导读:本文包含了脱乙酰几丁质论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:几丁质脱乙酰酶,海洋细菌,响应面法,发酵条件优化
脱乙酰几丁质论文文献综述
柴金龙,王敏卜,杭加豪,张春光,陈丽[1]（2019）在《产几丁质脱乙酰酶海洋细菌的筛选鉴定及产酶条件优化》一文中研究指出从海洋样品中筛选产几丁质脱乙酰酶的细菌,对高产菌株进行鉴定,并利用响应面法优化其发酵条件。结果表明,利用添加硝基乙酰苯胺的平板,根据黄色变色圈从海州湾海域海泥样品中筛选获得一株产几丁质脱乙酰酶的细菌MCDA3-3。通过形态学、生理生化特征以及16S r DNA序列分析,将该菌株鉴定为海洋硝酸盐还原菌(Nitratireductor aquimarinus)。利用单因素和响应面法优化菌株MCDA3-3发酵产酶培养基和培养条件,获得最佳发酵培养基配方为木薯淀粉1.1%,玉米浆1.0%,Fe Cl3·6H2O 0.045%,陈海水配制,p H 5.7;最佳发酵条件为接种量4%,30℃、180 r/min发酵48 h。在此条件下酶活为4.07 U/m L,是优化前的2.3倍。(本文来源于《中国酿造》期刊2019年10期）
张岩,关菲菲,伍宁丰,田健[2]（2019）在《几丁质脱乙酰酶的研究进展》一文中研究指出几丁质是自然界中含量仅次于纤维素的第二大多糖,壳聚糖作为几丁质脱除乙酰基的衍生物,由于其较好的溶解性得到了广泛的应用。本综述通过搜集比对不同来源的多种脱乙酰酶蛋白序列,运用生物信息学方法对其催化活性中心结构域进行深入挖掘分析,阐明了多种脱乙酰酶的生物来源、催化机制和反应条件等方面的异同点。结果表明,目前研究的脱乙酰酶多来源于真菌和昆虫,大多属于CE4家族,具有NodB等催化活性中心,比较容易与聚合度>3的乙酰化低聚糖反应,不易催化难溶性多糖,且该类酶多在pH 8.0左右、40-70℃的环境下酶活达到最大,不同二价金属离子对不同酶的影响不同。最后,提出了从海洋宏基因组文库中快速特异地筛选新酶、分析酶解机理并进行分子改造等研究的新方向,旨为今后该领域科研人员研发高效、高特异性的脱乙酰酶提供了新思路。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年11期）
朱先玉,丛海花,尹恒[3]（2019）在《几丁质脱乙酰酶的特点及应用》一文中研究指出几丁质是渔业生产过程中废弃虾蟹壳的主要组成成分。传统生产几丁质、壳聚糖和壳寡糖的方法是化学消化法,此方法的主要问题是环境污染严重,随着人们环保意识的提高,该方法已难以持续。此外由于化学法生产的壳聚糖和壳寡糖难以控制其聚合度、脱乙酰度和脱乙酰模式,因此很难研究壳寡糖的结构与功能之间的关系。几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase EC 3.5.1.41)是一种可在温和条件下将几丁寡糖转化为壳寡糖的酶,利用此酶规模化生产具有特定乙酰化模式的壳寡糖已成为一个很重要的研究方向。鉴于该酶对于产业发展的重要性,本文对目前已经研究的几丁质脱乙酰酶的来源、结构特征、催化机制、脱乙酰化模式及几丁质脱乙酰化酶的应用等方面进行了综述。(本文来源于《渔业研究》期刊2019年02期）
张伟,毕扬,赵丹,宗召莉,郭巍[4]（2019）在《甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA7的表达与结合活性分析》一文中研究指出几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢酶系中的重要组分,是害虫防治的重要靶标。通过RT-PCR技术克隆得到编码甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶secda7基因(Gen Bank登录号为MG604929),该基因长1 431 bp,包含开放阅读框长1 134 bp,SeCDA7蛋白的预测分子量分别为43.156 k D。