导读:本文包含了海栖热袍菌论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:聚糖,内切,磷酸,活性,基因,糖苷酶,蛋白。
海栖热袍菌论文文献综述
高凤[1]（2019）在《海栖热袍菌乙酰羟酸合酶活性检测新方法的建立及其催化反应的研究》一文中研究指出乙酰羟酸合酶(Acetohydroxyacid synthase,AHAS,EC 4.1.3.18)是典型的硫胺素焦磷酸(Thiamine pyrophosphate,ThPP)依赖酶,它是催化生物体内异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸这叁种支链氨基酸(Branched chain amino acids,BCAAs)生物合成的第一步反应的限速酶。这叁种支链氨基酸均属必需氨基酸,细菌、真菌、植物等可自行合成,而动物及人自身无法完成它们的合成,必须通过食物获取。因此,乙酰羟酸合酶可作为抗菌素、除草剂等的有效筛选靶标。目前对于嗜极微生物AHAS的研究比较少。我们实验室保存的重组大肠杆菌中的外源AHAS基因来源于极端嗜热菌的模式生物--海栖热袍菌(Thermotoga maritima),它的最适生长温度为80℃。这种出自海洋极端环境的极端嗜热菌,从它细胞内分离出的酶具有超常的生物学稳定性,可以在极端温度、pH值、压力和离子强度下表现出生物学活性,因此极端嗜热酶为生物催化和生物转化提供了更多的可能性。本课题主要包括两方面内容的研究:第一,建立了新的AHAS活性检测方法。我们用柱前衍生-HPLC法通过使用4-硝基邻苯二胺(4-Nitro-o-phenylenediamine,NPDA)和2,4-二硝基苯肼(2,4-Dinitrophenylhydrazine,DNPH)这两种已经比较成熟的衍生化试剂来分别衍生化和检测AHAS催化反应体系中的底物(α-酮酸类化合物)和产物(包括?-乙酰基-?-羟基羧酸类化合物、邻二酮类化合物、偶姻类化合物和醛类化合物等),并通过量化反应过程中底物的消耗及产物的形成来计算酶的活性。相较于已有的比色法和气相色谱检测法,新建立的方法不但可以同时检测底物的剩余量和各种产物的生成量,使得反应体系中的化合物的组成更加明晰、准确之外,还克服了比色法无法同时准确检测双底物反应及气相色谱法操作繁琐且无法排除检测中的干扰问题等缺点。第二,通过利用上述方法并结合LC-MS测定发现,对于AHAS的两个天然底物丙酮酸和α-丁酮酸,除了常见的以丙酮酸为供体底物,丙酮酸或α-丁酮酸为受体底物进行催化反应这个众所公知的模式之外,海栖热袍菌AHAS(TmAHAS)还可以同时以α-丁酮酸为供体底物,丙酮酸或α-丁酮酸为受体底物进行酶促反应,这种反应模式导致该酶催化反应的产物构成非常复杂,除了主产物乙酰乳酸(或称α-乙酰基-α-羟基丙酸,AL)及α-乙酰基-α-羟基丁酸(AHB)外,还包括若干副产物。通过对AHAS催化反应的深入分析及查阅文献,再结合所建立的柱前衍生-HPLC法与LC-MS测定,成功确定了除了上述两种主产物以外的九种副产物,它们分别是两种醛类化合物乙醛和丙醛,叁种邻二酮类化合物2,3-丁二酮、2,3-戊二酮和3,4-己二酮,以及四种偶姻类化合物乙偶姻(或称3-羟基-2-丁酮)、3-羟基-2-戊酮、2-羟基-3-戊酮和4-羟基-3-己酮。在本研究中,我们首先建立并评价了AHAS酶活性新的检测方法;其次,利用所建立的方法并结合LC-MS测定,系统地分析了TmAHAS催化的反应中底物的消耗及产物的形成及分布,在此基础上还探讨了TmAHAS催化反应的过程以及各产物形成的路径,这些实验结果都为进一步深入研究TmAHAS的催化机理及进一步拓宽其在不对称有机合成反应中的应用打下了坚实的基础。(本文来源于《西北大学》期刊2019-06-30）
