导读:本文包含了人羊膜细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:羊膜,干细胞,细胞,软骨,哮喘,低氧,上皮细胞。
人羊膜细胞论文文献综述
余丽梅,刘荣霞,张小雨,罗娇,姚观平[1]（2019）在《人羊膜间充质干细胞治疗卵巢早衰的作用和机制》一文中研究指出目的观察人羊膜间充质干细胞(hAMSC)对免疫性、氧化应激性和化疗药物损伤性卵巢早衰(POF)的治疗效果和作用机制。方法 ZP3皮下注射、局部双氧水处理和大剂量顺铂处理建立POF模型。hAMSC尾静脉一次注射和雌二醇(E2)灌胃给药。阴道涂片监测动情周期,称重法计算脏器指数。ELISA检测E2、卵泡刺激激素(FSH)、抗苗勒氏激素(AMH)和透明带糖蛋白抗体(AZPAb),评价卵巢功能。HE染色观察卵巢和子宫组织病理学。流式细胞术检测分析脾细胞中T细胞亚群变化。定量PCR和免疫组化染色分别检测卵巢组织基因mRNA和蛋白表达水平,卵巢组织冰冻切片,荧光显微镜下观察PKH26标记hAMSC的定植分布。结果第3代hAMSC呈长梭形、漩涡状贴壁生长,hAMSCs的CD44,CD73,CD90,CD105和波形蛋白阳性表达率大于95%,CD11b,CD19,CD34,CD45和HLA-DR阳性表达率之和<2%。POF小鼠(模型组)出现明显动情周期紊乱,治疗6周,乙烯雌酚治疗组(E2组)小鼠一直处于动情期,而hAMSC移植治疗组(hAMSC组)动情周期逐渐恢复(P<0.05)。与模型组相比,hAMSC和E2组小鼠卵巢指数和子宫指数明显升高,而脾脏指数下降(P<0.05),hAMSC治疗组的生育率恢复达正常组水平。hAMSC组和E2组小鼠血清E2和AMH水平显着升高,FSH和AZPAb水平明显下降(P<0.05)。模型组小鼠卵巢组织中含有大量闭锁卵泡和间质纤维化改变,子宫内膜层和肌层变薄,腺体数量减少;E2组仅有少量发育较好的卵泡,子宫内膜增厚且腺体增多,hAMSC组卵巢组织中可见成熟卵母细胞等数量较多的不同发育阶段的卵泡,子宫内膜和肌层增厚,有大量腺体。与模型组比较,hAMSC组和E2组治疗后的免疫性POF小鼠脾细胞中CD3+CD4+/CD3+CD8+和Treg/Th17细胞比例明显升高(P<0.05),Treg细胞的标志基因Foxp3和TGF-β1mRNA表达上调,而Th17的标志基因RORγT和IL-17a表达下调,卵泡发育相关的基因GDF-9和FOXL2 mRNA表达明显增高(P<0.05),均与正常组相当。与模型组和E2组比较,hAMSC治疗的氧化应激与化疗药所致POF小鼠卵巢组织中FSHR,VEGF和IGF-1蛋白表达水平高于模型组和E2组,但TNF-α和IL-1β蛋白明显降低,FOXL2,Oct4,GDF-9和LIF mRNA水平增高,而SCF水平降低。结论 hAMSC移植对ZP3诱导、氧化损伤和化疗药所致POF均具有明显治疗作用,且疗效优于E2;hAMSC可能通过恢复CD4~+/CD8~+及Treg/Th17平衡,改善卵巢局部卵泡发育微环境,减轻炎症反应,而促进受损卵巢的功能恢复。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2019年10期）
范振海,王婕,于泓,陈辉,蒋姗姗[2]（2019）在《炎细胞对人羊膜间充质干细胞特征及炎症因子分泌的影响》一文中研究指出和其他来源间充质干细胞一样,人羊膜间充质干细胞(humanamnioticmesenchymal stemcell,h AMSCs)也可通过免疫调节和分泌功能,对多种炎性疾病产生治疗作用。本研究主要探讨类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞(PBMNCs)对hAMSCs生物学特征和分泌炎症因子功能的影响。将传代至第5代的hAMSCs与符合纳入、剔除标准的类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞分别进行单独培养和共培养7天,流式细胞术检测hAMSCs免疫表型,CCK-8法检测hAMSCs增殖,并诱导向成骨、成脂与成神经细胞分化,CBA法检测细胞培养上清液中7种炎症因子含量,ELLISA法检测PGE2含量。