结构域分析显示,SeCDA7具有一个多聚糖乙酰基转移酶催化区,属于第Ⅴ类CDA蛋白。分别构建了原核和真核重组表达载体,利用大肠杆菌和Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统转染Sf9昆虫细胞,成功表达了SeCDA7蛋白,纯化SeCDA7蛋白并分析几丁质结合活性,结果表明SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性;荧光定量PCR结果显示secda7基因主要在中肠组织表达。本研究实现了甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因secda7的外源表达,并鉴定出SeCDA7蛋白具有几丁质结合活性,为深入探究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶的生理功能提供了理论依据。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年08期）
闫晓平[5]（2018）在《美国白蛾几丁质脱乙酰酶HcCDAs的生化特性分析及功能研究》一文中研究指出美国白蛾Hyphantria cunea(Drury),属鳞翅目(Lepidoptera)、灯蛾科(Arctiidae)、白蛾属(Hyphantria),是一种重要的入侵害虫,对我国森林资源和农林业生产造成重大危害。几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase,CDA)属糖酯酶4家族,是一种几丁质胞外修饰酶,参与昆虫体内几丁质代谢。本研究以美国白蛾为研究对象,分析几丁质脱乙酰酶的生化特性和生物学功能,为开发新型生防靶标提供理论依据。具体研究结果如下:1.利用RACE-PCR技术,结合美国白蛾中肠转录组数据库,分离克隆了hccda1(KF975504)、hccda2a(KT781841)、hccda2b(KT781842)和hccda4(KX822766)基因。开放阅读框分别为1632 bp、1629 bp、1611 bp和1494 bp,编码543、542、536和497个氨基酸,预测蛋白分子量为62 kDa、61 kDa、61 kDa和56 kDa,等电点为4.75、5.20、5.27和5.11,N-端包含信号肽序列,含有多个N-糖基化位点以及5个保守基序。HcCDA1、HcCDA2a和HcCDA2b包含几丁质结合功能域(ChBD)、低密度脂蛋白受体区(LDLa)和催化区(CDA),属于Group I类CDA蛋白;HcCDA4仅含有几丁质结合功能域(ChBD)和催化区(CDA),属于Group III类CDA蛋白。2.克隆得到了hcactin基因(KT781843),为hccdas基因的表达分析提供内参基因。qRT-PCR结果显示,hccda1、hccda2a和hccda4基因在5龄第一天和第二天表达量相对较高,在头部、表皮和后肠表达量相对较高;hccda2b基因在5龄第一天表达量相对较高,并且在头部和后肠高表达。Western blot分析显示,HcCDAs蛋白的表达水平和hccdas基因的转录趋势相一致。3.HcCDAs蛋白的生化特性。在昆虫细胞(HighFive/Sf9)中成功表达了80 kDa、75 kDa和70 kDa的重组蛋白HcCDA1、HcCDA2和HcCDA4。几丁质结合实验显示,体外重组蛋白HcCDAs(HcCDA1、HcCDA2和HcCDA4蛋白)具有几丁质结合活性;催化活性实验结果表明,HcCDAs蛋白在体外具有脱乙酰功能,酶反应的最适温度为50℃,最适pH为8.0;在最适反应条件下测得Mg~(2+)和Ca~(2+)对HcCDA1、HcCDA2和HcCDA4蛋白酶促反应整体呈抑制趋势;Fe~(2+)对HcCDA1、HcCDA2和HcCDA4蛋白酶促反应整体呈现激活趋势;随着Zn~(2+)浓度升高,Zn~(2+)对HcCDA1蛋白酶促反应抑制作用增强,而对HcCDA4蛋白酶促反应激活作用逐渐降低;Mn~(2+)对HcCDA2蛋白酶促反应有抑制作用,而对HcCDA4蛋白酶促反应有激活作用,随着Mn~(2+)浓度升高,激活作用逐渐降低;随着Co~(2+)浓度增大,Co~(2+)对HcCDA1和HcCDA2蛋白激活作用逐渐下降,而对HcCDA4蛋白抑制作用越强。