王珊珊,任艳艳,张涛,路宏朝,王令[2]（2019）在《海栖热袍菌耐热葡聚糖内切酶EG12B基因的克隆表达及酶学特性分析》一文中研究指出为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性,运用基因工程手段将成熟肽EG12B基因克隆至原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组表达质粒pET28-EG12B。转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经重组菌发酵培养及IPTG诱导表达,实现了EG12B在大肠杆菌系统中的胞内高效表达,表达量约占全细胞总蛋白的36%。通过细胞超声破碎、镍离子亲和层析以及热处理分离纯化,获得了电泳纯重组酶EG12B。酶学特性分析表明,该重组酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为5.2,在70℃下保温1 h,酶活力基本维持不变。表明葡聚糖内切酶EG12B具有优越的耐热性和良好的热稳定性,为进一步作为饲料添加剂用于纤维素饲料关键技术的开发和畜产品品质的提升奠定了理论基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年04期）
项欢[3]（2018）在《海栖热袍菌两种嗜热酶基因工程菌发酵条件优化》一文中研究指出随着生物技术的不断发展,越来越多的科研工作者致力于开发及利用极端微生物资源,许多极端环境中的微生物及其产生的酶,在工业生产上具有重大的应用价值和研究意义。海栖热袍菌(Thermotoga maritima)属于极端嗜热微生物,来源于深海火山,因其生长环境十分特殊,所以很难直接用于工业化大规模发酵培养。目前的主流方法是:利用基因工程手段克隆嗜热酶基因并转入合适的表达系统中使其高效表达,获得工业上所需的嗜热酶。本课题实验对象为从海栖热袍菌中提取出的内切-β-1,4-葡聚糖酶(TM1525)和阿拉伯内切-β-1,4-半乳聚糖酶(TM1201)。研究两种蛋白酶的高效表达条件、检测两种酶的酶活性质以及利用正交实验法和响应面法对两种酶的发酵条件进行优化。本文主要研究的内容及结果如下:1、分别利用本实验室构建的两种酶重组表达质粒转化大肠杆菌Ecoli.BL21,获得两种工程菌,命名为TM1525工程菌和TM1201工程菌。2、利用IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳分析、Western blot等方法分析表达情况,并优化了工程菌表达条件。3、利用生物信息学软件分析两种酶的理化性质,采用Ni-NTA层析柱进行纯化,得到了纯度较高的两种酶并检测了酶活。4、通过单因素实验考察了起始菌液OD_(600)值、培养时间、温度、IPTG量和培养液pH对工程菌对目的酶表达量的影响,确定主要因素,并以此为依据确定正交实验的因素和水平。5、利用Plackett-Burman实验、最陡爬坡实验、Box-Behnken实验得出响应面回归方程,进一步优化发酵条件。TM1525工程菌最优发酵方案为:起始OD_(600)为0.8、培养基pH为7.0、培养时间为15h,酶产量可达到约361.513mg/L,相比于优化前提高了约1.25倍;TM1201工程菌的最优发酵方案为:设置IPTG量为0.3mM、培养温度为18℃、接种量为3%,酶产量可达到约379.074mg/L相比于优化前提高了约1.28倍。(本文来源于《东华大学》期刊2018-05-25）
