导读:本文包含了钙稳态论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:稳态,镰刀,延髓,蛋白,骨骼肌,细胞,黄曲霉。
钙稳态论文文献综述
张琳,乔虹[1]（2019）在《血管内皮细胞钙稳态的调节机制》一文中研究指出血管内皮细胞是血管的屏障,内皮损伤会导致多种疾病发生,其机制与细胞内钙信号失衡有关。Ca~(2+)是细胞内外信息传递的第二信使,其启动内皮细胞中的信号,对控制血管张力和内皮通透性有重要作用。近年来血管内皮细胞损伤机制的研究成为热点,钙稳态失衡是关键因素,具体机制仍不清楚。本文通过对血管内皮细胞质膜钙运转和胞内钙库调节失衡研究的综述,以期为与Ca~(2+)调控相关疾病的防治提供新的思路。(本文来源于《心血管康复医学杂志》期刊2019年05期）
余久如,卢锦莲,廖建红,蔡维望[2]（2019）在《高效液相色谱法检测慢性肾功能不全患者羟苯磺酸钙稳态血药浓度与eGFR及肌酐干扰值相关性分析》一文中研究指出目的采用高效液相色谱法(HPLC)检测患者羟苯磺酸钙常规剂量用药后的稳态血药浓度,分析该浓度与患者肾小球滤过率(eGFR)及药物所致肌酐干扰的相关性,为肾功能不全患者调整羟苯磺酸钙用药剂量提供依据。方法①选择并优化检测血清羟苯磺酸钙浓度的HPLC方法,并进行方法学评价;②选择2016年5～10月间黄石市第二医院收治20例肾功能不全和10例非肾功能不全羟苯磺酸钙(剂量为1.5 g/d,Tid)用药患者,采集羟苯磺酸钙服药5天后清晨空腹静脉血,HPLC法检测血清羟苯磺酸钙浓度;③比较肾功能不全组、非肾功能不全组稳态血清羟苯磺酸钙浓度差异,分析肾功能不全组稳态血清羟苯磺酸钙浓度与eGFR及肌氨酸氧化酶法肌酐干扰值相关性。结果①HPLC方法学评价结果:方法专属性色谱图表明羟苯磺酸钙、对氨基苯甲酸内标保留时间分别为:6.9和8.0 min,血清内源性物质不干扰羟苯磺酸钙测定;羟苯磺酸钙及对氨基苯甲酸内标平均萃取回收率分别为:75.5%和94.5%,线性范围:1.90～189.60 mg/L(r~2=0.999 1,P<0.01),检测低限:0.452 mg/L,平均加标回收率98.9%(95.6%～103.6%),18.96,94.80和189.60 mg/L叁种浓度测试样品日内CV分别为4.8%,4.5%和4.1%,日间CV分别为6.3%,6.1%和5.4%。②稳态血清羟苯磺酸钙检测结果:肾功能不全组高于非肾功能不全组(146.10±91.86 vs 16.81±2.48 mg/L),差异有统计学意义(Z=-4.400,P<0.05)。③肾功能不全组稳态血清羟苯磺酸钙浓度与eGFR呈负相关(r=-0.790,P=0.000),回归方程为Y=6 080.61X~(-1.692)(r~2=0.975 3,F=710.882,P=0.001);肾功能不全组肌氨酸氧化酶法肌酐干扰值与稳态血清羟苯磺酸钙浓度呈正相关(r=0.816,P=0.000),回归方程为Y=0.002 7X 2+0.343 5X+22.935(r~2=0.987 5,F=671.064,P=0.000)。结论肾功能不全患者常规剂量服用羟苯磺酸钙后出现与eGFR呈负相关的药物蓄积,建议肾功能不全患者使用羟苯磺酸钙应依据eGFR降低用药剂量。(本文来源于《现代检验医学杂志》期刊2019年04期）
胡戈[3]（2019）在《硝酸盐补充和一次性运动对大鼠骨骼肌内质网钙稳态的影响及其机制》一文中研究指出目的:无机硝酸盐补充可以增加机体内一氧化氮(nitric oxide,NO)的生物利用度,有提高运动能力的潜在作用。本研究通过分析硝酸盐补充和一次性运动对大鼠骨骼肌钙稳态的影响及机制,探究硝酸盐补充提高运动能力的内质网机制。方法:离体实验采用大鼠骨骼肌L6细胞,通过毒胡萝卜素诱导内质网应激,以亚硝酸钠(sodium nitrite,NaNO_2)作为NO供体、L-单甲基精氨酸(N~G-Monomethyl-L-arginine,L-NMMA)作为一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂进行干预。比色法检测各组细胞NO浓度和内质网钙离子浓度;蛋白质印记法检测骨骼肌内质网葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、蛋白质二硫键异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)、钙网织蛋白(calreticulin,CRT)、兰尼碱受体1(ryanodine receptor 1,RyR1)、肌集钙蛋白1(calsequestrin-1,CASQ1)、肌浆网/内质网钙-叁磷酸腺苷酶(sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1/2,SERCA1/2)蛋白及其S-亚硝基化蛋白表达水平。在体实验采用128只8周龄SD大鼠,随机分为安静对照组(C)、安静低剂量组(LN)、安静中剂量组(MN)、安静高剂量组(HN)、一次性力竭对照组(EC)、一次性力竭低剂量组(ELN)、一次性力竭中剂量组(EMN)和一次性力竭高剂量组(EHN),每组16只。各低、中、高剂量组分别按照0.3、0.7、1 mmol/kgBW/d剂量灌胃4周硝酸钠(sodium nitrate,NaNO_3)。每周日取尾血测NO浓度。4周后各力竭组进行速度16 m/min,坡度-16°的一次性力竭跑台运动,记录运动时间。运动后即刻和24小时分别取脑、心脏、肝脏、脾脏和肾脏,称重,计算脏器系数;取腓肠肌、比目鱼肌和趾长伸肌进行指标测试。观察骨骼肌组织形态和超微结构变化;比色法检测血清和骨骼肌NO浓度、骨骼肌NOS活性和内质网钙离子浓度;蛋白质印记法检测骨骼肌内质网GRP78、PDI、CRT、RyR1、CASQ1、SERCA1/2蛋白表达。结果:(1)NaNO_2干预通过S-亚硝基化修饰影响GRP78、PDI、RyR1、SERCA1和SERCA2功能,对钙离子通道蛋白功能和伴侣蛋白表达水平的调节是硝酸盐维持钙稳态的主要途径;(2)NaNO_2干预可部分代偿L-NMMA诱导的NO可用性降低;(3)4周硝酸盐补充可以延长一次性离心跑台运动时间,0.7和1mmol/kgBW/d剂量组作用显着;(4)4周硝酸盐补充可以缓解一次性离心跑台运动后24小时内大鼠腓肠肌、比目鱼肌和趾长伸肌的损伤程度;(5)4周硝酸盐补充可以提高大鼠NO可用性水平,效果随补充剂量升高而升高,不同肌纤维类型之间无效果差异,不受NOS活性影响;(6)4周硝酸盐补充可以缓解一次性离心跑台运动后骨骼肌内质网应激,0.7和1 mmol/kgBW/d剂量组作用显着,不同肌纤维类型之间无效果差异;(7)4周硝酸盐补充可以提高大鼠内质网钙离子浓度,1 mmol/kgBW/d剂量组作用显着,其原因可能与NO上调CASQ1、SERCA1/2蛋白表达水平,增加内质网钙储量有关,不同肌纤维类型之间无效果差异。结论:(1)无机硝酸盐补充可以提高NO生物可用性,代偿内源性NO不足引起的功能障碍;(2)4周硝酸盐补充对一次性离心力竭运动引起的骨骼肌钙稳态失衡和内质网应激具有缓解作用,其有效性与剂量有关;(3)硝酸盐补充改善运动能力的内质网机制可能是:随着NO生物可用性的增加,CASQ1和SERCA表达水平提高,静息时内质网钙储量增加;通过S-亚硝基化修饰改善RyR1和SERCA活性,加快运动时钙离子跨膜交换速度;而高表达的CASQ1可起到缓冲作用。硝酸盐通过维持内质网钙稳态,降低内质网应激水平,减轻肌纤维损伤,最终使运动能力得到改善。(本文来源于《北京体育大学》期刊2019-06-01）
