水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用

水质中大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用

论文摘要

[目的]建立迅速、特异的水质中大肠杆菌群荧光定量PCR检测方法。[方法]根据Genbank中大肠杆菌保守的uida基因序列,设计特异性引物,扩增并构建重组质粒作为标准品。同时设计荧光定量PCR引物,优化荧光定量PCR定量反应体系,建立水质中大肠杆菌的绝对定量方法。[结果]成功地构建了含uida基因的重组质粒,利用标准质粒为参照,分别对不同来源的水质进行检测,成功检出每微升水质中大肠杆菌的基因拷贝数,且方法具有特异性好、重复性高的特点。[结论]初步建立水质中大肠杆菌的荧光定量PCR检测方法,可为饮用水中大肠杆菌迅速检测,包括污染源头诊断的标准方法的确立提供依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验材料
  •     1.1.2 试剂
  •     1.1.3 仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 大肠杆菌E.coli BL21菌基因组提取
  •     1.2.2 PCR扩增大肠杆菌uida保守基因片段
  •     1.2.3 标准品重组质粒构建
  •     1.2.4 荧光定量PCR条件优化
  •     1.2.5 标准曲线的建立
  •     1.2.6 灵敏度试验
  •     1.2.7 重复性试验
  • 2 结果与分析
  •   2.1 常规PCR扩增uida保守基因电泳图鉴定
  •   2.2 荧光定量PCR优化体系构建
  •   2.3 标准曲线的建立
  •     2.3.1 扩增曲线与标准曲线
  •     2.3.2 熔解曲线
  •   2.4 灵敏度试验
  •   2.5 重复性试验
  •   2.6 水质检测结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 楼秋雯,陈为为,黄志广,安紫珲,朱振洪

    关键词: 水质,大肠杆菌,荧光定量,检测方法

    来源: 科技创新与应用 2019年35期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅱ辑,工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

    专业: 环境科学与资源利用,预防医学与卫生学

    单位: 浙江中医药大学生命科学学院

    分类号: R123.1

    页码: 118-121

    总页数: 4

    文件大小: 2306K

    下载量: 393

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