梅旭旭,陈婷,孙芳芳,张兴群[4]（2017）在《海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因克隆表达及发酵条件优化》一文中研究指出目的从嗜热微生物海栖热袍菌中克隆磷酸戊糖变位酶基因,实现其在大肠杆菌中的表达。方法以海栖热袍菌基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得编码磷酸戊糖变位酶蛋白基因(ppm),连接到具有T7强启动子的p ET-32a质粒中,构建重组工程菌E.coli BL 21(DE3){p ET-32a-Tmppm}。通过Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验方法优化工程菌发酵条件,构建回归方程。结果双酶切鉴定、测序分析和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因可在工程菌中表达。最佳发酵条件为诱导种龄0.6,诱导温度22.5℃,诱导时间13 h,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.45 mmol/L,培养基初始p H 7.6,接种量2.25%。结论发酵条件优化后磷酸戊糖变位酶表达量大幅提高。实验结果为该酶的性质研究和应用提供了支撑。(本文来源于《食品与药品》期刊2017年04期）
Jawad,Ullah[5]（2017）在《连接肽对枯草杆菌芽孢衣壳蛋白B表面展示海栖热袍菌脂肪酶Tm1350的影响》一文中研究指出工业酶是使用生物催化方法生产食品、医药、化工等产品的主要酶源。它们具有手性、立体异构和结构域特异性,并且具有在简单介质(如水)中而不是特定介质(如有机溶剂和其他溶液)中识别底物的能力。脂肪酶是α或β折叠水解酶,也是众所周知的蛋白拆分器。来自嗜热生物的脂肪酶能耐受高温,可用于工业生物过程。而且,这些酶的稳定性和表达可以通过将其展示在芽孢表面上来改善。芽孢展示技术效果显着,低成本,耗时少,因此是很有潜力的技术,可应用于环境、医疗和工业等行业中。芽孢能耐受恶劣的工业环境,包括耐热、耐碱、耐化学溶剂,易于回收和可再利用,因此芽孢展示技术工业中应用前景广泛。酵母菌和细菌(包括革兰氏阳性和阴性菌),是最常被用于展示各种蛋白质的载体,但与孢子不同,由于营养细胞对热、p H和化学物质敏感,易破裂。因此,芽孢是避免这些问题的最佳选择,并且相对于营养细胞展示技术,芽孢展示技术则具有多种应用领域。梭菌和芽孢杆菌的各种菌株都能形成芽孢,但是枯草芽孢杆菌最合适做展示载体,因为根据世卫组织认定它对人类是安全的,被认为是“GRAS”(通常被认为是安全的)。芽孢表面展示技术在工业、疫苗开发、环境等方面有着各种应用,细胞表面展示增强了蛋白质表达稳定性和活性,合适的连接肽会使展示的融合蛋白活性和稳定性增强。在本研究中,以海栖热袍菌和枯草芽孢杆菌染色体基因组作为模板进行PCR扩增脂肪酶Tm1350和Cot B基因,在Tm1350和Cot B之间融合了一系列具有不同长度、刚柔性和残基位置的连接肽基因,将所需基因插入大肠杆菌B.subtilis穿梭载体PHS,构建了重组质粒。将重组质粒PHS-Cot B-LxTm1350转化到枯草芽孢杆菌中并诱导芽孢形成。纯化芽孢,通过western印迹分析证实了Cot B-Lx-Tm1350的表达。检测了各种温度(40-80℃),不同p H(范围4.0-10)和不同有机溶剂对含各种连接肽的芽孢表面展示酶生物活性的影响。结果表明所有芽孢展示的融合蛋白的最适温度为75℃,L8和L10的最适p H为8.5,对于L0,L5,L6和L9,最适p H为9.0,而对于L1,L2,L3,L4和L7最适p H为9.5。在最佳温度和p H下,具有较长柔性连接肽L9(GGGGS-GGGGS-GGGGS-GGGGS)和L7(GGGGS-GGGGS-EAAAK-EAAAK-GGGGS-GGGGS)的融合蛋白具有比原始活性高1.29和1.16倍的活性。