储小燕,朱雷,曹利,陈晓芳,李玉[4]（2019）在《脱氧雪腐镰刀菌烯醇暴露对断奶仔猪延髓脂质过氧化反应、神经递质及钙稳态的影响》一文中研究指出旨在通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)体内暴露试验,检测仔猪延髓组织的脂质过氧化反应、神经递质分泌及钙稳态的变化,研究DON对仔猪的神经毒性作用。选取30头21日龄"杜×长×大"叁元杂交断奶仔猪,随机分为对照组、DON低剂量组和DON高剂量组,每组10头仔猪。对照组饲喂基础饲料,DON低剂量组和高剂量组分别饲喂含1、2 mg·kg~(-1)DON的饲料,试验期为60 d。试验结束时,每组随机选择5头仔猪屠宰,采集延髓组织,检测氧化与过氧化水平、神经递质含量和Ca~(2+)浓度、钙调蛋白(CaM)与钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA相对表达量及CaM、CaMKⅡ、p-CaMKⅡ的蛋白表达水平。结果显示:与对照组相比,DON高、低剂量组脂质过氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显着降低(P<0.01),而一氧化氮(NO)浓度极显着升高(P<0.01);DON高、低剂量组神经递质5-羟色胺(5-HT)浓度极显着升高(P<0.01),而乙酰胆碱(ACH)浓度极显着降低(P<0.01),高剂量组多巴胺(DA)和γ-氨基丁酸(GABA)浓度显着下降(P<0.05);DON高、低剂量组钙稳态指标Ca~(2+)浓度均极显着升高(P<0.01),低剂量组CaM mRNA表达量显着降低(P<0.05),高、低剂量组CaMKⅡmRNA表达量均极显着降低(P<0.01);DON高剂量组CaM蛋白表达水平极显着降低(P<0.01),而p-CaMKⅡ蛋白表达水平极显着升高(P<0.01)。试验结果表明,DON暴露能够改变仔猪延髓组织脂质过氧化反应及神经递质的分泌,并导致钙稳态紊乱,对断奶仔猪具有一定的神经毒性作用。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2019年05期）
申华[5]（2019）在《Junctophilin-2调节心房肌细胞内钙稳态及心房重构影响房颤发生的作用机制研究》一文中研究指出一、研究背景心房颤动(atrial fibrillation,AF)是最严重的心房电活动紊乱,也是临床上最常见的心律失常,并伴有较高的致残率和致死率。AF可逐渐由阵发性房颤(paroxysmal AF)进展为持续性房颤(persistent AF),是缺血性脑卒中、充血性心力衰竭及全因性死亡率增加的主要危险因素。目前AF的具体发生机制尚不明确,这严重制约着临床上AF治疗的有效性及安全性。Calpain是一类钙离子依赖激活的半胱氨酸蛋白酶,在钙超载时其可转位至胞膜上并大量激活,水解一些蛋白底物,引起细胞结构和功能的破坏。近来研究发现,房颤患者心房肌组织中激活的Calpain-1可酶解L-型钙通道(L-type calcium channel,LTCC)、钠钙交换体(sodium-calcium exchanger,NCX)等多种心肌细胞内离子通道及结构蛋白。近期发现,位于心肌横管膜(transverse tubules,T-tubules)与肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)膜之间的膜偶联结构蛋白——亲联蛋白2(junctophilin-2,JP2)可以通过稳定肌浆网钙通道雷尼丁受体2(ryanodine receptor 2,RyR2)而发挥调节心肌细胞内钙稳态的作用,而钙稳态异常被认为是AF发生发展的重要机制之一。此外,在缺血再灌注损伤、心力衰竭等动物模型中,均发现JP2蛋白可被激活的Calpain-1所降解,提示JP2也是Calpain-1的降解底物蛋白之一。因此我们推测,在心房快速搏动、氧化应激等刺激条件下,心房肌内Calpain-1激活可通过降解重要钙稳定蛋白JP2等底物,促进房颤的发生与维持;而维持正常水平的JP2蛋白可减少RyR2的异常钙泄漏,抑制延迟后除极(delayed afterdepolarization,DAD)等电触发活动、以及可能的心房重构的发生,从而发挥其维持正常心律的关键作用。二、研究目的(一)明确JP2及Calpain-1在房颤患者及实验性房颤模型中的表达规律(二)阐明Calpain-1抑制剂通过调控JP2在小鼠房颤模型中的作用及机制(叁)探讨JP2蛋白水平变化影响小鼠房颤易感性的作用及机制研究叁、研究方法(一)Calpain-1及JP2在房颤患者和实验性房颤模型中的变化规律研究1.收集于我科行体外循环下冠状动脉搭桥术或者二尖瓣外科手术患者的心房肌标本,其中术前诊断为持续性AF者28例,维持正常窦性心律(normal sinus rhythm,NSR)者16例,于体外循环转机前采集标本,迅速转移至医院生物样本库。检测心房肌组织中JP2及Calpain-1的蛋白表达变化,以及Calpain-1酶活性的变化情况。2.选取共计18只成年新西兰大白兔(2.0~2.5 kg,雄性)为实验对象,按照随机数法分别纳入假手术组(sham)和RAP组(2 w、4 w),其中每组6只。沿胸骨左缘第3肋间打开胸腔,暴露心脏,将起搏电极头端缝合固定于左心房游离壁.起搏电极尾端缝合固定于胸腹壁位置上并通过皮下与起搏器相接。起搏器起搏模式为AOO,刺激频率为1000 bpm,连续刺激4 w,以建立快速心房起搏(rapid atrial pacing,RAP)兔AF模型。检测心房肌组织中JP2及Calpain-1的蛋白表达变化,以及Calpain-1酶活性的变化情况。