结果显示,与hAMSCs单培养组比较,共培养组hAMSCs的CD105阳性表达率明显降低(P<0.05),而CD90、CD73、CD44阳性表达和CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR阴性表达百分率无明显差异;hAMSCs增殖能力及向成骨细胞、成脂细胞和成神经细胞分化百分率均无明显差异(P>0.05);共培养组细胞培养上清液中IL-4和IL-10的含量明显增高(P<0.05),PGE2含量明显增高(P<0.05),而IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-17A分泌水平无明显差异(P>0.05)。(本文来源于《中国药理学会第十一届全国基础与临床生殖药理学术研讨会暨生殖药理新技术与新方法培训班论文汇编》期刊2019-09-20）
曾胡广,孙菊,刘文宾,吴迪炯,胡慧瑾[3]（2019）在《人羊膜上皮细胞治疗异基因造血干细胞移植后膜性肾病一例》一文中研究指出目前,异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo- HSCT)仍是许多血液系统疾病的主要治疗手段。随着移植技术和支持治疗的进步,allo- HSCT受者预后明显改善,但肾损伤仍是影响其死亡和生存质量的主要因素之一~([1])。浙江中医药大学附属第一医院血液科应用人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,(本文来源于《中华移植杂志(电子版)》期刊2019年03期）
张臣臣,尹熙惠,杨智昉,何希彪,方成虎[4]（2019）在《人羊膜上皮细胞治疗心肌梗死的研究进展》一文中研究指出心肌梗死(myocardial infarction,MI)是心力衰竭的主要原因,就目前来看无特效方法治疗MI导致的心肌细胞死亡和挽救受损的心功能。细胞替代治疗作为一种全新的治疗方式成为当下研究的热点。近10年来,包括本研究组在内的国内外较多研究都着眼于运用人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)治疗MI,并取得了一定成效。本文就hAECs在MI中改善心功能的作用及具体机制展开综述。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年15期）
桑鹏,刘毅[5]（2019）在《Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子体外促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞的定向分化》一文中研究指出背景:人羊膜间充质干细胞具有多向分化能力,相关研究表明Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子均能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞定向分化。目的:探讨Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞分化的效果。方法:经遵义医学院附属医院伦理委员会批准,术前签署知情同意书,取足月产胎盘羊膜组织,两步酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态;苏木精-伊红染色观察新鲜人羊膜结构;取第3代人羊膜间充质干细胞分4组进行培养:①单纯人羊膜间充质干细胞培养组;②人羊膜间充质干细胞经Slclerxis基因慢病毒感染组;③人羊膜间充质干细胞经碱性成纤维细胞生长因子诱导组;④人羊膜间充质干细胞经Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子联合诱导组。细胞培养3d开始采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;细胞培养14 d后,实时荧光定量PCR评价各组细胞向人韧带成纤维细胞定向分化的效果。