此外,在80℃下,孵育5小时后,具有连接肽L3(EAAAKGGGGS)和L9(GGGGS-GGGGS-GGGGS-GGGGS)的展示酶热稳定性最好,分别比原来的活性高1.40和1.35倍。测定了不同氨基酸残基位置取向和长度的连接肽的展示酶生物活性,其中L5,L6和L7含有30个不同氨基酸残基取向的连接肽的测定结果表明L7展示酶的活性分别是L6和L5的1.05和1.27倍。研究了0.1%蛋白酶K和菠萝蛋白酶,20%乙醇和30%甲醇对含连接肽的重组芽孢活性的影响。具有适当甘氨酸残基(柔性)的连接肽展示比丙氨酸残基(刚性)具有更高的活性。综上所述,为了提高工业过程中展示酶的活性和稳定性,通过在一定程度上优化连接肽的氨基酸残基位置取向和刚柔性,能达到改善效果。(本文来源于《江苏大学》期刊2017-06-05）
梅旭旭[6]（2017）在《海栖热袍菌中嗜热酶基因的克隆及发酵条件优化》一文中研究指出二十一世纪,开发和利用海洋生物资源已成为全球关注点之一,对极端海洋环境微生物的研究也上了一个新层次。因此对极端酶的研究也广泛引起了海内外专家的兴趣,尤其嗜热酶已经在许多领域有了较好的应用。海栖热袍菌(Thermotoga maritime)是一种来源于深海火山的极端嗜热菌,生长环境特殊难以大规模的发酵培养,其酶资源用于工业化生产十分困难。使用基因工程手段对极端环境微生物的酶基因加以克隆并进行高效表达,是目前利用极端环境微生物酶资源的主要方法。本课题主要研究了海栖热袍菌表达的内切-1,4-β-葡聚糖酶(TM1525)、阿拉伯内切-1,4-β-半乳聚糖酶(TM1201)、磷酸戊糖变位酶(TM1067)叁种嗜热酶。采用基因克隆技术构建表达嗜热酶的基因工程菌,通过层析柱处理加以纯化成功表达的外源蛋白酶,已有文献报道嗜热磷酸戊糖变位酶(PPM)的主要酶活性质,因此本文应用响应面法对工程菌发酵产PPM的条件进行优化。本文的主要研究内容及结果如下:1.以海栖热袍菌(Thermotoga maritima)基因组为模板,根据内切-1,4-β-葡聚糖酶、阿拉伯内切-1,4-β-半乳聚糖酶、磷酸戊糖变位酶叁种嗜热酶基因序列设计引物,质粒p ET-32a(+)为表达载体,E.coli BL21(DE3)为表达菌株,成功构建表达海栖热袍菌嗜热酶的叁种工程菌。2.研究叁种工程菌的生长曲线,以IPTG为诱导剂进行诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白免疫印迹等方法进行检测,结果显示内切-1,4-β-葡聚糖酶、阿拉伯内切-1,4-β-半乳聚糖酶未在工程菌中成功表达,磷酸戊糖变位酶成功表达。3.运用生物信息学软件,对成功表达的目的蛋白酶理化性质进行分析;采用Ni-NTA树脂层析柱对目的蛋白进行纯化,结果显示可以得到电泳纯的磷酸戊糖变位酶。4.通过Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验设计构建回归方程对磷酸戊糖变位酶发酵条件进行优化。结果显示,最佳发酵条件为诱导种龄OD600 0.6,诱导温度22.5℃,诱导时间13h,IPTG浓度0.45m M,培养基p H7.6,接种量2.25%。在此条件下磷酸戊糖变位酶表达量较初始发酵条件提高了约1.53倍。(本文来源于《东华大学》期刊2017-01-10）
