏源,脑髓得不到充足的气血滋养,久则神明受损,功能低下。中药当归芍药散具有整体作用的特点,与临床常用的抗老年性痴呆化学药物相比,它们的副作用比较小,不易产生耐药性,有明显前景和优势[8-10]。当归芍药散(DangguiShaoyao San,以下简称DSS)是《金匮要略》所载着名方剂[1],由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻(1：5.3：2.6：1.3：1.3：2.6)六味药组成。当归具有补血活血,调经止痛,润肠通便的功效。芍药有养血敛阴,补而不腻,柔肝缓中,止痛收汗功效。当归芍药散具有养血调肝,健脾利湿,养血益脾等功效。原方主治“妇人妊娠诸疾痛”以及“妇人杂病腹中诸疾痛”。目前有研究将DSS转变为治疗老年性痴呆的有效方剂,疗效确切[12-14]。前期的研究基础：本课题在国家自然基金“当归芍药散化学成分、剂量配比与药效学关系”的研究项目资助的支持下,采用现代药理研究方法,研究当归芍药散的抗痴呆作用。采用D-半乳糖致致小鼠亚急性衰老的经典动物模型,考察了当归芍药散及单味药材提取液对动物神经系统的影响[15-17],结果发现当归芍药散能显着改善学习记忆能力。中药方剂是中医临床治疗疾病的主要手段,药物的合理配伍可以相使相须,达到一种优化组合的整体疗效。当归芍药散的抗老年痴呆作用与其组方药材有着密切的关系,又非这些药材中化学成分的简单加和。基于以上原因,研究设计将中药化学、质量控制以及药理学技术紧密结合,以确定当归芍药散抗老年痴呆作用的物质基础。目的在抗老年痴呆药理活性指导下,对当归芍药散(DSS)(当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻(1：5.3：2.6：1.3：1.3：2.6))药效物质的提取工艺、化学成分及其含量分析、指纹图谱、化学成分在动物体内代谢等进行了相关研究,旨在为当归芍药散的二次开发提供科学依据。方法采用药理学实验研究方法,对当归芍药散水提和醇提部位进行了抗老年痴呆的药理筛选研究。建立D-半乳糖联合AlCl3所致亚急性衰老小鼠的模型,考察各组小鼠体重变化,统计各组小鼠八臂迷宫的工作记忆错误次数、参考记忆错误次数、错误总数次数。采用Lg(34)正交表对抗痴呆药效最好的当归芍药散醇提部位(以下简称当归芍药散)的提取工艺进行了研究。因素选择：乙醇浓度(A)、提取次数(B)、提取时间(C)、乙醇用量(D),每个因素设置3个水平。选择多指标成分芍药苷、阿魏酸、川芎嗪、白术内酯Ⅰ、藁本内酯进行综合测评,确定各因素的最佳提取工艺水平。在此基础上,采用系统溶剂分离法,对当归芍药散(DSS)进行了部位分离,分离了石油醚部位(DSS-P)、乙酸乙酯部位(DSS-E)、正丁醇部位(DSS-N)、水部位(DSS-W),以进行化学成分和药效学研究。建立了当归芍药散(DSS)及4个部位的主要活性成分芍药苷、阿魏酸、川芎嗪、白术内酯Ⅰ、藁本内酯进行了HPLC-DAD含量分析方法。色谱条件为：色谱柱syncronisC18(4.6mm×250mm,5μm)不锈钢柱；流动相：A：乙腈,B：0.1%磷酸,梯度程序条件洗脱；流速：1.Oml/min;柱温：30C°；进样体积：10μL；用二极管检测器进行190nm-400nm全波长扫描,经比较后发现220nm、270nm、320nm处基线平稳,出峰多,峰强度较好,故确定检测波长为220nm、270nm、320nm。λ1=220nm(检测芍药苷),λ2=270nm(检测川芎嗪、白术内酯Ⅰ),λ3=320nm(检测藁本内酯、阿魏酸。