水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

论文摘要

为探究水貂阿留申病毒（ADV）VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a（+）中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达4 h,蛋白表达量最高,其大小约为30 000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术（CIEP）检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

论文目录

1 材料与方法

1.1 载体、菌株和血清

1.2 主要试剂及仪器

1.3 串联表位基因的设计

1.4 原核表达载体的构建及鉴定

1.5 融合蛋白表达条件的优化

1.5.1 不同诱导温度和时间对蛋白表达量的影响

1.5.2 不同IPTG浓度对蛋白表达量的影响

1.6 融合蛋白的可溶性分析

1.7 融合蛋白的纯化及鉴定

1.8 融合蛋白作为CIEP检测抗原的可能性

1.9 融合蛋白应用于间接ELISA的血清学评价

2 结果

2.1 重组质粒的酶切鉴定结果

2.2 融合蛋白诱导表达温度、时间的优化结果

2.3 诱导剂IPTG终浓度的优化结果

2.4 融合蛋白的可溶性分析及Western blot鉴定结果

2.5 融合蛋白作为CIEP检测抗原的可能性

2.6 融合蛋白应用于间接ELISA的血清学评价结果

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 秦飞燕,孙杰,马凡舒,王洋,柏玲,张蕾,闫喜军

关键词: 阿留申病毒,蛋白,表位基因,原核表达

来源: 中国兽医学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物学国家重点实验室/农业部经济动物疫病重点实验室,河南省农业科学院动物免疫学重点实验室/农业部动物免疫学重点实验室/河南省动物免疫学重点实验室

基金: 国家重点研发计划资助项目(2016YFD0501000)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.07

页码: 2135-2139+2151

总页数: 6

文件大小: 564K

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水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

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