结果与结论:①第3代人羊膜间充质干细胞呈长梭形、涡旋状贴壁生长;②新鲜人羊膜呈明显的分层结构,共分为5层:上皮层、基底层、致密层、纤维母细胞层和海绵层;③人羊膜间充质干细胞经Scleraxis基因慢病毒感染24h后表达绿色荧光,荧光表达量较强且稳定;经过碱性成纤维细胞生长因子诱导后14d的形态近似于人韧带成纤维细胞;④CCK-8实验结果显示:4组细胞均呈S型生长,其中Scleraxis基因慢病毒感染组、碱性成纤维细胞生长因子诱导组、联合诱导组较单纯培养组增殖能力强(P <0.05),但这3组间的增殖能力差异无显着性意义(P> 0.05);⑤实时荧光定量PCR显示:Scleraxis基因慢病毒感染组、碱性成纤维细胞生长因子诱导组、联合诱导组韧带相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C、TNMD的m RNA表达量均高于单纯培养组(P <0.05),联合诱导组上述韧带相关基因的mRNA表达量高于Scleraxis基因慢病毒感染组和碱性成纤维细胞生长因子诱导组(P <0.05);⑥结果表明,Scleraxis基因和碱性成纤维细胞生长因子联合促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞分化,为韧带损伤修复治疗提供了新的思路。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年29期）
陈芯培,张文文,毛艳华,阳媛,吴本媛[6]（2019）在《PPCNg介导人羊膜间充质干细胞治疗大鼠宫腔粘连的研究》一文中研究指出目的:探讨PPCNg聚合物(polyethylene glycol citrate-co-N-isopropylacrylamide gelatin,PPCNg)介导人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)治疗宫腔粘连(intrauterine adhesions,IUA)的可行性和有效性。方法:将PKH26标记的hAMSCs在不同浓度PPCNg中培养,48 h后荧光显微镜下观察细胞状态,CCK-8法分析细胞毒性,评价PPCNg的材料毒性。雌性SD级大鼠随机分为假手术组、单纯IUA模型组(模型组)、PPCNg治疗IUA组(PPCNg组)、hAMSCs治疗IUA组(hAMSCs组)及PPCNg联合h AMSCs治疗IUA组(PPCNg+hAMSCs组)。建立IUA模型2周后,假手术组不处理,其余建模的各组分别宫腔内注射PBS、PPCNg、hAMSCs的PBS悬液及hAMSCs的PPCNg悬液。宫腔注射2周后,行子宫组织石蜡切片HE染色和Masson染色检测子宫内膜腺体及纤维化情况,免疫组化检测子宫内膜中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、波形蛋白(vimentin,VIM)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及E-钙粘附蛋白(E-cadherin,E-Ca)表达情况;冰冻切片荧光显微镜下观察子宫内膜中hAMSCs分布情况。结果:(1)在不同浓度PPCNg中hAMSCs贴壁生长,状态良好;(2)PPCNg无细胞毒性,材料毒性分级为1级(合格);(3)与假手术组相比,模型组腺体数目减少(P=0.000),纤维化面积比增高(P=0.000);与模型组相比,PPCNg组、hAMSCs组及PPCNg+hAMSCs组的腺体数目不同程度增多(P=0.000),纤维化面积比不同程度减少;(4)与模型组相比,PPCNg组、hAMSCs组及PPCNg+hAMSCs组TGF-β1、VEGF、VIM及α-SMA的表达均不同程度降低,其中PPCNg+hAMSCs组明显降低(P=0.000),而CK19及E-Ca表达则不同程度升高,其中PPCNg+hAMSCs组明显升高(P=0.000);(5)PPCNg+hAMSCs组PKH26标记的hAMSCs远远多于hAMSCs组。结论:PPCNg无细胞毒性,能显着提高hAMSCs治疗IUA的有效性。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2019年08期）