对当归芍药散进行了指纹图谱的研究,标定了共有峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行相似度分析,建立当归芍药散的叁波长融合指纹图谱,使用化学对照品和药材对色谱峰进行定性、归属。药效试验采用体内结合体外研究方法,对当归芍药散(DSS)及石油醚部位(DSS-P)、乙酸乙酯部位(DSS-E)、正丁醇部位(DSS-N)、水部位(DSS-W)进行了抗痴呆筛选研究。(1)利用D-半乳糖联合AlCl3造成小鼠老年痴呆病理的复合模型,出现学习记忆力减退；海马和皮质老年斑形成,促进Aβ的沉积等类似AD病变,造模机制比较接近AD。用八臂迷宫研究动物的行为学变化,检测其生化指标(SOD、MDA、GSH-Px、脂褐素),HE染色观察脑组织病理形态学等方面对当归芍药散及四个部位进行了研究；(2)采用体外清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)法对当归芍药散(DSS)及其部位进行抗氧化研究。当有自由基清除齐(?)DPPH存在时,由于与DPPH的单电子配对而使其吸收逐渐消失,其褪色程度与配对电子数成化学计量关系,因而可用分光光度法进行定量分析；(3)选用与多巴胺能神经元有许多相似特征的PC12细胞为实验对象,以过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤,从而建立体外多巴胺能细胞的AD氧化应激模型,研究当归芍药散(DSS)及部位的保护作用,包括：H2O2作用时间和浓度的选择、当归芍药散(DSS)对细胞毒性考察和浓度的选择、当归芍药散(DSS)对细胞存活率的影响。用倒置显微镜观察培养的PC12细胞的形态,用形态学方法证明PC12细胞培养成功。采用150、200、250、300、350、400、450μg/ml浓度的当归芍药散(DSS)分别与PC12细胞共同孵育24h,以MTT法测定细胞存活率。考察当归芍药散对过氧化氢(H202)诱导PC12细胞活性的影响,不同剂量当归芍药散(100、150、200、250、300、350、400μg/ml预孵育PC12细胞2h,再和H2O2共培养6h,以MTT法测定细胞存活率；采用剂量相当于当归芍药散(DSS)(300μg/ml)的各个部位预孵育PC,2细胞2h,再和H2O2共培养6h,以MTT法测定细胞存活率。(4)当归芍药散(DGS)的化学成分与药效相关性研究,利用本章药效实验数据与第二章质量控制的HPLC实验数据,将当归芍药散、乙酸乙酯、正丁醇、水部位得到的化学成分对应的色谱图中各色谱峰Xi与本章药效实验数据(变量Y(Y1：小鼠42天体重增长鼠；Y2：八臂迷宫RME错误次数；Y3：八臂迷宫WME错误次数； Y4：八臂迷宫错误总次数；Y5：八臂迷宫时间；Y6：小鼠血浆SOD含量；Y7：小鼠血浆MDA含量；Y8：小鼠血浆GSH-Px含量；Y9：小鼠脑内脂褐素的含量；Y10：对DPPH清除的影响；Y11：对PC12的存活率))进行相关性统计分析,研究当归芍药散化学成分与药效之间的关系。基于LC/MS/MS技术分析当归芍药散在大鼠血液和组织中指标性成分,观察其代谢的化学成分谱变化。(1)建立的多成分LC/MS/MS法分析方法学认证的基础上,对单次口服当归芍药散(18g(生药)/Kg)后的大鼠血浆中多种成分的药代动力学进行了初步的研究,考察成分的药代动力学参数。