张燕[1]2003年在《猕猴桃浓缩物抗氧化能力及免疫调节作用的实验研究》文中研究指明目的，猕猴桃浓缩物(以下简称浓缩物)是由猕猴桃果实加工而成的含有多种活性物质的浓缩物。本实验研究对猕猴桃浓缩物抗脂质过氧化损伤及免疫调节的作用与机理进行了探讨。 方法：1、抗氧化能力分析：将70只Wistar大鼠按性别、体重随机分成5组，对照组给予普通饲料，四个干预组分别给予5％、10％、15％和30％不同剂量的猕猴桃浓缩物添加饲料。实验时间为30天。实验结束后将大鼠安乐处死，收集血样和组织样本进行分析。①应用过氧化氢(H_2O_2)诱导DNA氧化损伤，采用单细胞凝胶电泳方法测定DNA氧化损伤的程度，观察浓缩物对DNA氧化损伤的影响。同时测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性和丙二醛(MDA)、脂褐质(LPO)的含量。②应用Fenton体系产生羟自由基，制备大鼠红细胞膜氧化损伤模型，采用荧光偏振法测定荧光偏振度、微粘度等膜脂流动性指标和生化方法测定红细胞膜丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性，观察浓缩物对生物膜氧化损伤的影响及抗自由基的活性功能。 2、免疫调节作用研究：将70只Kunming小鼠按性别、体重随机分成5组，对照组给予普通饲料，四个干预组分别给予5％、10％、15％和30％不同剂量的猕猴桃浓缩物添加饲料。实验时间为30天。实验结束后将小鼠安乐处死，收集血样和组织样本进行分析。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法培养小鼠脾淋巴细胞测定其脾淋巴细胞转化率，采用小鼠碳廓清试验方法测定吞噬细胞的吞噬活性和生化方法测定小鼠血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)的含量，观察浓缩物的免疫调节活性。 结果：1、抗氧化功能研究结果显示：相对于未摄入浓缩物的对照组，摄入浓缩物的剂量组大鼠血清中SOD活性增高，各组SOD值分别为对照组266.34NU／mL、5％剂量组287.53NU／mL、10％剂量组315.58NU／mL、15％剂量组324.38NU／mL、30％剂量组342.64NU／mL，其中以30％剂量组最为显着，可以将SOD活力提高28％。各剂量组的GSH-PX活性均有增高，其中15％剂量组(236.76酶活力单位)和30％剂量组(257.83酶活力单位)与对照组(225.26酶活力单位)相比具有显着性(P＜0.05)。与对照组相比，各剂量组(5％、10％、15％、30％)血清MDA含量分中文摘要别降低了25.2%、32.1%、35.4%、38名%，血清LPO含t分别降低了4.8%、7.8%、20%、49.6%，以15%和30%剂t组差别最具显着性(P<0 .01)。 淋巴细胞DNA氧化损伤情况:与对照组相比，30%剂t组的自发性损伤及在过氧化氢浓度为10腼。比、25腼。比时DNA损伤降低较明显(P<0 .05)，其余各组则无差别(P>0 .05)。过氧化氢浓度为5钩肚o比时10%、15%、30%剂t组DNA损伤程度明显降低(P<0 .01)，其中30%剂t组损伤最轻(AU== 197.00)，其余各组分别为5%AU=269.08，1理场AU== 220.15、15%AU== 210.62，对照组最重AU== 282.15。 与阴性对照组比较，未摄入浓缩物的阳性对照组经Fenton体系作用后红细胞膜MDA含量升高近3倍，SOD活性下降了41%，膜流动性下降45%，表明其受到氧化损伤。而摄入浓缩物的剂量组经Fenton体系作用后红细胞膜MDA明显比损伤组减少，各组MDA含量如下:对照组4.24lun。腼即mt、Fenton，s诱导的损伤组12.12nmollmgProt、5%剂量组8.36~阮gProt、1。%剂量组8.13~肠gprot、15%剂童组7.27 IUnol/m即rot、30%剂量组6.“nm。腼gProt，差别具有统计学意义.s0D活性大大增高，其中30%剂量组s0D活性为270.69NUI mgprot，与损伤组 (158.49NUlmgprot)相比差异显着(P<0.05)，而与对照组(269.98NUlmgprot)相比并无统计学差异。膜流动性也显着提高，而且15%和30%剂量组的膜流动性(P值分别为0.219和0.228)基本恢复到阴性对照组水平(P值为0.221)。 2、免疫调节作用研究结果显示:各组淋巴细胞转化率分别为对照组0.016、5%剂量组0.019、10%剂量组0.037、15%剂量组0.040、30%剂量组0.058，差异有统计学意义。和对照组相比，各剂量组吞噬细胞吞噬活性增强，校正吞噬指数分别为对照组3.48、5%剂量组4.35、10%剂量组4.49、15%剂量组5.30、30%剂量组5.56，吞噬活性分别增加了20Ok、29%、52%、60%。血清中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM的含量也有明显的提高，以30%剂量组最为明显，可分别将IgA、IgG、IgM的含量提高20%、34%、21%，差别具有显着统计学意义(P<0 .01)。 结论:1、浓缩物可以降低细胞膜和血清等组织成分的M[DA、LPO等脂质过氧化产物的生成，增强SOD、GSH一PX等抗氧化酶的活性，减少由过氧化氢引起的DNA氧化损伤的程度。表明浓缩物对经自由基引发的生物膜脂质过氧化以及对过氧化氢诱导的DNA氧化损伤均有良好的防护作用。 2、浓缩物可以增强淋巴细胞的转化率，增强吞噬细胞的吞噬活性，提高血清中免疫球蛋白的含量，表明浓缩物对机体的细胞免疫和体液免疫均有良好的调节作用，从而提高整个机体的免疫能力。
