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败育型植物表达载体的构建及功能验证

2020-12-08阅读(248)

败育型植物表达载体的构建及功能验证

论文摘要

败育问题是植物界研究热点之一,在作物常规育种及生产制种方面有着广泛应用,运用败育型植物表达载体遗传转化是引发植物不育的一种快捷策略。本文分别克隆了拟南芥花分生组织及花器官特异基因AP1的启动子和大肠杆菌RNaseH基因的编码区,构建了败育型植物表达载体pHZM13-AP1-RNaseH,并通过电击法将其导入农杆菌EHA105。以烟草C151为受体材料,经农杆菌介导遗传转化,共获得转化株35株。花粉管萌发试验表明,转化株花粉同对照间萌发活力并无差别;称取种子百粒重,转化株平均为6.6mg,对照株平均为9.1mg,表明二者差别显著。进一步电镜扫描种子表面,发现转化株种皮表面褶皱状纹饰减少,成因不明。种子萌发试验表明,转化株种子发率较低,且表现萌发延迟。本研究表明,该败育型植物表达载体极度削弱了宿主植物的育性,但自杀基因并未影响花器发生,这可能同所用启动子在异源表达背景下作用活性改变有关。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第1章 绪论
  •   1.1 花发育分子遗传学
  •     1.1.1 生物钟相关基因
  •     1.1.2 成花计时基因
  •     1.1.3 花分生组织特异基因
  •     1.1.4 花器官特异表达基因
  •   1.2 植物育性基因工程
  •     1.2.1 植物雄性不育
  •     1.2.2 植物雌性不育
  •   1.3 本研究的目的意义
  • 第2章 试验材料与方法
  •   2.1 试验材料
  •     2.1.1 植物材料
  •     2.1.2 载体、菌株
  •     2.1.3 RNaseH基因与AP1启动子
  •     2.1.4 培养基
  •     2.1.5 引物
  •   2.2 试验方法
  •     2.2.1 pHZM13-AP1-RNaseH载体的构建
  •     2.2.2 植物表达载体构建
  •     2.2.3 农杆菌介导烟草的遗传转化
  •     2.2.4 烟草转化植株的花粉活力检测
  •     2.2.5 烟草转化植株的种子活力检测
  •     2.2.6 烟草转化植株的种子的电镜扫描
  • 第3章 试验结果与分析
  •   3.1 Vector2载体的构建
  •     3.1.1 RNaseH基因的获得
  •     3.1.2 AP1启动子的获得
  •     3.1.3 pHZM13-AP1载体的获得
  •     3.1.4 pHZM13-AP1-RNaseH载体的获得
  •   3.2 烟草的遗传转化
  •     3.2.1 工程菌制备与鉴定
  •     3.2.2 烟草无菌体系建立
  •     3.2.3 抗性烟草再生株的获得
  •   3.3 烟草抗性株的分子检测
  •     3.3.1 烟草抗性株DNA提取
  •     3.3.2 转化株的PCR检测
  •   3.4 烟草转化植株的花粉活力检测
  •   3.5 烟草转化植株的种子活力检测
  •   3.6 烟草转化植株的种子的电镜扫描
  • 第4章 讨论
  • 第5章 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 在校期间发表的论文
  • 附录

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 李思璇

    导师: 任如意

    关键词: 败育,表达载体,功能验证

    来源: 牡丹江师范学院

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学,生物学

    单位: 牡丹江师范学院

    分类号: Q943.2

    DOI: 10.27757/d.cnki.gmdjs.2019.000013

    总页数: 46

    文件大小: 2602K

    下载量: 51

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