色谱及质谱条件色谱柱为Eclipse XDB C18柱(3.5μm,2.0mm×150mm),流动相为甲醇：10mmol·L-1乙酸铵(90：10),流速为200μL·min-1,样品进样量为20μL,柱温：35℃,分析时间为3.0min,用外标法进行定量分析。采用辅助气化电喷雾离子源(ESI)正离子和负离子分时段监测模式(MRM)进行定量分析,0-2.8min时段负离子监测离子对为：m/z478.9→448.9(芍药苷)和m/z192.8→177.8(阿魏酸),2.8-6min时段正离子监测离子对为：m/z231.4→185.1(白术内酯-Ⅰ)。离子源的雾化气和气帘气均为氮气,流量分别为70、30mL·min-1、碰撞气(氮气)流量为12L·min-1,离子源喷雾电压：-4500V/+4500V,雾化温度：450℃。(2)单次口服当归芍药散(18g(生药)/Kg)后,建立了大鼠的组织样品中当归芍药散多成分的LC/MS/MS分析方法,灌胃当归芍药散给大鼠后,参考芍药苷和阿魏酸血药浓度—时间曲线,确定采样时间点为15min,35min和6h。SD大鼠15只,每组5只,随机分为3组。灌胃当归芍药散后分别于给药后的15min,35min和6h,将大鼠迅速颈椎脱臼处死,分离胃,肠,肺,肾,脑,心,肝,脾等组织(胃,肠组织分别用蒸馏水将内容物冲洗于净,用干燥滤纸吸干),共8种组织。分别进行LC/MS/MS定量分析。阐明当归芍药散多成分在各组织中的分布特点及组织中药物浓度随时间的变化规律。统计数据均用SPSS13.0统计分析软件处理,显着性水平取α=0.05(双侧),P<0.05为差异有统计学意义。结果1.提取工艺的研究在当归芍药散对D-半乳糖联合AlCl3所致亚急性衰老小鼠的影响实验中发现：42d检测行为学实验结果：与模型组比及当归芍药散醇提部位组(高、低剂量)和水提部位组(高、低剂量)均使小鼠在走完八臂迷宫所用时间、小鼠工作记忆错误、参考记忆错误、错误总数减少,有显着性差异(P<0.05)。各给药组间比较,当归芍药散醇提部位组高剂量(40g/Kg)(以下简称当归芍药散)表现最好。在确认改善AD小鼠学习能力效果最好的是DSS乙醇浸膏高剂量的药效活性指导下,采用(L34)正交设计实验对当归芍药散的乙醇提取工艺进行了研究,选择多指标芍药苷、阿魏酸、白术内酯、川芎嗪、藁本内酯为定量指标进行综合测评。依据方差分析结果：A、B、D因素均对实验结果差异有显着性(P<0.05),A2优于A1和A3；B2优于B1和B3；D2优于D1和D3,各因素影响程度依次为A>B>D>C,再结合直观分析结果和实际情况综合考虑,确定各因素的最佳水平组合为A2B2C3D2,采用70%乙醇,提取2次,提取3小时,乙醇用量8倍。2.当归芍药散质量控制的研究采用HPLC-DAD法分别对当归芍药散(DSS)及石油醚部位(DSS-P)、乙酸乙酯部位(DSS-E)、正丁醇部位(DSS-N)、水部位(DSS-W)的主要活性成分芍药苷、阿魏酸、川芎嗪、白术内酯Ⅰ、藁本内酯进行了含量分析研究,芍药苷lgy=0.97381gx+5.968,r=0.9996,含量在3.46-34.6μg范围内线性关系良好；阿魏酸1gy=1.01971gx+6.728,r=0.9999,含量在0.174-1.74μg1范围内线性关系良好；川芎嗪1gy=0.99731gx+6.105,r=0.9994,含量在5.1-51.0u g范围内线性关系良好；白术内酯Ⅰ1gy=0.16261gx+6.687,r=0.9990,含量在0.952-9.52μg范围内线性关系良好；藁本内酯1gy=0.98161gx+5.161,r=0.9992,含量在8.24-82.4μg范围内线性关系良好。