绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒的构建及对小鼠细胞免疫应答的影响

绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒的构建及对小鼠细胞免疫应答的影响

论文摘要

为探究绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒对小鼠细胞免疫应答影响,本试验构建了绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒。用已构建的pMD19T-P30和pMD19-Hsp70质粒为模板,采用基因定点突变(SDM)原理设计引物,应用SOE-PCR扩增目的基因片段,并将其定向克隆至表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA 3.1(+)-TBP30和融合重组质pcDNA3.1(+)-TBP30-Hsp70。使用pcDNA3.1-TBP30、pcDNA3.1-TBP30-Hsp70、pcDNA3.1(+)和Elution Buffer对小鼠进行免疫,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、干扰素-γ(INF-γ)分泌水平。结果显示,pcDNA3.1-TBP30-Hsp70酶切后可见大小分别约为1 413 bp的目的基因片段和5 400 bp的载体条带。与空白对照组和pcDNA3.1(+)组相比,免疫重组质粒组均可引起小鼠血清中细胞因子INF-γ、IL-2和IL-4分泌水平的增强,与空白对照组和pcDNA3.1(+)组相比差异显著或极显著(P<0.05;P<0.01);而空白对照组和空质粒组之间差异不显著(P>0.05);免疫pcDNA3.1-TBP30和pcDNA3.1-TBP30-Hsp70组小鼠血清IL-2、INF-γ和IL-4终分泌量增加,表明重组质粒组可刺激小鼠血清中IL-2、INF-γ和IL-4的变化,并且在时间上都呈现出先增多后减少的规律。本试验结果表明,重组质粒pcDNA3.1(+)-TBP30-Hsp70免疫小鼠后,IL-2和INF-γ分泌水平的升高,增强了机体的细胞免疫功能,进而调节机体细胞免疫影响T细胞和巨噬细胞的分泌,从而提高机体细胞免疫能力;IL-4分泌水平升高,促进机体Th2向Th1分化,维持Th1的优势状态,增强了机体的细胞免疫功能。本试验结果为绵羊肺炎支原体基因工程疫苗的研制提供了参考依据。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 载体、质粒及试验动物
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 P30基因定点突变(SDM)引物的设计与合成
  •     1.2.2 重叠延伸PCR
  •     1.2.3 pcDNA3.1-TBP30的构建及鉴定
  •     1.2.4 pcDNA3.1-TBP30-Hsp70的构建及鉴定
  •     1.2.5 序列测定及分析
  •     1.2.6 重组质粒对细胞因子分泌情况影响研究
  • 2 结 果
  •   2.1 重叠延伸PCR结果
  •   2.2 重组质粒pMD19T-TBP30的PCR及双酶切鉴定
  •   2.3 突变重组质粒序列比对结果
  •   2.4 重组质粒pcDNA3.1-TBP30双酶切鉴定
  •   2.5 重组质粒pcDNA3.1-TBP30-Hsp70双酶切鉴定
  •   2.6 重组质粒对小鼠细胞因子分泌情况影响
  •     2.6.1 小鼠血清中IL-4分泌水平检测
  •     2.6.2 小鼠血清中IL-2分泌水平检测
  •     2.6.3 小鼠血清中INF-γ分泌水平检测
  • 3 讨 论
  • 4 结 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 周怡,王柏林,杨美,何玲,覃岚,岳筠,张双翔,周碧君,王开功,程振涛

    关键词: 绵羊肺炎支原体,融合质粒,细胞因子

    来源: 中国畜牧兽医 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 贵州大学动物科学学院,贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室,贵州省动物疫病预防控制中心

    基金: 国家自然科学基金项目(31660723),贵州省科技计划项目(黔科合基础[2019]1181号),贵州省研究生教育创新计划项目(GZZ2017002)