陈志[7]（2016）在《海栖热袍菌腈水解酶表达鉴定及在枯草杆菌芽孢表面展示》一文中研究指出腈水解酶作为一种重要的工业酶能够直接将有毒腈化物转化为相应的无毒酸和氨,应用广泛。腈水解酶催化制备一些羧酸化合物反应条件温和,环境友好,选择性高,可代替传统的化学合成法,引起研究者密切关注。近年来,有关腈水解酶的应用开发研究主要受制于耐逆性较差、酶的种类少、底物谱窄等因素,因此筛选获得更多具有耐逆性强等优良性质的腈水解酶具有很大的意义。枯草杆菌芽孢表面展示技术作为一种新型的蛋白固定化方式已引起广泛关注,但是,有关利用芽孢展示技术进行耐逆化工酶的固定化报道还是极少,由于枯草杆菌芽孢具有高稳定性和抗逆性,使得芽孢可以成为一个优秀的固定化载体在其表面展示耐逆化工酶。本文首次克隆表达鉴定了来自极端嗜热Thermotoga maritima MSB8的腈水解酶并展示在芽孢表面,然后对连接芽孢表面衣壳蛋白与腈水解酶的连接肽进行了初步优化。首先,从Thermotoga maritima MSB8基因组扩增到腈水解酶基因,并连接到原核表达载体PET-28a上,构建表达质粒PET-28a-nit,然后转化入E.coli BL21,IPTG诱导表达后经SDS-PAGE鉴定,分子量在30k Da左右,与预测一致。对Thermotoga maritima MSB8腈水解酶的酶学性质进行了研究,发现以3-氰基吡啶作为反应底物时,该腈水解酶的最适反应温度和p H分别为45℃和7.5。热耐受性试验显示在75℃环境下处理0.5h能够保留将近50%的酶活,酸碱耐受性试验显示该腈水解酶对碱性反应条件的比较敏感。Mn2+,Zn2+和Cu2+能显着抑制酶活,Mg2+和Fe2+.能够稍微促进酶活,其它的一些金属离子和金属离子螯合剂EDTA对酶活没有显着影响。还原剂二硫苏糖醇DTT能够一定程度促进酶活,其它一些还原剂、表面活性剂、蛋白酶抑制剂和有机溶剂都对该腈水解酶活性产生了不同程度的抑制作用。该腈水解酶的动力学常数Vm和Km值分别为3.12μmol/min/mg和7.63m M,催化常数为kcat/Km为0.44/m M/s,底物谱研究表明该腈水解酶对脂肪族双腈具有明显的特异性。以枯草杆菌芽孢作为酶的固定化载体展示腈水解酶,我们构了建E.coli–B.subtilis穿梭表达质粒p HS-Cot G-nit,通过western blot分析和蛋白酶处理,结果证明融合蛋白成功展示在枯草芽孢杆菌芽孢表面,即完成了固定化。展示后的腈水解酶最适反应温度和p H分别为50℃和p H 8.0,比游离的腈水解酶要高,展示后的腈水解酶在75℃和p H 8.0处理1h后残留的活力分别为79%和97%,而相应游离腈水解酶只残留32%和52%的活力,重复利用试验结果表明使用5次循环后可以保留高达83%的活性。本研究初步探究了不同连接肽对芽孢展示腈水解酶的影响。结果显示含有连接肽L0、L3、L4、L4、L5、L6、L9展示腈水解酶最适反应温度和p H分别为45℃和7.5,L2、L7、L10、L11为50℃和8.0,L8 GGGGSEAAAKGGGGS)为55℃和8.5,在85℃处理3h L8残留活性最高为19.5%,无连接肽的L0残留活性为7.3%,前者将近是后者的3倍,热稳定最好的连接肽为L8。在p H9.0处理3h L8残留活性最高为21.5%,无连接肽的L0为11.3%,前者将近是后者的2倍,碱稳定性最好的连接肽也是L8。在1m M的二硫苏糖醇DTT,1%v/v SDS,20%v/v乙醇中稳定最好的连接肽分别为MGSSN、GGGGSEAAAKGGGGS和(GGGGS)3。本研究为耐逆的腈水解酶等化工酶在芽孢表面固定化并优化其连接肽提高固定化效果提供了一种新型的参考方法,以此满足工业上对恶劣环境下生物催化的需求。(本文来源于《江苏大学》期刊2016-06-03）