杨红霞,石清红,翁敏华,张建勇,赵建军[7]（2019）在《人羊膜间充质干细胞移植对哮喘小鼠气道杯状细胞增生及黏蛋白5ac表达的影响》一文中研究指出背景:前期实验研究表明,人羊膜间充质干细胞移植可减轻哮喘小鼠气道炎症反应,但对哮喘小鼠气道黏液高分泌的影响尚不明确。目的:探讨人羊膜间充质干细胞移植对哮喘小鼠气道杯状细胞增生及黏蛋白5ac表达的影响。方法:28只BALB/C小鼠随机分为4组:假手术组(第1,13天给予生理盐水致敏,第19-23天给予生理盐水雾化激发),模型组(给予卵清白蛋白致敏和雾化激发构建哮喘小鼠模型),实验组(第18天给予哮喘模型小鼠尾静脉移植人羊膜间充质干细胞进行干预),空白组(给予生理盐水致敏和雾化激发,第18天尾静脉移植人羊膜间充质干细胞进行干预),每组7只小鼠。各组小鼠均于第24天处死,观察气道组织病理学变化、上皮杯状细胞增生情况,检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素5水平、肺组织中气道黏蛋白5ac蛋白和m RNA的表达水平。结果与结论:①模型组支气管、血管周围及肺间质可见大量炎症细胞浸润,气道上皮杯状细胞增生明显,管壁不同程度增厚,部分管腔内见大量黏液分泌,管腔狭窄甚至闭塞;实验组气道炎症细胞浸润、杯状细胞增生情况较模型组减轻;②与假手术组和空白组比较,模型组气道上皮杯状细胞占总细胞的面积比例、杯状细胞数量、肺泡灌洗液中白细胞介素5水平、气道黏蛋白5ac蛋白和m RNA的表达量明显增高(P <0.01);与模型组比较,实验组上述指标明显降低(P <0.01);③结果表明,人羊膜间充质干细胞移植可以抑制哮喘小鼠气道炎症反应和上皮杯状细胞增生,下调气道黏蛋白5ac的表达,减轻气道黏液高分泌。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年25期）
许影,高雅,杨春燕,朱东茂,张银田[8]（2019）在《干扰素γ对人羊膜间充质干细胞的增殖及炎性因子分泌的影响》一文中研究指出目的研究干扰素γ(IFN-γ)对人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)的增殖、凋亡及相关细胞因子分泌水平的影响。方法在hAMSCs培养基中加入不同浓度IFN-γ,之后采用细胞增殖-毒性检测试剂(CCK-8)检测hAMSCs增殖情况,流式细胞术(FCM)检测48 h时hAMSCs的凋亡情况,ELISA检测上清中炎性因子可溶性白细胞抗原G(sHLA-G)、前列腺素E2(PGE-2)分泌水平和紫外分光光度法检测犬尿氨酸(KYN)代谢含量。结果随着培养时间的延长,无IFN-γ组和含不同浓度IFN-γ组中hAMSCs的增殖从第1天至第4天,均快速生长,随后生长速度减慢;FCM检测细胞凋亡结果显示,100 ng/mL IFN-γ培养组和无IFN-γ组相比,hAMSCs无明显凋亡(P=0.78);不同浓度10~100 ng/mL IFN-γ组同无IFN-γ组比较,PGE-2、sHLA-G分泌水平显着增加(P <0.05),同时吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)分解色氨酸的代谢产物KYN水平显着增加(P <0.05),IDO酶活性增强。结论 IFN-γ在不影响hAMSCs增殖生长的条件下,促进PGE-2、sHLA-G分泌,增强IDO酶活性,为hAMSCs防治移植物抗宿主病提供理论依据。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年12期）
尤奇,段小军,张骏,金瑛,彭旭[9]（2019）在《人羊膜间充质干细胞膜片的构建及其成软骨诱导的实验研究》一文中研究指出目的:探讨应用一种简单的方法构建人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,HAMSCs)膜片,并研究其向成软骨细胞分化的潜能,探索利用HAMSCs膜片构建组织工程软骨的可行性。方法:取产妇胎盘通过酶消化法获得HAMSCs,通过流式细胞术鉴定其表型特征;通过免疫荧光检测细胞波形蛋白和CK-19的表达。取第3代HAMSCs通过CCK-8检测细胞增殖活性;取第3代HAMSCs加入成膜片培养基培养以构建HAMSCs膜片;取第3代HAMSCs加入成膜片培养基培养7天,再换用成软骨诱导培养基培养以构建成软骨诱导的HAMSCs膜片。通过流式细胞术检测成膜片诱导后HAMSCs表型分子的表达;扫描电镜(SEM)观察细胞形态和细胞外基质的分泌。RT-PCR定量分析成软骨分化相关基因(SOX9、ACAN、COLⅡ)的表达;HE染色观察细胞形态、分布;甲苯胺蓝和番红染色检测蛋白聚糖的分泌,Ⅱ型胶原免疫组化检测Ⅱ型胶原的表达。