不同状态下细胞表面新型囊泡运动的研究

不同状态下细胞表面新型囊泡运动的研究

论文摘要

近年来发现细胞表面存在一种非释放性的新型囊泡。目前,对该种细胞表面囊泡的组成、结构、产生、运动、命运和功能均知之甚少。细胞的铺展和迁移是两种重要的细胞状态。本论文猜测在不同的细胞状态下细胞表面囊泡的产生和运动规律可能不同。因此,本论文对不同细胞状态下细胞膜表面囊泡进行单囊泡追踪分析。首先,细胞铺展状态下,分别用OxLDL,TNF-α,VEGF和LPS刺激HUVECs后,细胞间粘附分子(ICAM-1)的表达水平都增高,证明这些试剂能刺激细胞的活化;MβCD可以显著剔除HUVECs细胞质膜胆固醇,从而改变细胞质膜的流动性。随后的单囊泡追踪分析发现,OxLDL,TNF-α和VEGF导致细胞表面囊泡的平均数量显著增加,同时显著提高细胞膜的运动速率,但不会显著影响细胞表面囊泡的位移(移动范围)。其次,细胞迁移状态下,分别用Ang-1,OxLDL,TNF-α,VEGF和LPS刺激HUVECs后,细胞中Rho A(Rho GTPase)表达水平增强,且细胞的迁移率显著提高,证明这些试剂能够促进细胞迁移。随后的单囊泡追踪分析发现,OxLDL,TNF-α和Ang-1显著增加了细胞表面囊泡的平均数量,同时,OxLDL,TNF-α,LPS,Ang-1和VEGF可显著提高细胞表面囊泡的运动速率;OxLDL显著扩大了细胞表面囊泡的位移。为了进一步研究细胞骨架与细胞表面囊泡的关系,本论文用Cytochalasin D和Nocodazole分别破坏细胞内的微丝和微管(两种细胞骨架),再进行单囊泡追踪分析。实验发现,在两种细胞状态下,细胞骨架的破坏都能导致细胞表面囊泡数量的显著增加以及囊泡运动速率和运动范围的显著下降。结果表明,细胞表面囊泡的产生和运动规律与细胞骨架有紧密关系。综上所述,细胞表面囊泡的产生和运动可能受到多种细胞状态(比如细胞活化、细胞膜的流动性、铺展和迁移等)的影响,而且可能受到细胞骨架的调控。本研究对于深入了解细胞表面囊泡的产生和运动规律具有重要意义。

论文目录

  • 摘要
  • abstract
  • 第1章 引言
  •   1.1 概述
  •   1.2 细胞状态
  •   1.3 改变细胞状态的刺激因子
  •     1.3.1 铺展状态——静息状态
  •     1.3.2 铺展状态——活化状态
  •     1.3.3 铺展状态——改变细胞膜流动性
  •     1.3.4 迁移状态
  •     1.3.5 破坏细胞骨架状态
  •   1.4 细胞间黏附分子和Rho A(Rho GTPase)
  •     1.4.1 细胞间黏附分子
  •     1.4.2 Rho A(Rho GTPase)
  • 第2章 实验材料和试剂
  •   2.1 实验试剂
  •     2.1.1 刺激细胞ICAM-1和Rho A(Rho GTPase)高表达的试剂
  •     2.1.2 剔除细胞膜中胆固醇的试剂
  •     2.1.3 抑制细胞迁移的试剂
  •     2.1.4 破坏细胞骨架网络的试剂
  •     2.1.5 其他试剂
  •   2.2 主要实验仪器
  •     2.2.1 激光扫描共聚焦显微镜
  •     2.2.2 凝胶成像系统
  • 第3章 实验方法及实验步骤
  •   3.1 细胞培养
  •     3.1.1 细胞株
  •     3.1.2 培养条件
  •     3.1.3 细胞传代(冻存、复苏)
  •   3.2 琼脂糖凝胶电泳检测ICAM-1 mRNA
  •   3.3 ICAM-1、Rho A、细胞骨架、胆固醇荧光染色及成像
  •   3.4 划痕实验检测细胞迁移
  •   3.5 铺展状态和破坏细胞骨架状态细胞表面囊泡的动态成像
  •   3.6 迁移状态细胞表面囊泡的动态成像
  •   3.7 细胞单囊泡动态追踪
  •   3.8 统计分析
  • 第4章 实验结果与讨论
  •   4.1 铺展状态
  •     4.1.1 验证各种试剂活化细胞的作用
  •     4.1.2 验证MβCD剔除胆固醇的作用
  •     4.1.3 单囊泡动态分析
  •   4.2 迁移状态
  •     4.2.1 Rho A(Rho GTPase)的表达水平
  •     4.2.2 划痕愈合实验检测细胞迁移
  •     4.2.3 单囊泡动态分析
  •   4.3 破坏细胞骨架状态
  •     4.3.1 验证破坏细胞骨架试剂的药效
  •     4.3.2 单囊泡动态分析
  • 第5章 结论与展望
  •   5.1 结论
  •   5.2 展望
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录A 缩略词
  • 附录B 实验主要药品信息
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 张文雕

    导师: 陈勇

    关键词: 细胞表面新型囊泡,细胞铺展,细胞迁移,细胞骨架,单囊泡追踪

    来源: 南昌大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 南昌大学

    分类号: Q25

    DOI: 10.27232/d.cnki.gnchu.2019.000761

    总页数: 61

    文件大小: 8557K

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