左万兵[8]（2016）在《海栖热袍菌葡聚糖内切酶的克隆表达及酶学活性研究》一文中研究指出光合作用产生的生物质是地球上最丰富的可再生资源,纤维素酶是一类能够降解纤维素的糖苷水解酶,在生物质降解与转化过程中具有关键作用。同时,纤维素酶在纺织品加工、纸浆脱墨、饲料和洗涤剂工业具有广泛的用途。目前市场上的纤维素酶生产成本高、降解效率偏低,难以在工业上进行大规模的应用。提高降解效率和降低酶的应用成本的最有效策略是开发应用嗜热微生物产生的高温酶,实现催化活性的提高和使用寿命的延续。海栖热袍菌(Thermotoga maritima)是一株极端嗜热的厌氧细菌,最适生长温度达到80℃,表现出极强的纤维素水解能力;对其基因组研究发现,它的基因组中与糖、多糖代谢有关的编码基因占7%,远远高于其他已经测序的真细菌和古菌,其基因组中存在大量的多聚糖水解酶的编码序列。本研究,运用基因工程技术研究海栖热袍菌葡聚糖内切酶(endoglucanase,EG,简称纤维素酶)的高效表达技术,鉴定它们的酶学性质及相互协同作用。主要研究内容与研究结果如下:(1)运用基因工程技术研究纤维素酶在大肠杆菌中的超量表达技术。以海栖热袍菌基因组为模板,PCR扩增8个编码不同纤维素酶的基因的成熟肽序列;将PCR产物与大肠杆菌新型热激表达载体pHsh连接,构建重组表达质粒pHsh-EGs。通过反向PCR技术克隆得到载体片段,在N端起始密码子后修改或插入密码子以提高表达水平。来自同1个菌株的8个被标注为纤维素酶的基因得到成功克隆,并在pHsh载体中得到了有效表达。(2)对重组纤维素酶进行纯化和酶学性质鉴定。超声破碎细胞后获取粗酶液;通过热处理和镍亲和层析两步法使8种重组酶达到电泳纯。对8种酶的活性进行的初步鉴定表明,Tma-EG12A、Tma-EG12B、Tma-EG5A和Tma-EG74表现出超强的纤维素水解能力;而Tma-EG5B、Tma-EGA、Tma-EGB和Tma-EGC只有微弱的CMC活性。本论文对Tma-EG12A、Tma-EG12B、Tma-EG5A和Tma-EG74进一步进行了酶学性质的鉴定,它们的最适反应温度依次为95℃、90℃、85℃和85℃,最适反应pH分别为5.6、5.6、5.2和5.2,四个纤维素内切酶有很好的热稳定性和pH稳定性,比酶活分别为55.5、213.5、31和4.5 U/mg。(3)一种新型甘露聚糖酶的发现和定性。Tma-EG5B在海栖热袍菌基因组中被标注为纤维素酶(β-1,4-葡聚糖酶),国外的研究报道认为它是地衣多糖酶(β-1,3-1,4-葡聚糖酶)。本论文研究发现它以甘露聚糖(β-1,4-甘露聚糖)为底物时,比酶活高达112 U/mg,而以CMC和地衣多糖为底物时比酶活仅为0.88和0.96 U/mg。对Tma-EG5B进行的氨基酸序列同源性分析揭示没有其他甘露聚糖酶与之具有同源性,表明Tma-EG5B是1个新型的甘露聚糖酶。以甘露聚糖为底物测定Tma-EG5B的酶学性质,其最适反应温度为80℃,最适反应pH为5.6;在pH 5-8范围内比较稳定,70℃保温2 h后酶活保留70%左右;金属离子Co2+对重组Tma-EG5B的酶活有促进作用,Cu2+会抑制其酶活。(本文来源于《江苏大学》期刊2016-04-01）
原月梦[9]（2016）在《表达海栖热袍菌内切1,4-β-甘露糖苷酶的工程菌构建及发酵条件优化》一文中研究指出近二十年来,来源于极端环境微生物及其产生的极端环境酶,已经成为很多领域的研究热点。糖苷酶是工业生产中不可缺少的重要酶类,而内切1,4-β-甘露糖苷酶在食品、制药、饲料、纤维制造等领域更是有着重要的工业应用价值。因此,开发耐热内切1,4-β-甘露糖苷酶对工业生产具有重大的研究意义。海栖热袍菌(Thermotoga maritime)是极端嗜热微生物的一种,生长条件十分苛刻,大规模的发酵培养用于工业化生产十分困难。利用基因工程技术对海栖热袍菌的耐热酶基因进行克隆并高效表达,得到需要的耐热酶是人们利用海栖热袍菌的主要方法。本课题主要研究了海栖热袍菌中的内切1,4-β-甘露糖苷酶。采用分子生物学手段构建得到表达内切1,4-β-甘露糖苷酶的基因工程菌,通过热处理的方式去除大量杂蛋白,便于纯化,操作简单。