(二)Calpain-1抑制剂调控JP2在小鼠房颤模型中的作用及机制研究1.实验动物的选择及分组本实验中,我们采用诱导性基因调控“Tet-off”系统构建心脏特异性Calpain-1过表达小鼠(CAPN 1-OE)模型,作为房颤小鼠实验模型。在该系统中融合表达四环素(Tetracycline,Tet)调控的转录激活子(tet-controlled transcriptional activator,tTA),在缺少四环素或者强力霉素(doxycycline,Dox)时,tTA可以激活目的质粒转录;在四环素或者强力霉素作用下,缺少增强子使目的基因表达量很低或无法表达。开展作用及机制研究的时间点为撤除Dox药物饲料(即Tet-off系统开始目的基因过表达)后8周。在该时间点,分为以下叁组,即对照组(control),Calpain-1过表达组(CAPN 1-OE),以及Calpain-1过表达同时给予Calpain抑制剂(MDL28170,10 mg/kg,1/日,腹腔注射)处理组(CAPN 1-OE+MDL)。本部分纳入实验小鼠共计75只,其中选择无Calpain-1过表达的αMHC-tTA小鼠(Calpain/tTA-/+)作为对照组,雌雄不限,共计25只;选择心脏特异性Calpain-1过表达组小鼠(Calpain/tTA+/+),雌雄不限,共计50只,采用随机数字法分为CAPN1-OE组和CAPN 1-OE+MDL组,每组25只。2.Calpain抑制剂调控小鼠房颤易感性的作用研究采用STG-3008型多通道电刺激器(MultiChannel Systems,Germany),通过连接Millar 1.1F多电极电生理导管(EPR-800,Millar Instruments),外接Labchart Pro信号采集系统(AD Instruments,Australia)同时记录心脏表面电信号和体表心电图,明确食管腔内电刺激导管的合适位置,开展经食管心脏程序性电刺激和记录。采用经食管心脏程序性电刺激方法检测各组小鼠AF的诱发率和持续时间的变化情况。3.标本收集完成相应电生理检测后,处死小鼠收集心脏标本,用于后续分子生物学、共聚焦成像等实验研究。采用Western blot检测各组心房组织JP2表达变化;采用活性检测试剂盒,评估各组心房组织Calpain 1的酶活性。4.Calpain抑制剂调节小鼠心房肌细胞钙稳态的机制研究通过Langendorff灌流酶解法成功分离成年小鼠心房肌细胞,进行5μM Fluo-4AM钙荧光标记后在激光共聚焦显微镜下检测钙稳态变化情况。激发波长/发射波长分别为488 nm/505–530 nm。刺激强度15 V/cm,频率1 Hz的规律电刺激暂停5 s后,检测钙火花(Ca~(2+)sparks)发生频率的变化。在此基础上,为了进一步明确撤药4周时JP2-OE的保护作用机制,采用钙指示剂(5μM Rhod-2 AM)小鼠心脏整体灌流的方法,原位观察整个心房组织(in situ whole heart imaging)的钙稳态异常,如钙波(Ca~(2+)waves)的发生频率情况。5.Calpain抑制剂调节小鼠心房肌细胞电重构的机制研究采用经食管心脏程序性电刺激方法,行S1S2刺激,比较心房有效不应期(atrial effective refractory period,AERP)的变化情况;采用心脏整体灌流心肌细胞膜荧光指示剂(5μM MM 4-64)30 min后,原位观察整个心房组织横管(Transverse tubules,T-tubules)结构的变化情况。6.Calpain抑制剂调节小鼠心房肌结构重构的机制研究在进行完相应电生理实验之后,剪取小鼠心房肌组织称重(atrium weight),测量小鼠胫骨长度(tibia length),计算心房重量/胫骨长度(atrium weight/tibia length,AW/TL);小鼠心脏4%PFA灌流固定处理后,采用Masson trichrome染色法,检测小鼠心房纤维化程度;剪取小鼠心房肌标本,采用Western blot检测心房中转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1,α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin,SMA),以及I型胶原蛋白(collagen I,Col I)等经典促纤维化信号通路的蛋白表达变化。(叁)JP2蛋白水平变化调控小鼠房颤易感性的作用及机制研究1.心肌特异性JP2过表达小鼠、Calpain-1/JP2双基因共同过表达小鼠模型的构建本实验中,我们首先构建了心肌特异性JP2过表达小鼠(JP2-OE),并将其与业已建立的Calpain-1过表达小鼠(CAPN 1-OE)杂交,以产生Calpain和JP2共同过表达小鼠(CAPN 1-OE×JP2-OE)。2.实验动物的选择及分组按照基因型不同,本部分实验分为以下叁组,即对照组小鼠(control),Calpain-1过表达小鼠(CAPN 1-OE)以及Calpain和JP2共同过表达小鼠(CAPN 1-OE×JP2-OE)。共计纳入小鼠75只,其中选择有且仅有tTA基因阳性表达,即Calpain/tTA-/+或Calpain/JP2/tTA-/-/+的基因型小鼠作为对照组,雌雄不限,共计25只;选择仅Calpain-1心脏特异性过表达组小鼠(Calpain/tTA+/+或Calpain/JP2/tTA+/-/+)为CAPN1-OE组,雌雄不限,共计25只;选择心脏特异性Calpain-1/JP2共同过表达组小鼠(Calpain/tTA+/+或Calpain/JP2/tTA+/-/+)为CAPN 1-OE×JP2-OE组,雌雄不限,共计25只。在此基础上,按照撤除Dox药物饲料(即Calpain或者Calpain/JP2过表达激活)的时间,再细分为撤Dox饲料4周组(Dox withdrawal 4 w),以及撤Dox药物饲料8周组(Dox withdrawal 8 w)。每个时间段的系列实验动物分组同上,因此本部分实验共计纳入小鼠150只。3.各组小鼠心功能基线变化情况电生理实验开始之前,利用超声心动图检测各组小鼠心脏功能的变化情况,如左室射血分数(Left ventricular ejection fraction,LVEF),收缩末左室容积(end-systolic volume,ESV),以及舒张末左室容积(end-diastolic volume,EDV)等;并评估整体心脏重构改变,比较各组小鼠心脏重量/体重(heart weight/body weight,HW/BW)以及肺脏重量/体重(lung weight/body weight,LW/BW)的变化情况。