其中当归芍药散中5种成分测定结果分别为：芍药苷5.945mg/g、阿魏酸0.042mg/g、川芎嗪3.930mg/g、白术内酯Ⅰ0.7200mg/g、藁本内酯1.470mg/g；石油醚部位中白术内酯10.1790mg/g、藁本内酯0.8770mg/g；乙酸乙酯部位中芍药苷1.261mg/g、阿魏酸0.037mg/g、川芎嗪3.045mg/g；正丁醇部位中芍药苷2.801mg/g、阿魏酸0.0040mg/g、川芎嗪0.9940mg/g；水部位中芍药苷0.2080mg/g、川芎嗪2.497mg/g。5种成分的含量特点：芍药苷：DSS>DSS-N>DSS-E>DSS-W:阿魏酸：DSS>DSS-E>DSS-N:川芎嗪：DSS>DSS-E>DSS-W>DSS-N>DSS-P:白术内酯Ⅰ：DSS>DSS-P:藁本内酯：DSS>DSS-P。建立了该当归芍药散的叁波长(220nm,270nm,320nm)融合指纹图谱,10批样品230nm指纹图谱有30个共有峰,270nm处有25个共有峰,320nm处有20个共有峰。叁波长融合指纹图谱共有32个共有峰,在峰数及含量上兼顾叁个特征波长指纹的特点。标定5个对照品芍药苷、阿魏酸、川芎嗪、白术内酯Ⅰ、藁本内酯的色谱峰,标定了共有峰32个,方法分离度好,重现性和稳定性良好。其中0-68min为220nm波长下的指纹图谱、270nm波长下的指纹图谱,68-90min为320nm波长下的指纹图谱。3.药效试验采用体内结合体外研究方法,对当归芍药散及石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位进行了抗衰老筛选研究。(1)第7d各组小鼠体质量增长数有明显统计学差异(P<0.05)。第14d与阳性组比模型组的质量增长数显着性增加(P<0.01),第21d时,与空白组比较,模型组体质量增长数减少(P<0.01)；与模型组比较,当归芍药散及各部位组体质量增长数增加(P<0.05);42d时与空白组比,模型组体质量增长数减少,有明显统计学差异(P<0.01),与模型组比较,当归芍药散组及各部位组体质量增长数增加(P<0.01或P<0.05)。行为学实验结果：模型组小鼠走完八臂迷宫所用时间、小鼠工作记忆错误次数、参考记忆错误次数、错误总次数高于空白组(P<0.01),造模成功；当归芍药散组及石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位组小鼠走完八臂迷宫所用时间、工作记忆错误、参考记忆错误、错误总数少于模型组(P<0.01),各给药组间比较,各部位组中乙酸乙酯组和正丁醇组为最好。生化指标(SOD、MDA、GSH-Px、脂褐素)检测结果表明：与空白组比模型组SOD活性明显降低(P<0.01)。与模型组比各个部位明显升高损伤的小鼠血中SOD活性,尤其以当归芍药散和乙酸乙酯部位最好。与空白组比模型组MDA活性明显升高(P<0.01)。与模型组比各个部位明显升高损伤的小鼠血中MDA,差异均具有显着性意义(P<0.01)。尤其以当归芍药散和乙酸乙酯部位最好。与空白组比模型组GSH-Px活性明显降低(P<0.01)。与模型组比各个部位明显升高损伤的小鼠血中GSH-Px活性,差异均具有非常显着性意义(P<0.01)。尤其以当归芍药散、乙酸乙酯部位、正丁醇部位最好。脑内脂褐素结果表明：与空白组比模型组脂褐素明显升高(P<0.01)；与模型组比当归芍药散及各部位明显降低小鼠脑中脂褐素的含量。