同时,对酶产量的发酵条件进行优化,有利于后续的工业生产研究,本文的主要研究内容及结果如下:1.选用海栖热袍菌(Thermotoga maritima)内切1,4-β-甘露糖苷酶(MSB8-898257)基因的克隆片段、以p ET-28a(+)质粒为表达载体,大肠杆菌BL21为表达系,得到表达海栖热袍菌内切1,4-β-甘露糖苷酶的工程菌。2.采用IPTG作为诱导剂,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯亮蓝染色、蛋白免疫印迹等方法进行检测,在77 k Da左右处出现目的条带,验证目的蛋白成功表达。3.利用生物信息学软件,进行目的蛋白理化性质分析;DNS法检测酶活性;Ni-NTA树脂进行目的蛋白纯化,得到较纯的目的蛋白,并对目的蛋白的诱导条件进行了优化。4.通过摇瓶培养试验考察BL21-898257基因工程菌的发酵条件并进行优化。主要考察温度、p H、诱导剂浓度、诱导培养时间、诱导起始OD600值。结果发现,培养温度、时间、起始OD600值对目的蛋白的表达量影响较为明显。并根据试验结果,设计正交实验方案,进行1 L发酵液的发酵条件优化。得到最佳发酵条件为:培养温度32℃,在OD600达到1时加入0.2 m M诱导剂,诱导培养时间为7 h,收获菌体。每升发酵液可获得5 mg左右的酶蛋白表达量。5.通过初步的脱胶效果分析,进行重组酶的应用探究。结果表明:重组酶脱胶效果显着,在纺织纤维制造工业里有很好的应用价值。(本文来源于《东华大学》期刊2016-01-12）
孙慧慧,候静静,林宇菲,薛业敏[10]（2015）在《定点突变提高海栖热袍菌β-葡萄糖苷酶水解槲皮素-4'-O-葡萄糖苷的催化效率》一文中研究指出槲皮素(Quercetin,3,3',4',5,7-五羟基黄酮)是一种在自然界分布非常广泛的黄酮醇类化合物,但以自由态(槲皮素苷元)形式分布在自然界中甚少,大多数以结合态(槲皮素糖苷)的形式广泛存在。因此,把槲皮素糖苷转化成苷元形式,是提高其生物利用率的前提~([1-2])。因此获得高活性水解槲皮素糖苷底物的β-葡萄糖(本文来源于《2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会论文摘要集》期刊2015-08-21）
海栖热袍菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性,运用基因工程手段将成熟肽EG12B基因克隆至原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组表达质粒pET28-EG12B。转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经重组菌发酵培养及IPTG诱导表达,实现了EG12B在大肠杆菌系统中的胞内高效表达,表达量约占全细胞总蛋白的36%。通过细胞超声破碎、镍离子亲和层析以及热处理分离纯化,获得了电泳纯重组酶EG12B。酶学特性分析表明,该重组酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为5.2,在70℃下保温1 h,酶活力基本维持不变。表明葡聚糖内切酶EG12B具有优越的耐热性和良好的热稳定性,为进一步作为饲料添加剂用于纤维素饲料关键技术的开发和畜产品品质的提升奠定了理论基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
海栖热袍菌论文参考文献
[1].高凤.海栖热袍菌乙酰羟酸合酶活性检测新方法的建立及其催化反应的研究[D].西北大学.2019
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