4.JP2过表达对小鼠房颤易感性的作用研究实验方法同第二部分。在相应的时间点,采用经食管心脏程序性电刺激,首先行不同基础刺激周长(basic cycle length,BCL)的连续短阵S1S1刺激,比较标准窦房结恢复时程(corrected sinus node recovery time,cSNRT)的变化情况,评价窦房结功能变化;采用burst电刺激方案,检测叁组小鼠AF的诱发率和持续时间的变化情况。5.标本采集完成相应电生理实验之后,处死小鼠收集心脏标本,用于后续分子生物学、共聚焦成像等实验研究。采用Western blot检测心房中JP2及Calpain-1的蛋白表达水平变化;采用钙蛋白酶Calpain活性检测试剂盒,评估各组小鼠心房肌组织中Calpain 1的酶活性变化情况。6.JP2调节CAPN 1-OE小鼠钙稳态的机制研究实验方法同第二部分。检测各组小鼠心房肌细胞钙火花发生频率变化情况;采用钙荧光指示剂心脏整体灌流方法,原位观察心房组织的钙波等钙泄漏事件发生情况。7.JP2调控CAPN 1-OE小鼠心房电重构的机制研究经食管心脏电刺激程序同第二部分。检测各组小鼠心房有效不应期AERP的变化情况;采用离体心脏原位T管成像技术,检测左右心房组织T管结构重构情况。8.JP2调节CAPN 1-OE小鼠结构重构的机制研究实验方法同第二部分。采用大体标本成像、心房重量/胫骨长度AW/TL评价叁组小鼠心房腔扩大情况;采用Masson染色法,检测各组小鼠心房纤维化程度;采用Western blot方法,检测各组小鼠心房组织中TGF-β1,α-SMA,以及Col I的蛋白表达水平变化。四、研究结果(一)Calpain-1及JP2在房颤患者和实验性房颤模型中的变化及相关性研究1.房颤患者心肌标本中JP2及Calpain-1的表达规律持续性房颤患者心房肌组织中JP2蛋白表达水平显着下降,Calpain-1蛋白水平及其酶活性均显着升高,心房肌JP2蛋白水平与Calpain-1蛋白酶活性成显着负相关。2.快速心房起搏兔房颤模型中JP2及Calpain-1的表达规律在RAP兔房颤模型中,随着高频心房起搏时程延长,心房肌组织中JP2蛋白表达水平逐渐下降,Calpain-1蛋白水平及酶活性逐渐升高,心房肌JP2蛋白水平与Calpain-1蛋白酶活性成显着负相关。(二)Calpain-1抑制剂调控JP2在小鼠房颤模型中的作用及机制研究1.Calpain抑制剂显着改善CAPN 1-OE小鼠异常升高的房颤易感性同对照组小鼠相比,CAPN 1-OE 8周组小鼠其房颤的诱发率显着升高,房颤事件持续时长明显延长。而在撤除Dox药物饲料即日起,开始腹腔注射Calpain抑制剂MDL28170,结果提示,CAPN 1-OE+MDL处理组中,小鼠房颤诱发率、持续时间的异常升高均明显改善。2.Calpain抑制剂显着改善CAPN 1-OE小鼠心房肌Calpain-1的过度激活同对照组小鼠相比,CAPN 1-OE小鼠心房肌组织Calpain 1的酶活性显着升高,伴有JP2蛋白表达水平明显下降,而CAPN 1-OE+MDL小鼠心房肌组织中的Calpain1的酶活性显着降低,而JP2蛋白表达水平得以明显恢复。3.Calpain抑制剂显着改善CAPN 1-OE小鼠心房肌细胞异常钙稳态同对照组小鼠相比,CAPN 1-OE 8周组小鼠心房肌细胞钙火花异常增多;采用心脏整体钙成像技术检测发现心房肌中异常钙波发生频率明显增多。CAPN 1-OE+MDL处理组中,上述钙火花频率增高等异常钙稳态现象明显改善,而在心脏整体灌流钙荧光指示剂染色成像中,结果提示MDL处理可以明显改善CAPN 1-OE小鼠心房肌的钙稳态异常。4.Calpain抑制剂可以明显改善CAPN 1-OE小鼠心房电重构同对照组小鼠相比,CAPN 1-OE 8周组小鼠心房肌AERP大幅缩短,而CAPN 1-OE+MDL小鼠心房肌AERP这一关键电重构指标明显改善。原位观测小鼠心房肌细胞中T管结果提示,在撤除Dox药物饲料8周时,CAPN 1-OE小鼠左、右心房肌细胞中T管形态明显紊乱,结构消失,而MDL处理组可使CAPN 1-OE小鼠原位心房肌细胞中的T管系统的完整性明显改善。5.Calpain抑制剂可以明显改善CAPN 1-OE小鼠心房肌的结构重构CAPN 1-OE 8周组小鼠心房可见显着的双心房腔扩大,且AW/TL显着增大,Masson染色提示心肌纤维化明显增多,WB结果显示心房肌组织中TGF-β1,α-SMA以及Col I等纤维化相关指标均明显激活;而Calpain抑制剂MDL处理后,CAPN 1-OE小鼠心房扩张、心室肥厚显着改善,WB结果提示心房肌组织中TGF-β1,α-SMA以及Col I等蛋白表达水平显着下调,Masson染色同样证实了CAPN 1-OE+MDL小鼠心房肌纤维化程度的改善。(叁)JP2蛋白水平变化调控小鼠房颤易感性的作用及机制研究1.成功建立了Calpain-1/JP2双基因共同过表达小鼠模型在该部分,首先建立了心肌特异性JP2过表达小鼠(JP2-OE)。与对照组小鼠相比,在撤除Dox药物饲料4周,即JP2过表达激活4周时,JP2-OE小鼠的心房肌组织中JP2的蛋白表达水平显着增高;将JP2-OE小鼠与CAPN 1-OE小鼠杂交,即可得到Calpain-1/JP2双基因共同过表达小鼠模型(CAPN 1-OE×JP2-OE)。2.在撤除Dox药物饲料4周时,心脏超声结果提示各组小鼠左室功能未见明显异常超声心动图结果显示,对照组小鼠,CAPN 1-OE小鼠以及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠等3组小鼠,其左室射血分数LVEF,收缩末左室容积ESV,以及舒张末左室容积EDV等未见显着差别;取小鼠心脏、肺脏等称重后,各组小鼠心脏重量/体重HW/BW、肺脏重量/体重LW/BW的变化情况等未见显着差别。3.在撤除Dox药物饲料8周时,CAPN 1-OE小鼠以及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠均出现较明显的左室功能受损超声心动图结果显示,同对照组小鼠相比,CAPN 1-OE小鼠以及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠等,其LVEF显着下降,而ESV及EDV等指标显着升高,提示存在明显的左心收缩舒张功能障碍;此外,CAPN 1-OE小鼠以及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠等HW/BW显着增大,但LW/BW未见显着差别,提示存在显着的心脏肥厚,但未见明显的肺脏淤血等。