4.病原微生物对hccdas基因的表达水平有影响。以Cry1Ab35蛋白饲喂美国白蛾3龄幼虫后,hccda1、hccda2a、hccda2b和hccda4基因总体表现为9~48 h表达水平显着降低;其中,hccda2a和hccda2b基因于24 h表达量升高,hccda1和hccda4基因于36 h表达量升高。HcNPV侵染美国白蛾3龄幼虫后,hccda1、hccda2a、hccda2b和hccda4基因整体表现为1~7 d表达水平先升高后降低。5.RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术探究HcCDAs的生理功能。qRT-PCR分析目的基因的沉默效率显示,注射dsRNA-hccdas于美国白蛾5龄幼虫,能有效沉默hccdas基因表达。注射dshccda1、dshccda2、dshccda2a和dshccda4的幼虫呈现蜕皮异常,幼虫死亡率分别为93%、80%、85%和87%;而注射dshccda2b的幼虫蜕皮正常,仅表现为30%的幼虫死亡率;存活下来的幼虫化蛹异常,甚至死亡;注射dsgfp的幼虫可正常化蛹。采用Western blot和免疫组织化学构成方法分析RNAi后HcCDAs蛋白的相对表达水平,结果显示,注射dsRNA-hccdas后HcCDAs蛋白信号明显减弱。几丁质含量分析显示,hccda1、hccda2、hccda2a和hccda4基因干扰后,美国白蛾幼虫几丁质含量均显着降低,hccda2b基因沉默未影响幼虫体内几丁质含量。(本文来源于《河北农业大学》期刊2018-12-06）
赵丹,闫晓平,陆秀君,郭巍[6]（2018）在《暗黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶HpCDA5基因的细胞表达及活性分析》一文中研究指出cdsRDNA文库免疫筛选到编码暗黑鳃金龟幼虫几丁质脱乙酰酶HpdsRCDA5基因,序列分析表明HpdsRCDA5含有1个几丁质脱乙酰酶结构域,属于GroupdsRV类CDA蛋白。构建重组杆状病毒表达载体pdsRFastdsRBac-HpdsRCDA5,转染昆虫细胞sf9,WesterndsRblot分析表明HpdsRCDA5在昆虫细胞sf9中成功表达42dsRkdsRDa的蛋白。利用qdsRRT-PCR方法分析HpdsRCDA5基因组织表达,结果显示HpdsRCDA5基因在中肠中表达最高,为中肠特异表达蛋白。几丁质结合活性表明HpdsRCDA5蛋白只能被强洗脱剂洗脱,具有很强的几丁质结合活性。本研究通过对暗黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶HpdsRCDA5的生化特性研究,为进一步明确HpdsRCDA5的生理功能提供理论依据,并为以HpdsRCDA5蛋白为靶标的暗黑鳃金龟生物防治提供支撑。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2018年05期）
任立世,程功,焦思明,冯翠,张毓宸[7]（2019）在《热紫链霉菌几丁质酶表达及低脱乙酰度壳寡糖制备》一文中研究指出壳寡糖具有抗炎、抗肿瘤及激活植物免疫等一系列生物活性.与传统的高脱乙酰度壳寡糖相比,低脱乙酰度壳寡糖可能具有更高生物活性.表达热紫链霉菌几丁质酶基因并使用表达产物水解制备低脱乙酰度壳寡糖;优化并全基因合成热紫链霉菌几丁质酶基因,利用毕赤酵母进行分泌表达,对产物酶的性质进行鉴定;利用表达的几丁质酶水解制备低脱乙酰度壳寡糖,使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(Ultra-performance liquid chromatography quadrupoletime-of-f lightmassspectrometry,UPLC-QTOFMS)对其组分进行分离及鉴定,使用核磁共振(Nuclear magnetic resonance,NMR)确定其末端结构特征.