HE染色的一般形态学光镜下观察：①空白组小鼠皮质区神经细胞结构正常,数量较多,胞核清晰,胞浆丰富,间质无水肿表现,胶质细胞散布于神经细胞之间；海马区锥体细胞层排列紧密,细胞核圆而大,核仁清晰。②模型组皮质区神经细胞减少和胶质细胞增多、细胞排列稀疏、杂乱、有的细胞核固缩、细胞线不清晰,核仁消失,胞浆深染；海马区锥体细胞层数减少,排列稀疏不规则,细胞体积变小,可见核固缩现象。③与模型组比当归芍药散组、乙酸乙酯组、正丁醇组比有明显改善,小鼠皮质区细胞结构排列较整齐、紧密、细胞核可见；皮质区仍有不同程度的神经细胞变性.但变性神经细胞数量明显减少,可见少部分损伤细胞,细胞形态趋于正常,海马区锥体细胞形态、排列基本正常。(2)由当归芍药散及各部位对DPPH自由基的清除率作曲线可知,当归芍药散、乙酸乙酯、正丁醇、水部位提取物的IC50值分别为0.3518,1.012、1.133、1.371mg/mL,石油醚无IC50值。清除DPPH自由基能力的大小顺序依次为：当归芍药散>乙酸之酯部位>正丁醇部位>水部位>石油醚部位。但是溶液质量浓度在2mg/mL以上时当归芍药散与乙酸乙酯部位清除率接近。(3)采用不同浓度的当归芍药散的结果发现：与正常细胞比当归芍药散在400、450μg/ml时对PC12细胞明显毒性作用(P<0.05)。不同浓度当归芍药散可拮抗H2O2的作用,细胞存活率明显升高,各剂量下细胞存活率分别为120%、128%、129%、126%、100%、59%、51%,具有明显的剂量相关性(P<0.001),与正常对照组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。采用剂量相当于当归芍药散(300μg/m1)的各部位均可拮抗H,O,的作用,细胞存活率明显升高,与模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.05),但是各部位之间无明显差异,有可能当归芍药散在全方整体角度表现出对神经细胞的保护作用。(4)当归芍药散的化学成分与药效相关性研究发现Pearson分析和灰色关联度分析表明：前面所述5个已知指标性成分芍药苷,阿魏酸,川芎嗪,藁本内酯,白术内酯Ⅰ与药效具有高度相关性。4.当归芍药散大鼠体内多成分的药代动力学研究本实验采用LC/MS/MS法测定各时间点血浆中芍药苷、阿魏酸的含量,灵敏度高、快速、简单、准确、分析时间短,在5分钟内出峰完毕,重现性好,可用于大鼠血浆中芍药苷、阿魏酸的定量,其它成分未能检出,可能是因为该测定方法灵敏度不够高,或可能是这些成分在大鼠体内转化成其他物质有待今后进一步研究。大鼠单次灌胃当归芍药散后,芍药苷的吸收和消除十分迅速,在给药后的血浆中能很快测出较高浓度的芍药苷(大鼠的Cmax出现在前0.5h),药-时曲线呈现双峰现象,约在8-10h出现第2个峰值(浓度低于第1个峰值)。表明该成分体内吸收较快,药物在体内消除较快,半衰期为5.0±1.4h。大鼠灌胃当归芍药散后,在大鼠体内芍药苷和阿魏酸各组织分布高低顺序如下(1)大鼠体内15min时各组织中芍药苷浓度顺序为：胃>肝>肺>肠>心>血>肾>>脑：(2)大鼠体内35min时各组织中芍药苷浓度顺序为：胃>血>肺>肠>肾>肝>心>>脑：(3)大鼠体内6h时各组织中芍药苷浓度顺序为：胃>血>肠>肾>肝≈肺≈心>脑。(4)大鼠体内15min时各组织中阿魏酸浓度顺序为：胃>肠>肝>肺>心>血>肾≈脑：(5)大鼠体内35min时各组织中阿魏酸浓度顺序为：胃>肠>肺>>脑>肝>肾>血>心：(6)大鼠体内6h时各组织中阿魏酸浓度顺序为：胃>肠>肺>肾>血。