结果:流式细胞术结果表明HAMSCs表达间充质干细胞(MSCs)表型。免疫荧光检测结果示:波形蛋白阳性表达,CK-19阴性表达。CCK-8检测结果示:细胞生长曲线呈S型,第3天进入对数生长期,第7天达到顶峰。HAMSCs成膜片诱导后流式结果表明干细胞特性分子CD44、CD73、CD90、CD105仍高表达。SEM结果示:HAMSCs膜片呈复层结构,梭形的细胞分泌大量细胞外基质,细胞被细胞外基质所包埋并逐渐融合。RT-PCR结果显示:与HAMSCs膜片组相比,成软骨诱导的膜片组Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA的表达量显着增高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果示:成软骨诱导的HAMSCs膜片可见分布均匀的类圆形细胞并被大量细胞外基质包围;甲苯胺蓝染色结果显示:椭圆形细胞分泌大量细胞胞外基质,成铺路石样排列;番红染色结果示:成软骨诱导的膜片有大量蛋白聚糖分泌;Ⅱ型胶原免疫组化结果示:成软骨诱导的膜片高表达Ⅱ型胶原。结论:本实验应用一种简单的方法在普通培养皿上成功构建了HAMSCs膜片,体外研究证实HAMSCs膜片具有良好的成软骨分化潜能。因此,HAMSCs膜片可以作为软骨组织工程的种子细胞之一,HAMSCs膜片的应用将为软骨缺损修复提供一种新思路。(本文来源于《中国运动医学杂志》期刊2019年06期）
刘钰[10]（2019）在《1、雌激素通过激活CD38/SIRT1信号途径促进低氧诱导小鼠气道平滑肌细胞凋亡的机制研究 2、人羊膜上皮干细胞对小鼠急性肺损伤的治疗作用及其机制研究》一文中研究指出研究背景及研究目的:支气管哮喘是临床上常见的呼吸道疾病,是一种由气道炎性细胞及结构细胞等多种细胞及细胞组分参与,以气道炎症、气道重塑和气道高反应性为特征的异质性疾病。缺氧被认为是肺部疾病进展的关键因素,例如支气管哮喘、气道阻塞和肺动脉高压等都存在不同程度的缺氧。缺氧会刺激气道炎症和气道重塑,并在气道重塑期间诱导气道平滑肌细胞(ASMC)凋亡。CD38是体内NAD+降解的关键酶,在调节细胞内的NAD+水平以及NAD+依赖的SIRT1活性中发挥重要作用。另有证据表明肺部疾病的发病率和进展存在性别差异,雌激素在这些病理过程中发挥着至关重要的作用;雌激素可通过CD38影响平滑肌收缩,但其调控的具体分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨CD38缺失对于低氧状态下小鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响,以及雌激素对CD38/SIRT1信号轴的调控作用,并在整体动物模型中验证平滑肌CD38缺失对小鼠哮喘的保护作用,为哮喘等呼吸系统疾病的治疗提供重要靶点和实验依据。实验方法:1.雌激素(E2)对气道平滑肌细胞CD38/SIRT1表达调控分析:分离和体外培养原代气道平滑肌细胞(ASMCs),采用不同浓度E2及不同时间处理ASMCs,利用荧光定量PCR检测CD38和SIRT1的m RNA水平;Western blot检测CD38和SIRT1的蛋白表达水平,明确E2调控CD38表达的量效和时效变化;比较野生型(WT)及CD38敲除(CD38 KO)的ASMCs中CD38、SIRT1、乙酰化p53(Ac-p53)和总p53表达水平,以及E2对其表达的干预作用。2.CD38对低氧条件下ASMCs凋亡的影响及E2的干预作用分析:建立体外低氧模型,荧光定量PCR检测低氧条件下E2对WT和CD38 KO的ASMCs中CD38和SIRT1 m RNA水平的影响,Western blot检测E2对于低氧刺激后CD38/SIRT1/p53通路的影响;通过Hoechst33258染色、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达分析和Caspase-3活性检测,明确CD38缺失对低氧诱导ASMCs凋亡的保护作用以及E2的干预作用。3.E2调控ASMCs凋亡的分子机制分析:观察在SIRT1特异性活性激动剂白藜芦醇(RSV)存在情况下E2对ASMCs凋亡的影响;检测在雌激素受体特异性抑制剂(ICI 182,780)存在时E2对CD38 m RNA和蛋白表达的影响,明确E2是否通过雌激素受体调控CD38表达。