4.叁组小鼠窦房结传导功能均未见明显异常在撤除Dox药物饲料4周时,检测叁组小鼠心房标准窦房结恢复时程cSNRT后发现,对照组小鼠、CAPN 1-OE小鼠及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠中该指标均未见异常,提示CAPN 1-OE和/或JP2-OE并未对小鼠窦房结功能产生影响。在撤除Dox药物饲料8周时,对照组小鼠、CAPN 1-OE小鼠及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠中该指标变化均未达到统计学差异,提示窦房结功能仍维持正常水平。5.叁组小鼠心房肌组织中Calpain-1酶活性的变化情况JP2过表达4周,CAPN 1-OE小鼠、CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房肌组织中Calpain-1酶活性均显着上升;JP2过表达8周时,CAPN 1-OE小鼠、CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房肌Calpain-1酶活性呈进一步升高。提示JP2-OE并不能改变Calpain-1酶活性。6.在撤除Dox药物饲料4周时,JP2-OE可显着降低CAPN 1-OE小鼠房颤的诱发率和持续时间同对照组小鼠相比,CAPN 1-OE小鼠经burst电刺激后可诱发出房颤的比例显着增高,而JP2-OE可使CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠房颤的诱发率明显降低,且房颤事件发作持续时间也明显缩短。7.在撤除Dox药物饲料8周时,JP2-OE未能改善CAPN 1-OE小鼠明显升高的房颤诱发率CAPN 1-OE小鼠经burst电刺激后房颤诱发率显着增高,而JP2-OE并未使能显着改善CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠房颤的诱发率,但仍可明显缩短房颤事件的发作持续时间。8.叁组小鼠心房肌JP2蛋白表达水平变化情况在撤除Dox药物饲料4周时,JP2-OE可显着改善CAPN 1-OE小鼠心房肌组织内的JP2蛋白表达水平;但在撤除Dox药物饲料8周时则无法维持心房肌JP2正常水平,CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房肌组织中的JP2蛋白含量也显着下降。提示JP2表达水平逐渐下降,是导致CAPN 1-OE小鼠房颤易感性增加的机制之一,而维持正常水平的JP2蛋白水平,是JP2-OE发挥调节房颤易感性的蛋白基础。9.JP2过表达4周对房颤小鼠心房钙稳态异常的调控作用同对照组相比,CAPN 1-OE小鼠心房肌细胞中可见明显异常增多的自发性钙火花,而JP2-OE可使CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房肌细胞中钙火花发生频率明显改善。此外,离体心脏原位钙成像结果提示,同对照组相比,CAPN 1-OE小鼠心房肌中自发性钙波等异常钙释放事件显着增多,而JP2-OE可使CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠原位心房肌中钙波发生频率明显改善,该离体心脏原位钙成像的结论与分离的单个心房肌细胞的结果趋势一致。10.JP2过表达8周对房颤小鼠心房钙稳态异常的调控作用同对照组相比,CAPN 1-OE及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房肌细胞中可见明显异常增多的自发性钙火花。此外,离体心脏原位钙成像结果提示,同心房肌钙波发生频率异常增多的CAPN 1-OE小鼠相比,CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房肌自发性钙波发生频率未见明显减少,该离体心脏原位钙成像的结论与分离的单个心房肌细胞的结果趋势一致。11.JP2过表达4周对房颤小鼠心房电重构的影响同对照组相比,CAPN 1-OE小鼠经食管程序性S1S2电刺激后可发现其AERP显着缩短,而JP2-OE可使CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠的AERP得以明显改善;而原位观测小鼠心房肌细胞中T管系统结果提示,在撤除Dox药物饲料4周时,CAPN 1-OE小鼠左、右心房肌细胞中T管形态明显紊乱,结构消失,而对照组小鼠心房肌细胞内可见规律存在的T管,且广泛分布于大部分心房肌细胞中,JP2-OE可使CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠原位心房肌细胞中的T管系统的完整性明显改善,完整、规律排列的T管系统有助于细胞电信号的精细传递。12.JP2过表达8周对房颤小鼠心房电重构的影响同对照组相比,CAPN 1-OE及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠经S1S2食管电刺激后发现AERP均显着缩短;而原位观测小鼠心房肌细胞中T管系统结果提示,JP2过表达8周时,CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房T管系统的完整性未见明显改善,提示此时JP2过表达未能有效改善房颤小鼠的电重构。13.JP2过表达4周对房颤小鼠心房结构重构的影响同对照组相比,CAPN 1-OE小鼠心房重量/胫骨长度AW/TL明显增大,而JP2-OE可使CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠AW/TL明显改善,而大体心脏标本也可得出同一结论,肉眼可见CAPN 1-OE小鼠双心房,尤其是左心房明显扩大,而CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房腔扩大明显改善;心房肌组织纤维化也是房颤维持的重要基质改变。Masson染色结果提示,同对照组相比,CAPN 1-OE及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠的心房纤维化程度均显着增高,WB结果显示CAPN 1-OE及CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠的心房肌组织中经典促纤维化信号通路TGF-β1/α-SMA/Col I均明显激活,提示JP2-OE参与调控小鼠心房腔的大小,未能有效改善房颤小鼠心房纤维化信号通路的激活。