敲除PLAC8蛋白对人胚肾细胞增殖的影响

论文摘要

为了构建PLAC8蛋白敲除的人胚肾细胞株（293T）并检测其对293T细胞增殖的影响,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术及流式细胞分选术构建敲除PLAC8蛋白的293T细胞株,通过基因组测序及错配酶酶切进行编辑细胞系的筛选。用筛选得到的细胞系提取细胞总蛋白,通过蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测编辑效率。进一步通过细胞生存实验（MTT实验）检测敲除PLAC8对293T细胞增殖的影响,通过蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测敲除PLAC8蛋白后293T细胞中增殖相关基因的表达水平变化。结果表明,成功构建了PLAC8蛋白敲除的细胞系。与野生型细胞系相比,PLAC8表达下调会抑制细胞增殖,且在这一过程中AKT、RAF-1、ERK2、C-MYC等4个与增殖相关基因的蛋白水平改变,提示PLAC8可能通过AKT及RAF-1-ERK2-C-MYC这一级联通路信号调控细胞增殖。

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类型: 期刊论文

作者: 秦绪慧,马立群,欧阳聪,王海霞,浦易之,薛璐

关键词: 基因敲除,细胞增殖,信号通路

来源: 生物学杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 中南民族大学生命科学学院医学生物研究所武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室

基金: 湖北省自然科学基金一般面上项目(No.2018CFB594)

分类号: R329.2

页码: 25-29

总页数: 5

文件大小: 2356K

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标签：基因敲除论文;  细胞增殖论文;  信号通路论文;