通过上述实验,以期阐明E2通过调控CD38/SIRT1信号影响ASMCs凋亡的分子机制。4.卵清蛋白(OVA)诱导小鼠哮喘模型的构建:比较野生型和平滑肌CD38敲除小鼠的哮喘程度;检测两组小鼠肺泡灌洗液中的白细胞数;HE染色观察炎症细胞浸润和肺部损伤,在整体动物水平上验证平滑肌CD38缺失对于小鼠哮喘的保护作用。实验结果:1.量效实验显示,ASMCs的CD38 m RNA和蛋白表达随着E2浓度的增加而升高,而SIRT1的m RNA和蛋白表达则下降;时效实验显示,CD38 m RNA和蛋白表达在48 h内持续增加,SIRT1 m RNA和蛋白表达水平在24 h时间点降低,在48 h时部分恢复,二者的表达呈现显着的负相关。因此,选用10 n M E2,且预处理48 h后用于随后的细胞实验。2.E2处理可使野生型ASMCs的CD38蛋白表达增加,SIRT1蛋白表达降低,同时促进乙酰化p53(Ac-p53)的表达;CD38 KO导致ASMCs的SIRT1蛋白水平显着增加,Ac-p53蛋白水平降低,E2处理后,ASMCs的SIRT1和Ac-p53表达水平不变。3.低氧处理可使野生型ASMCs的CD38和SIRT1 m RNA表达明显下调,CD38蛋白水平增加,SIRT1表达减少,Ac-p53表达增加。E2可抑制低氧导致的CD38 m RNA表达下调,进而促进SIRT1的m RNA表达下调;低氧情况下E2可以进一步促进CD38蛋白表达、下调SIRT1蛋白水平和促进p53乙酰化。敲除CD38基因可使E2在ASMCs的上述作用消失。4.E2处理可显着增加低氧诱导的野生型ASMCs凋亡,Caspase-3活性增加,Bax/Bcl-2比值显着增高;敲除CD38基因可显着抑制低氧导致的ASMCs凋亡;SIRT1激动剂RSV则可显着抑制E2诱导的ASMCs凋亡。5.雌激素受体抑制剂(ICI 182,780)可显着降低ASMCs的CD38 m RNA和蛋白表达,在ICI 182,780存在的情况下,可抵消E2促进CD38表达的作用。6.在整体动物模型中,与对照小鼠相比较,平滑肌特异性敲除CD38小鼠对哮喘敏感性下降,气道高反应性降低,支气管肺泡灌洗液中白细胞减少;肺部组织病理学和肺部炎症显着改善。结论:E2通过雌激素受体上调CD38基因表达,导致SIRT1表达减少,p53乙酰化增加,促进低氧诱导的ASMCs凋亡,而CD38缺失可抵消E2的这一作用。平滑肌特异性敲除CD38小鼠可减轻小鼠哮喘症状和肺部损伤。上述结果表明平滑肌细胞CD38是哮喘发病过程中的关键靶点,通过对其的调控可能为哮喘等呼吸系统疾病的治疗提供新的策略。研究背景及研究目的:急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)/急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS),是由于重症肺炎、吸入性肺炎、重度脓毒血症、严重创伤、休克等非心源性疾病引起的肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤造成弥漫性肺间质水肿及肺泡水肿,导致急性低氧性呼吸功能不全或呼吸衰竭,伴随失控性全身炎症反应(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)以及机体代偿性抗炎反应(CARS,Compensatory antiinflammatory response syndrome)。ARDS由于其复杂的发病机制导致病死率高,临床上对于该病尚无有效的治疗方法。近年来,许多研究发现干细胞拥有多向分化潜能,在应用于常规治疗难以解决的疑难复杂病症中获得了甚为满意的疗效。人羊膜上皮干细胞(hAESCs)是源自孕妇所娩出胎盘上的羊膜组织,具有广泛的分化潜能,研究表明hAESCs对急性肺损伤的修复作用是通过免疫调节功能实现的,但具体的作用机制尚不清楚。本课题拟通过构建急性肺损伤模型,通过体内外实验证实hAESCs对于肺损伤的修复作用,并尝试寻找到其相关的作用机制,为hAESCs应用于该疾病的治疗提供科学参考和实验依据。实验方法:1.hAESCs的分离、鉴定及安全性评价:分离和体外培养hAESCs,获取hAESCs来源的条件培养液(CM);利用RT-PCR、免疫荧光和流式细胞技术对hAESCs进行鉴定,并对其分化潜能和免疫原性进行评价;对hAESCs体内外致瘤性进行分析;采用小动物活体成像仪观察hAESCs的组织分布。