14.JP2过表达8周对房颤小鼠心房结构重构的影响JP2过表达8周时,同CAPN 1-OE小鼠相比,CAPN 1-OE×JP2-OE小鼠心房腔的扩大未得到有效抑制。Masson染色结果提示,同对照组相比,CAPN 1-OE及CAPN1-OE×JP2-OE小鼠的心房纤维化程度均进一步增高。五、研究结论1.在房颤患者及房颤实验模型中,随着心房快速刺激持续存在,心房肌组织中JP2蛋白表达水平逐渐降低,而Calpain-1表达明显上调且其酶活性显着激活,且心房肌JP2蛋白水平与Calpain-1蛋白酶活性成显着负相关;2.在CAPN 1-OE小鼠房颤模型中,JP2蛋白是Calpain-1重要降解底物之一。在Calpain-1蛋白过表达8周时,MDL28170通过显着抑制Calpain-1酶活性,并改善心房肌蛋白JP2的表达水平,显着改善房颤的易感性;3.心房肌细胞JP2蛋白的变化,可通过调节房颤小鼠心房肌细胞钙稳态(钙火花、钙波等钙异常释放事件),进而影响心房电重构(AERP变化、T管结构重构)及结构重构(心房腔扩大、心房纤维化),从而影响小鼠房颤易感性(房颤的发生率及持续时间);JP2-OE作为潜在的治疗房颤的可能手段,其调控房颤易感性的作用有一定的时程性。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
童静[6]（2019）在《基于细胞内钙稳态探讨Liguzinediol对阿霉素诱导心肌细胞损伤的保护作用》一文中研究指出目的心力衰竭(heart failure,HF)是多种心脏疾病发展到终末阶段的临床症候群,主要表现为心肌收缩功能的降低,严重威胁人类的身体健康。中国作为世界上拥有最大心衰患者群的国家之一,研究心衰的发病机制并改善衰竭心脏的心功能,提高心衰患者的生存质量是目前亟待解决的问题。心衰的机制在细胞水平上主要涉及心肌细胞损伤,心肌细胞属于终末期细胞,其损伤对于心脏的形态结构具有不可逆性改变。因此,本课题旨在通过阿霉素复制心肌细胞损伤模型,在细胞水平上探讨Liguzinediol对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用及机理。方法1.Liguzinediol对阿霉素诱导的H9C2细胞损伤的影响利用MTT检测不同浓度Liguzinediol作用于H9C2细胞24和48小时,确定Liguzinediol对正常心肌细胞是否有毒性;然后将不同浓度阿霉素作用于H9C2细胞24小时,确定阿霉素损伤心肌细胞50%的浓度;在此基础上筛选Liguzinediol对阿霉素诱导的H9C2细胞损伤有保护作用的高、中、低叁个浓度。然后将H9C2细胞分为:空白对照组、阿霉素组、Liguzinediol高、中、低剂量组,观察Liguzinediol对阿霉素诱导的H9C2细胞损伤的保护作用;胶原收缩实验观察Liguzinediol对阿霉素诱导的受损的H9C2细胞收缩功能的影响。2.Liguzinediol对阿霉素诱导的H9C2细胞凋亡的影响利用Hochest33258染色以及流式细胞术FITC/PI染色观察Liguzinediol对阿霉素诱导的H9C2细胞凋亡的影响;Western blot观察Liguzinediol对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡相关蛋白Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2以及细胞色素C(CytC)表达的影响。3.围绕钙稳态探讨Liguzinediol抑制阿霉素诱导H9C2细胞凋亡的机理首先利用钙成像技术观察Liguzinediol在有钙缓冲液和无钙缓冲液中对大鼠原代心肌细胞内钙离子浓度的影响;再通过灌流阿霉素动态观察其对心肌细胞内钙离子浓度的影响,进而观察Liguzinediol对阿霉素诱导的心肌细胞内钙稳态失衡的调控;Western blot和PCR分别观察Liguzinediol对阿霉素诱导的心肌细胞肌浆网和线粒体内钙相关转运体及其信号通路的影响。结果1 Liguzinediol能够减少阿霉素诱导的H9C2细胞损伤MTT结果表明,与空白对照组比较,Liguzinediol的浓度低于10-1mol/L浓度时对H9C2细胞无毒性,说明Liguzinediol的浓度在低于10-1mol/L属于安全范围,可用于后续实验。阿霉素复制H9C2细胞损伤模型的结果表明,阿霉素浓度为5μmol/L时,其损伤率达50%左右,因此选择此浓度作为后续试验的造模浓度。与空白对照组比较,阿霉素组H9C2细胞的吸光度(OD值)明显降低,具有显着性差异;在此基础上给予不同浓度的Liguzinediol,结果与阿霉素组比较,Liguzinediol(10-4、10-5、1 0-6mol/L)能够明显增加H9C2细胞活力并呈剂量依赖性,说明Liguzinediol能够减轻阿霉素诱导的H9C2细胞损伤。胶原收缩实验结果表明,与空白对照组比较,阿霉素组H9C2细胞收缩功能明显降低,胶原面积增加,收缩减少;与阿霉素组比较,Liguzinediol能够明显改善阿霉素诱导的H9C2细胞收缩功能的降低引起胶原收缩面积减少,收缩增加,说明Liguzinediol能够增强阿霉素诱导的受损H9C2细胞的收缩功能。2 Liguzinediol可明显抑制阿霉素诱导的H9C2细胞凋亡Hochest33258染色结果显示阿霉素组出现H9C2细胞染色质固缩、细胞质亮染以及细胞核碎裂等凋亡的典型特征,给予Liguzinediol后能够明显减少凋亡的发生;流式细胞术结果发现,与空白对照组比较,阿霉素组H9C2细胞的凋亡率显着增加,给予Liguzinediol后凋亡率明显降低;Western blot检测结果表明,与空白对照组比较,阿霉素组凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3以及细胞色素C(CytC)的表达增加而pro-Caspase-3蛋白表达减少,给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较pro-Caspase-3蛋白表达增加而Cleaved-caspase-3以及CytC的蛋白表达减少。另外,与空白对照组比较,阿霉素组Bax的蛋白表达显着增加而Bcl-2的蛋白表达减少,使Bax/Bcl-2的比例增加,给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较Bcl-2表达明显增加引起Bax/Bcl-2的比例相对减少,说明Liguzinediol能够通过抑制Cleave-Caspase-3、Bax和CytC的蛋白表达而改善阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。