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MarR家族转录因子HpaR和XC0449协同调控野油菜黄单胞菌致病性

2020-12-10阅读(707)

MarR家族转录因子HpaR和XC0449协同调控野油菜黄单胞菌致病性

论文摘要

MarR家族转录因子广泛存在于细菌及古生菌中,并灵活、精细地调控多种毒力、抗胁迫及抗生素相关的生理生化途径。在野油菜黄单胞菌中,MarR家族转录因子HpaR （XC2827）的失活会显著降低细菌对于寄主甘蓝的致病力,同时会导致胞外蛋白酶的过量表达。本研究进一步发现,Xcc 8004基因组一共编码9个MarR家族转录因子。表达并纯化其中的HpaR （XC2827）和XC0449,体外微量热泳动（MST）实验及Pull-down实验证明二者可以在体外特异性结合。同时,表型检测发现XC0449突变会导致细菌致病力显著下降。通过体外凝胶迁移阻滞试验（EMSA）、体内qRT-PCR和GUS检测证明,XC0449和HpaR均作为转录激活子协同调控下游致病相关基因XC0705的表达,最终调控细菌毒力及胞外酶合成。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 实验菌株
  •     1.1.2 质粒载体
  •     1.1.3 常用分子生物学试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 分子生物学基本操作
  •     1.2.2 细菌的培养条件
  •     1.2.3 读框内删除突变体以及双突菌株的构建
  •     1.2.4 植物致病力、胞外酶表型分析
  •     1.2.5 总RNA制备、RT-PCR以及qRT-PCR
  •     1.2.6 GUS转录融合构建及酶活性测定实验
  •     1.2.7 蛋白的原核表达及纯化
  •     1.2.8 Western blotting
  •     1.2.9 体外Pull-down实验
  •     1.2.1 0 凝胶迁移阻滞试验 （EMSA）
  •     1.2.1 1 微量热涌动实验 （MST）
  • 2 结果与分析
  •   2.1 野油菜黄单胞菌Xcc 8004编码9个MarR家族转录因子
  •   2.2 MarR家族转录因子的表达与纯化
  •   2.3 在体外XC0449与HpaR特异性结合
  •   2.4 XC0449调控Xcc致病力
  •   2.5 XC0449协同HpaR调控下游基因的表达
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李雅君,李爱宁,孟繁凡,张宏宇,钱韦,贺伟,邓超颖

    关键词: 转录调控,家族转录因子,野油菜黄单胞菌,致病性

    来源: 生物工程学报 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

    单位: 北京林业大学林学院,中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(Nos.31600062,31400545,31370127)资助~~

    分类号: S432.42

    DOI: 10.13345/j.cjb.190057

    页码: 1500-1510

    总页数: 11

    文件大小: 1855K

    下载量: 139

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