大鼠灌胃当归芍药散后,当归芍药散可迅速分布于全身大多数组织脏器,大鼠5min时各组织芍药苷和阿魏酸浓度达到峰值,这与血药浓度-时间曲线变化一致。6h时大鼠各组织中芍药苷和阿魏酸浓度降至不足峰值时的10%。当归芍药散在大鼠中芍药苷和阿魏酸均以胃肠道中含量最高,脑中含量最低,相对芍药苷来说阿魏酸的组织消除速率比较慢。结论研究综合采用化学指纹图谱、药效学、药代动力学等联合研究的模式证明了当归芍药散抗衰老的作用机制。化学指纹图谱：采用HPLC-DAD法分别对当归芍药散及石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位的主要指标性成分芍药苷、阿魏酸、川芎嗪、白术内酯Ⅰ、藁本内酯进行了含量分析研究。发现当归芍药散及各部位中各种成分的含量各有高低。建立了该当归芍药散的叁波长(220nm,270nm,320nm)融合指纹图谱,标定5个对照品芍药苷、阿魏酸、川芎嗪、白术内酯Ⅰ、藁本内酯的色谱峰,标定了共有峰32个,方法分离度好,重现性和稳定性良好,为药效研究提供质量保证。药效学实验：证明当归芍药散能明显改善D-半乳糖联合Alcl3所致亚急性衰老小鼠行为学的异常和空间认知障碍,提高学习记忆能力；减少自由基对脑组织的氧化损害;改善病理因素造成的实验动物脑内组织形态的异常。体外抗氧化实验证实其抗氧化能力的大小顺序依次为：当归芍药散>乙酸乙酯部位>正丁醇部位>水部位>石油醚部位。体外PC12细胞实验证明当归芍药散和各部位可拮抗H2O2的作用,细胞存活率明显升高,但是各部位之间无明显差异,有可能当归芍药散在整体角度表现出对神经细胞的保护作用。药代动力学研究表明：大鼠体内血浆芍药苷阿魏酸等是当归芍药散抗痴呆活性的主要有效组分。给大鼠灌胃当归芍药散后,当归芍药散可迅速分布于全身大多数组织脏器,大鼠5min时各组织芍药苷和阿魏酸浓度达到峰值,当归芍药散在大鼠中芍药苷和阿魏酸均以胃肠道中含量最高,脑中含量最低,相对芍药苷来说阿魏酸的组织消除速率比较慢。当归芍药散的化学成分与药效相关性研究发现Pearson分析和灰色关联度分析表明：前面所述5个已知指标性成分芍药苷,阿魏酸,川芎嗪,藁本内酯,白术内酯Ⅰ与药效具有高度相关性,结合药代动力学结果在实验角度阐明这5个指标性成分作为药效物质基础的科学性。
参考文献：
[1]. 当归芍药散防治动脉粥样硬化的实验研究[D]. 张莉芳. 河北医科大学. 2003
[2]. 当归芍药散（汤剂）调血脂、保护血管内皮细胞功能的实验研究[D]. 吉梅. 河北医科大学. 2006
[3]. 当归芍药散（汤剂）防治大鼠实验性血脂异常的基础研究[D]. 蔡景竹. 河北医科大学. 2005
[4]. 当归芍药散（煎剂）对实验性心肌缺血的影响[D]. 于永军. 河北医科大学. 2005
[5]. 当归芍药散对血管性痴呆大鼠行为学的影响及其机制探究[D]. 王依瑮. 广州中医药大学. 2017
[6]. 当归芍药散（汤剂）防治血脂异常组方作用的协同性研究[D]. 杨旭杰. 河北医科大学. 2006
[7]. 中医治未病思想防治高脂血症研究进展[J]. 徐玉华, 朱雅萍, 徐玉华. 陕西中医. 2011
[8]. 当归芍药散防治高脂血症的实验研究[J]. 陈静, 叶平, 阎艳丽, 宋晓雨, 李清. 天津中医药. 2005
[9]. 《金匮要略》瘀血证治规律探讨[D]. 高华. 山东中医药大学. 2008
[10]. 当归芍药散抗衰老活性的药效学和药代动力学研究[D]. 曾宇. 广州中医药大学. 2013
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