刘晓丽[2]2007年在《余甘子多酚的分离、鉴定与生理活性研究》文中研究说明余甘子(Phyllanthus emblica L.)是一种具有较高食用和药用价值的植物果实,含有多种对人体有益的活性物质,包括多酚类物质、生物碱、活性多糖、维生素、氨基酸以及微量元素。余甘子具有抗氧化、抗癌、抗突变、降血压、降血脂等保健作用,是一种极具潜力的食品资源。余甘子在我国栽培历史悠久、资源丰富。截止2002年,我国的野生及栽培余甘林面积达6万hm~2以上,产量达10万t。由于余甘子口感酸涩,作为食品原料加工适应性差,开发利用率很低,造成很大的资源浪费。因此,大宗野生余甘子资源的深度开发,对高效利用余甘子资源和促进山区经济发展具有重要意义。本课题首先对六个产地的野生余甘子进行筛选,测定其多酚类物质含量、水溶性多糖含量及各提取物的体外抗氧化活性,结果表明,惠州产地余甘子的多酚类物质含量及抗氧化活性相对较高,其总多酚含量为220.9mg/g,其多酚提取物清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的EC50值分别为11.2μg/mL、64.6μg/mL及12.1μg/mL,还原力达到0.5的提取物浓度为84.5μg/mL,与对照芦丁的抗氧化活性相近,是分离、提取天然抗氧化剂的优质原料,因此,选取惠州野生余甘子进行后续试验。以总多酚提取率和抗氧化活性为指标,通过单因素实验及响应面分析法,确定了对总多酚提取率和抗氧化活性影响显着的四个因素(浸提时间、浸提温度、pH和乙醇浓度),建立了该指标与四个因素间的数学模型,并得出余甘子多酚最佳提取工艺参数为:乙醇浓度为60%,浸提温度50℃,浸提时间3.9h,pH3.50。在此优化工艺下余甘子多酚提取率为217.9±0.9mg/g,还原力为1.203±0.013。采用有机溶剂分级、聚酰胺柱层析和制备HPLC等分离方法,以自由基清除活性作为检测指标,从余甘子多酚提取物中分离得到叁种化合物,利用紫外可见光扫描光谱、质谱和核磁共振波谱等方法分别鉴定为异鞣云实素、槲皮素和山奈酚。其中,异鞣云实素和山奈酚首次在余甘子果实中分离得到。采用体外实验方法,对余甘子中多酚化合物在DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基体系,亚油酸体系、鼠肝匀浆体系和血清脂蛋白体系的脂质过氧化反应和过渡金属离子螯合方面的抗氧化活性进行研究。结果表明,叁种化合物都有较强的自由基清除活性,其中异鞣云实素的自由基清除能力最强。各多酚化合物均可抑制Fe~(2+)引发的亚油酸过氧化和小鼠肝脂质过氧化反应,其中异鞣云实素的抑制能力最强。余甘子多酚化合物可以螯合Fe~(2+),抑制脂质过氧化能力与螯合Fe~(2+)能力一致。各多酚化合物均可抑制Cu~(2+)诱导的低密度脂蛋白(LDL)氧化,提示具有潜在的预防动脉粥样硬化的功能。通过紫外可见光谱分析,推断多酚化合物可以通过螯合Cu~(2+)抑制LDL氧化。对余甘子多酚提取物中促进免疫细胞增殖的活性成分进行了研究,采用硅胶柱层析和反相高效液相色谱柱分离,从正丁醇相得到化合物CI、CII和CIII,利用紫外可见光扫描光谱、质谱分析和核磁共振波谱等方法分别鉴定槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、老鹳草素和人参皂苷Rb1。人参皂苷Rb1为首次在余甘子果实中分离得到。通过体外抗氧化试验、免疫细胞增殖试验与大鼠动脉环收缩试验研究表明,叁种化合物都具有显着的自由基清除作用。老鹳草素在10~75μg/mL浓度范围内对ConA诱导的淋巴细胞增殖都有促进作用。人参皂苷Rb1在低浓度时对ConA诱导的淋巴细胞增殖有抑制作用,当浓度超过25μg/mL时表现出促增殖作用,继续升高浓度又呈抑制作用,表现出双向调节作用。槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷可以浓度依赖性的抑制ConA诱导的淋巴细胞增殖。叁种化合物在10~160μmol/L浓度范围内对离体大鼠胸主动脉环均具有浓度依赖性舒张作用,其中老鹳草素的血管舒张活性最强。
参考文献：
[1]. 猕猴桃浓缩物抗氧化能力及免疫调节作用的实验研究[D]. 张燕. 青岛大学. 2003
[2]. 余甘子多酚的分离、鉴定与生理活性研究[D]. 刘晓丽. 华南理工大学. 2007
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