结果显示,表达的几丁质酶蛋白浓度为0.20 mg/mL,最适pH为5.6,最适温度为60℃,酶活为0.98 U/mL,该酶在80℃及以下时较稳定,该酶水解制备的低脱乙酰度壳寡糖中包含至少35种聚合度2-17、不同脱乙酰度的壳寡糖组分,这些组分的还原末端主要由N-乙酰氨基葡萄糖组成,非还原末端同时包含氨基葡萄糖及N-乙酰氨基葡萄糖.本研究表明毕赤酵母分泌表达的热紫链霉菌几丁质酶具有较好的热稳定性,具有应用于低脱乙酰度壳寡糖规模制备的潜力.(图4表1参22)(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2019年02期）
魏丽蓉,秦汪艳,李永成[8]（2018）在《几丁质脱乙酰酶高产菌株的选育及其发酵特性研究》一文中研究指出以一株海洋丝状真菌(Penicillium janthinellum)UV-0S为出发菌株,通过多级紫外线诱变育种后获得几丁质脱乙酰酶(CDA)高产突变株UV-3S,并对该菌株产CDA的发酵特性及其细胞壁几丁质的脱乙酰度(DD)进行研究。结果表明,突变株UV-3S的胞外CDA酶活力为11.05 U/m L,是出发菌株UV-0S的2.1倍。该菌株产胞外CDA的最适初始p H值为9.0,最适无机盐为NaH_2PO_4(11 mmol/L),胶体几丁质最适添加量为0.5%。在此最佳发酵条件下,突变株UV-3S的CDA酶活力最高,为11.83 U/m L,说明CDA是一种诱导酶。细胞壁几丁质的脱乙酰度随真菌生长而增加,且在发酵96 h后脱乙酰度达到最高(90.52%)。(本文来源于《中国酿造》期刊2018年07期）
陈祎,张伟,赵丹,郭巍[9]（2019）在《甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的外源表达及酶活力测定》一文中研究指出【目的】为了研究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的酶学性质,探索其对甜菜夜蛾幼虫发育过程的影响,为甜菜夜蛾的生物防治提供新靶标。【方法】以pMD19-T-Secda2a重组质粒为模板,PCR扩增得到Secda2a基因。构建原核表达载体pET-28a-Secda2a,IPTG诱导蛋白表达。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建重组转座载体pFastBac HT A-Secda2a,脂质体转染昆虫细胞Sf9,Western blot对SeCDA2a重组蛋白进行分析,以对硝基苯胺为底物利用分光光度计测定其酶活力。【结果】Secda2a在大肠杆菌和Sf9中均成功表达61kDa的重组蛋白,与预测分子量大小相符。IPTG终浓度为0.50mmol/L、37℃诱导培养4h时蛋白表达量最高。昆虫细胞Sf9表达的重组蛋白SeCDA2a的酶活力是1.57U/mL。【结论】本研究实现甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因Secda2a的外源表达,测定重组蛋白SeCDA2a的酶活力。(本文来源于《北京农学院学报》期刊2019年01期）