3 Liguzinediol通过调控细胞内钙稳态抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡3.1 Liguzinediol对阿霉素诱导的受损的原代心肌细胞的外钙内流和内钙外排无影响钙离子荧光检测结果表明,与空白对照组比较,阿霉素组原代心肌细胞内钙离子浓度显着增加;与阿霉素组比较,给予Liguzinediol后原代心肌细胞内钙离子浓度明显降低。钙成像结果表明,在有钙缓冲液与无钙缓冲液灌流的条件下,加入Liguzinediol均能够引起细胞内钙离子增加,说明Liguzinediol对细胞内钙离子的调控与外钙内流无关;阿霉素灌流后与灌流前比较,阿霉素能够明显增加细胞内的钙离子荧光强度;给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较其钙离子变化明显降低,说明Liguzinediol能够降低阿霉素诱导的原代心肌细胞钙离子增加。Western blot检测心肌细胞膜上钠钙交换体(NCX)的表达,实验结果表明,与空白对照组比较,阿霉素能明显增加细胞膜上NCX的表达,Liguzinediol处理后,与阿霉素组比较,NCX的表达无明显改变,说明Liguzinediol不通过心肌细胞膜上的钠钙交换体来实现其对细胞内钙离子的调控,从而抑制心肌细胞的凋亡。3.2 Liguzinediol通过肌浆网内钙相关转运体调控阿霉素诱导受损H9C2细胞内钙稳态失衡Western blot结果表明,与空白对照组比较,阿霉素组肌浆网钙泵(SERCA2a)、兰尼碱受体(RyR2)、肌浆网RyR2稳定蛋白FKBP12.6以及叁磷酸肌醇受体(IP3R2)的表达显着降低,而p-RyR2的蛋白表达水平增加;给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较SERCA2oα、RyR2、FKBP12.6以及IP3R2的蛋白表达水平增加,而p-RyR2的水平降低,说明肌浆网内SERCA2α等钙相关转运体参与Liguzinediol对细胞内钙稳态的调控。3.3.Liguzinediol通过线粒体内钙相关转运体调控阿霉素诱导受损H9C2细胞内钙稳态失衡Western blot结果发现,与空白对照组比较,阿霉素组线粒体钙单向转运体(MCU)、电压依赖性阴离子通道(VDAC)以及线粒体自噬相关蛋白Fundcl表达增加;给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较,其线粒体相关蛋白MCU、VDAC以及Fundcl表达明显下降,说明线粒体内MCU等钙相关转运体参与Liguzinediol对心肌细胞内钙离子的调控。另外,Western blot实验结果发现,与空白对照组比较,阿霉素组线粒体融合相关蛋白MFN1和MFN2蛋白表达减少,给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较,MFN1和MFN2蛋白表达增加;与空白对照组比较,阿霉素组线粒体分裂相关蛋白(Fis1)和线粒体动力相关蛋白(Drp1)的表达增加,给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较,Fis1和Drp1的表达降低,说明Liguzinediol对细胞内钙稳态的调控与线粒体的分裂和融合有关。3.4 Liguzinediol通过CaMKII以及PLC-IP3R2信号通路调节阿霉素诱的受损心肌细胞内钙稳态失衡在心肌细胞内调控细胞内钙离子的相关通路有cAMP-PKA、CaM/CaMKII以及PLC-IP3R2。ELISA结果表明,与空白对照组比较,阿霉素组H9C2细胞cAMP的释放显着增加,给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较,cAMP的含量没有明显影响。Western blot结果发现,与空白对照组比较,阿霉素组蛋白激酶A(PKA)、钙调神经磷酸酶(CaN)以及磷脂酶C(PLC)的表达明显增加,给予Liguzinediol后,与阿霉素组比较Liguzinediol能够明显降低PLC蛋白的表达水平,而对PKA没有明显影响。说明Liguzinediol对心肌细胞内钙离子的调控主要与Ca2+/CaMKII以及PLC-IP3R2信号通路有关。结论1 Liguzinediol减少阿霉素诱导的H9C2细胞损伤,通过抑制H9C2细胞凋亡相关蛋白的表达发挥其抗凋亡的作用。2 Liguzinediol作用于肌浆网和线粒体上钙相关转运体调节阿霉素诱导的H9C2细胞内钙稳态失衡,从而抑制H9C2细胞凋亡。3 Liguzinediol通过Ca2+/CaMKII以及PLC-IP3R2信号通路调节心肌细胞内的钙稳态,抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡和增加心肌细胞的收缩力。(本文来源于《南京中医药大学》期刊2019-03-28）
刘秦,储小燕,刘锦芳,张娅菲,朱雷[7]（2019）在《脱氧雪腐镰刀菌烯醇与黄曲霉毒素B_1单一及联合染毒对小鼠神经递质分泌和钙稳态的影响》一文中研究指出本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与黄曲霉毒素B_1(AFB_1)单一及联合染毒对小鼠神经递质分泌和钙稳态的影响。选取96只18日龄昆明系雄性小鼠,随机分成4组,每组24只,每天分别进行灌胃染毒,对照组灌服生理盐水,DON组灌服500μg/kg DON,AFB_1组灌服200μg/kg AFB_1,DON+AFB_1组灌服200μg/kg AFB_1+500μg/kg DON。试验期45 d。分别于试验第0天(试验开始前)、第15天、第30天、第45天每组选取6只小鼠进行剖杀,取脑组织,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测神经递质、钙离子(Ca~(2+))和钙调蛋白(CaM)含量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CaM mRNA的表达量,Western blotting法检测钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMKⅡ)蛋白表达量。