    分类号: S852.62

    DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.11.029

    页码: 3387-3395

    总页数: 9

    文件大小: 524K

    下载量: 184

    相关论文文献

    • [1].口蹄疫病毒2B基因绿色荧光蛋白融合表达质粒的构建及表达[J]. 中国生物制品学杂志 2008(09)
    • [2].肌肉生成抑制素和抑制素融合表达质粒的构建及其表达[J]. 农业生物技术学报 2009(03)
    • [3].人白介素17信号途径真核融合表达质粒的构建及稳定共表达Hela细胞株的筛选[J]. 中国免疫学杂志 2011(11)
    • [4].RBD+ODC及其突变体融合表达质粒的构建和表达验证[J]. 肿瘤基础与临床 2016(04)
    • [5].HBV PreS1-EGFP融合表达质粒高效转化毕赤氏酵母的研究[J]. 现代生物医学进展 2009(18)
    • [6].单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响[J]. 中国病理生理杂志 2011(03)
    • [7].GM-CSF与SS融合表达质粒对小鼠肝脏组织GHR和IGF-1 mRNA表达的影响[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2013(02)
    • [8].家蚕吡哆醛激酶的融合表达与纯化[J]. 昆虫学报 2010(09)
    • [9].GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠肌肉组织GHR和IGF-I mRNA表达的影响[J]. 江西农业大学学报 2012(02)
    • [10].GST-G3BP Domain 1~5原核表达质粒的构建及其表达[J]. 天津医科大学学报 2008(01)
    • [11].脂肪储存小滴蛋白5基因的克隆与原核表达[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2009(04)
    • [12].酵母双杂交诱饵蛋白LASS1融合表达质粒的构建及鉴定[J]. 中国老年学杂志 2008(24)
    • [13].重组牛乳铁素融合蛋白的原核表达及其抑菌活性分析[J]. 食品科学 2010(19)
    • [14].GM-CSF与SS融合表达质粒对小鼠淋巴细胞增殖及GH和IGF-1分泌的影响[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2008(01)
    • [15].猪繁殖与呼吸综合征病毒重组质粒pEGFP-NSP9的构建与表达[J]. 中国兽医科学 2012(08)
    • [16].TRAIL胞外区编码基因的设计、人工合成及其表达[J]. 浙江工业大学学报 2011(01)
    • [17].犬表皮细胞生长因子的原核表达和纯化及其活性鉴定[J]. 中国兽医科学 2013(07)
    • [18].GM-CSF与生长抑素融合表达质粒对小鼠生长抑素抗体及IgG亚型的影响[J]. 中国兽医学报 2008(01)
    • [19].抑制素与羊GM-CSF基因融合表达质粒pCGMISI和pEGMISI的构建[J]. 畜牧与兽医 2008(09)
    • [20].HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及筛选有效siRNA的融合载体构建[J]. 生物技术 2008(03)
    • [21].靶向PRRSV 5′ UTR的shRNA体外抑制试验[J]. 中国兽医学报 2013(10)
    • [22].SET-EGFP重组表达质粒的构建及表达[J]. 中国热带医学 2008(05)
    • [23].猪生殖与呼吸综合征病毒宁夏分离株ORF5基因的克隆表达及其表达产物的活性分析[J]. 中国兽医科学 2009(09)
    • [24].中国仓鼠卵巢细胞中稳定表达发热伴血小板减少综合征病毒样颗粒新方法的研究[J]. 病毒学报 2015(03)
    • [25].人TRAIL胞外区原核可溶性表达及活性鉴定[J]. 河南大学学报(医学版) 2014(02)
    • [26].不同片段的NPM1-EGFP融合表达载体的构建和表达[J]. 山东医药 2012(12)
    • [27].重组氨基脲敏感型胺氧化酶在293T细胞中的定位及酶活性测定[J]. 癌变·畸变·突变 2017(04)
    • [28].HRB2慢病毒表达质粒的构建核蛋白细胞内定位的研究[J]. 现代生物医学进展 2009(09)
    • [29].薇甘菊几丁质酶基因的原核表达及活性分析[J]. 西北植物学报 2010(05)
    • [30].桃PGIP蛋白基因片段的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达[J]. 中国农业科学 2008(10)

    标签:;  ;  ;  

    绵羊肺炎支原体pcDNA3.1-TBP30-Hsp70融合表达质粒的构建及对小鼠细胞免疫应答的影响
    下载Doc文档

    猜你喜欢