2.hAESCs对小鼠急性肺损伤的保护作用研究:分离与体外培养人羊膜上皮干细胞(hAESCs),制备细胞悬液及hAESCs来源的CM。建立经气道给予LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型,设立正常对照组、LPS组、LPS+Cell组(尾静脉注射hAESCs)和LPS+CM组(尾静脉注射CM),于造模后3天和7天分别检测各组小鼠肺泡灌洗液中的炎症细胞数;ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-1β和IL-10水平;HE染色观察组织病理学改变和炎症细胞浸润;天狼星红染色检测肺部纤维化程度,评价hAESCs或CM对小鼠急性肺损伤的保护作用。3.hAESCs或CM体外抗炎作用分析:体外培养人肺上皮细胞(BEAS-2B),建立hAESCs或CM与BEAS-2B共培养体系,LPS诱导体外炎症反应模型,荧光定量PCR检测LPS刺激后BEAS-2B中IL-6、TNF-α、IL-1β及IL-10m RNA水平的改变,体外验证hAESCs或CM的抗炎作用。实验结果:1.hAESCs具有多分化潜能及较低的免疫原性,hAESCs在体内外均无致瘤性,主要在肺内聚集。2.与模型组比较,尾静脉注射hAESCs及CM可显着降低肺泡灌洗液中白细胞数量,减少促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β释放,同时增加抗炎因子IL-10水平;hAESCs或CM注射可显着改善LPS诱导的肺部炎症和肺部损伤,肺损伤评分显着下降,同时可有效减轻小鼠肺部纤维化。3.在体外炎症反应模型中,hAESCs或CM可显着抑制BEAS-2B中促炎基因IL-6、TNF-α及IL-1β的表达。实验结论:人羊膜上皮干细胞(hAESCs)对LPS诱导的小鼠急性肺损伤具有保护作用,这一保护作用可能与hAESCs调节肺部炎症反应相关。hAESCs具有多分化潜能和低免疫原性,安全性高,易于靶向于肺部,显示出在急性肺损伤治疗中应用的良好潜力。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
人羊膜细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
和其他来源间充质干细胞一样,人羊膜间充质干细胞(humanamnioticmesenchymal stemcell,h AMSCs)也可通过免疫调节和分泌功能,对多种炎性疾病产生治疗作用。本研究主要探讨类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞(PBMNCs)对hAMSCs生物学特征和分泌炎症因子功能的影响。将传代至第5代的hAMSCs与符合纳入、剔除标准的类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞分别进行单独培养和共培养7天,流式细胞术检测hAMSCs免疫表型,CCK-8法检测hAMSCs增殖,并诱导向成骨、成脂与成神经细胞分化,CBA法检测细胞培养上清液中7种炎症因子含量,ELLISA法检测PGE2含量。结果显示,与hAMSCs单培养组比较,共培养组hAMSCs的CD105阳性表达率明显降低(P<0.05),而CD90、CD73、CD44阳性表达和CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR阴性表达百分率无明显差异;hAMSCs增殖能力及向成骨细胞、成脂细胞和成神经细胞分化百分率均无明显差异(P>0.05);共培养组细胞培养上清液中IL-4和IL-10的含量明显增高(P<0.05),PGE2含量明显增高(P<0.05),而IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-17A分泌水平无明显差异(P>0.05)。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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