结果显示:在各时间点与对照组相比,DON+AFB_1组小鼠脑组织中5-羟色胺(5-HT)、谷氨酸(Glu)、乙酰胆碱(ACH)含量显着或极显着上升(P<0.05或P<0.01),多巴胺(DA)、Ca~(2+)、CaM含量极显着下降(P<0.01),CaM mRNA表达量(第45天除外)极显着下降(P<0.01),磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶(p-CaMKⅡ)蛋白表达量/CaMKⅡ蛋白表达量极显着升高(P<0.01);DON组和AFB_1组小鼠脑组织中5-HT、ACH含量显着或极显着上升(P<0.05或P<0.01),Ca~(2+)含量极显着下降(P<0.01),CaM mRNA表达量(第45天除外)显着或极显着下降(P<0.05或P<0.01),p-CaMKⅡ蛋白表达量/CaMKⅡ蛋白表达量极显着升高(P<0.01)。试验结果表明,DON与AFB_1单一及联合染毒均可造成小鼠脑组织中神经递质分泌紊乱和钙稳态失衡,DON和AFB_1的联合毒性大于单一毒性,两者具有协同效应。(本文来源于《动物营养学报》期刊2019年02期）
金明朋,尹纯,尚英英,曹海燕,吉晓莹[8]（2018）在《NCLX介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响》一文中研究指出目的探讨线粒体钠钙交换体(mitochondrial Na+/Ca2+exchanger,NCLX)介导的线粒体钙稳态对肝癌细胞生长的影响。方法真核表达载体pSliencer3.0-shNCLX、pcDNA3.1(+)-NCLX分别转染肝癌细胞SNU-739和SNU-368,构建稳定干涉和过表达NCLX肝癌细胞。采用免疫印迹法检测转染后肝癌细胞中NCLX蛋白的表达,Rhod-2-AM染色检测肝癌细胞线粒体钙水平,MTS和EdU实验检测肝癌细胞增殖能力,流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡情况。结果免疫印迹法检测结果显示成功构建干涉和过表达NCLX的SNU-739和SNU-368肝癌细胞。与转染空载体肝癌细胞比较,干涉NCLX后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体钙明显增多(P<0.01),细胞增殖率明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.01);而过表达NCLX后肝癌细胞SNU-739和SNU-368线粒体钙明显减少(P<0.05),细胞增殖率明显下降(P<0.05),细胞凋亡率明显上升(P<0.01)。结论干涉NCLX诱导的线粒体钙水平升高可促进肝癌细胞增殖和抑制凋亡,而过表达NCLX诱导的线粒体钙水平下降抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡,NCLX可能是肝癌的潜在治疗靶点。(本文来源于《中国癌症防治杂志》期刊2018年06期）
余蕾,赵雪红,张静姝,樊小力,李雪萍[9]（2018）在《肌细胞钙稳态的维持及模拟失重条件下钙稳态的改变》一文中研究指出Ca2+触发了肌肉的收缩,参与肌细胞活动的调节,钙稳态的维持对肌肉收缩功能具有重要作用。模拟失重条件下肌细胞钙稳态失衡与肌球蛋白表型的转换及骨骼肌收缩功能减弱关系密切。针对钙稳态的维持及模拟失重条件下的钙稳态失衡与肌萎缩的关系及其可能的机制进行了综述。(本文来源于《生物学杂志》期刊2018年06期）
高丽丽,翁柠,华荣,孙景波[10]（2018）在《从体内钙稳态调节机制探讨老年人肝风内动的形成因素》一文中研究指出肝风内动是中医脑病领域最常见的病理机制之一,在老年人多是由于肝肾阴虚于下,水不涵木,肝阳上亢,亢极生风,导致肝风内动。老年人常处于负钙平衡状态,骨骼明显脱钙,血液和血管、脑等组织的钙含量增加,这与高血压病、动脉粥样硬化、中风等心脑血管疾病有密切关系,也是肝风内动的形成机制之一。深入探讨老年人肝风内动的形成机制及防治措施,对中医脑病的防治有重要的临床指导意义。(本文来源于《中医研究》期刊2018年12期）
钙稳态论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的采用高效液相色谱法(HPLC)检测患者羟苯磺酸钙常规剂量用药后的稳态血药浓度,分析该浓度与患者肾小球滤过率(eGFR)及药物所致肌酐干扰的相关性,为肾功能不全患者调整羟苯磺酸钙用药剂量提供依据。方法①选择并优化检测血清羟苯磺酸钙浓度的HPLC方法,并进行方法学评价;②选择2016年5～10月间黄石市第二医院收治20例肾功能不全和10例非肾功能不全羟苯磺酸钙(剂量为1.5 g/d,Tid)用药患者,采集羟苯磺酸钙服药5天后清晨空腹静脉血,HPLC法检测血清羟苯磺酸钙浓度;③比较肾功能不全组、非肾功能不全组稳态血清羟苯磺酸钙浓度差异,分析肾功能不全组稳态血清羟苯磺酸钙浓度与eGFR及肌氨酸氧化酶法肌酐干扰值相关性。结果①HPLC方法学评价结果:方法专属性色谱图表明羟苯磺酸钙、对氨基苯甲酸内标保留时间分别为:6.9和8.0 min,血清内源性物质不干扰羟苯磺酸钙测定;羟苯磺酸钙及对氨基苯甲酸内标平均萃取回收率分别为:75.5%和94.5%,线性范围:1.90～189.60 mg/L(r~2=0.999 1,P<0.01),检测低限:0.452 mg/L,平均加标回收率98.9%(95.6%～103.6%),18.96,94.80和189.60 mg/L叁种浓度测试样品日内CV分别为4.8%,4.5%和4.1%,日间CV分别为6.3%,6.1%和5.4%。②稳态血清羟苯磺酸钙检测结果:肾功能不全组高于非肾功能不全组(146.10±91.86 vs 16.81±2.48 mg/L),差异有统计学意义(Z=-4.400,P<0.05)。③肾功能不全组稳态血清羟苯磺酸钙浓度与eGFR呈负相关(r=-0.790,P=0.000),回归方程为Y=6 080.61X~(-1.692)(r~2=0.975 3,F=710.882,P=0.001);肾功能不全组肌氨酸氧化酶法肌酐干扰值与稳态血清羟苯磺酸钙浓度呈正相关(r=0.816,P=0.000),回归方程为Y=0.002 7X 2+0.343 5X+22.935(r~2=0.987 5,F=671.064,P=0.000)。结论肾功能不全患者常规剂量服用羟苯磺酸钙后出现与eGFR呈负相关的药物蓄积,建议肾功能不全患者使用羟苯磺酸钙应依据eGFR降低用药剂量。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
钙稳态论文参考文献
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