秦汪艳[10]（2018）在《几丁质脱乙酰酶产生菌的诱变育种及产酶条件研究》一文中研究指出壳聚糖,几丁质的脱乙酰基产物,具有比几丁质更好的溶解性、可降解性和生物相容性。壳聚糖有抑菌、保湿、调节血脂等优良性能,因而在食品、医药等领域有很大的开发和应用潜力。几丁质脱乙酰酶(CDA),是酶法制备壳聚糖的关键酶。该方法制备壳聚糖反应条件温和、能耗值低、环境友好,是行业未来的发展趋势。本研究以海口红树林土壤中筛选出的一株产CDA丝状真菌PenicilliumjanthinellumUV-OS为出发菌株,采用多级紫外诱变方法进行诱变育种,针对筛选获得的高产诱变菌株的培养基配方和发酵条件进行了优化,最后对胞外CDA粗酶的酶学性质进行了研究,主要内容和结果如下:1.紫外线诱变育种以Penicillium janthinellum UV-OS为出发菌株,对其孢子液进行紫外线诱变处理,经多级紫外诱变后获得一株高产CDA诱变菌株UV-3S。UV-3S的胞外CDA酶活值为11.05 U/mL,是原始株UV-OS的2.13倍。2.诱变菌株UV-3S与野生菌株UV-OS的发酵产酶特性诱变菌株UV-3S与野生菌株UV-0S培养24 h后,每12 h分别测定它们的胞外CDA酶活、胞内CDA酶活、残糖量、生物量。观察生物量与胞外CDA合成过程曲线,发现两株菌的菌丝体生长与胞外CDA的分泌呈现耦合关系;胞外CDA酶活均显着高于胞内CDA酶活,且于发酵72 h时达到最高;不同的是UV-3S在发酵后期,胞外CDA酶活值下降速率更快。3.细胞壁几丁质的脱乙酰度(DD)变化通过傅里叶红外光谱仪测定发酵42 h、72 h、96 h的Penicilium janthinellum细胞壁几丁质,发现UV-3S的细胞壁几丁质的DD值分别为74.04%、76.33%、79.62%。UV-0S的细胞壁几丁质的DD值分别为80.05%、84.01%、90.52%。4.诱变菌株UV-3S发酵培养基配方及发酵条件优化通过单因素试验和正交试验得出该诱变菌株的最佳培养基配方为麦芽糖1.3%,牛肉浸膏2.2%,NaH2PO4 0.2%,CaC120.07%,胶体几丁质0.5%;最佳发酵条件为NaCl 1.5%,初始pH9.0,发酵温度30℃,装液量20%(v/v),接种量2%(v/v),摇床转速180r/min。经发酵优化后该诱变菌株的最高胞外CDA酶活值为19.62U/mL,相比优化前的酶活提高了 78%。5.胞外CDA粗酶的酶学性质研究预先将粗酶液分别置于40℃、50℃、60 ℃、70℃、80℃恒温水浴保持1 h,取出后于50 ℃测定残留酶活,考察酶的热稳定性。预先将粗酶液置于pH4、5、6、7、8、9缓冲液中处理1 h,考察酶的酸碱稳定性。试验表明该胞外CDA的最适pH为7,且在pH 6-8范围内,胞外CDA相对酶活达到80%。该胞外CDA的最适温度为50 ℃,在40-60℃范围内,相对酶活达到80%。Na+、Ca2+对胞外CDA酶活具有激活作用,Cu2+、Fe3+对胞外CDA酶活有抑制作用。(本文来源于《海南大学》期刊2018-05-01）
脱乙酰几丁质论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
几丁质是自然界中含量仅次于纤维素的第二大多糖,壳聚糖作为几丁质脱除乙酰基的衍生物,由于其较好的溶解性得到了广泛的应用。本综述通过搜集比对不同来源的多种脱乙酰酶蛋白序列,运用生物信息学方法对其催化活性中心结构域进行深入挖掘分析,阐明了多种脱乙酰酶的生物来源、催化机制和反应条件等方面的异同点。结果表明,目前研究的脱乙酰酶多来源于真菌和昆虫,大多属于CE4家族,具有NodB等催化活性中心,比较容易与聚合度>3的乙酰化低聚糖反应,不易催化难溶性多糖,且该类酶多在pH 8.0左右、40-70℃的环境下酶活达到最大,不同二价金属离子对不同酶的影响不同。最后,提出了从海洋宏基因组文库中快速特异地筛选新酶、分析酶解机理并进行分子改造等研究的新方向,旨为今后该领域科研人员研发高效、高特异性的脱乙酰酶提供了新思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脱乙酰几丁质论文参考文献
[1].柴金龙,王敏卜,杭加豪,张春光,陈丽.产几丁质脱乙酰酶海洋细菌的筛选鉴定及产酶条件优化[J].中国酿造.2019
[2].张岩,关菲菲,伍宁丰,田健.几丁质脱乙酰酶的研究进展[J].生物技术通报.2019
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[10].秦汪艳.几丁质脱乙酰酶产生菌的诱变育种及产酶条件研究[D].海南大学.2018