周和平[1]2004年在《真核表达载体pcDNA3.0-Cx43的构建及其在MSC中的表达》文中指出由于坏死或者凋亡而导致的功能性心肌细胞的减少是急性心肌梗塞及心脏衰竭的一个共同特征。但成体心肌细胞自身的再生能力相当弱，因此采用心肌细胞移植术以代替不可逆性心肌细胞的丢失有望成为受损的心肌再生修复的另一种有效途径。目前为止，用于心肌细胞替代治疗的种子细胞种类较多，包括胎儿心肌细胞，成肌细胞，胚胎性和成体干细胞；自体骨髓间充质干细胞所具有的多能分化特性以及易获取、无需免疫抑制治疗等优点而为心肌细胞再生的研究提供了新策略。移植细胞要发挥功能必须能与周围正常心肌细胞在解剖结构上发生整合以达到同步收缩。间隙连接是心肌细胞间沟通的主要结构，在心室肌中connexin43为主要的连接蛋白，在细胞间通讯过程中发挥重要作用。 本研究通过构建携带间隙连接蛋白connexin43 cDNA的真核表达载体，转染骨髓基质干细胞，观察间隙连接蛋白connexin43在骨髓基质干细胞中的过量表达。 方法：1)目的基因connexin43 cDNA在大肠杆菌中扩增后连入真核表达载体pcDNA3.0，构建载体pcDNA3.0-Cx43；2)体外分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，观察其生物学特性；3)脂质体体外转染骨髓间充 第四军医大学硕士学位论文质干细胞，用G418筛选得到conn。山143基因高表达的细胞，用免疫细胞化学、W助temBI。忱恤g检测目的基因的表达。 结果:酶切电泳结果显示按设计构建的载体体DNA3.0一cx43，经以18筛选得到抗以18的骨髓基质干细胞，免疫细胞化学、w’eS tel刀Bl。伪恤g显示有conne劝叫3蛋白的表达。 结论:1、户留叨U液密度梯度离心法是一种简便、有效分离Mscs的方法。2、正确构建了pcDNA3 .0一Cx43真核表达载体。3、叨nne劝D43蛋白可以在骨翻基质干细胞中表达。
周和平, 蔡振杰, 俞世强, 赵科研, 吴铁军[2]2004年在《真核表达载体pcDNA3.0-Cx43的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达》文中进行了进一步梳理目的 :构建携带间隙连接蛋白connexin 4 3(Cx 4 3)cDNA的真核表达载体 ,转染骨髓基质干细胞 ,观察间隙连接蛋白Cx 4 3在骨髓基质干细胞中的过量表达 .方法 :目的基因Cx 4 3cDNA在大肠杆菌中扩增后连入真核表达载体pcD NA3.0 ,转染大鼠骨髓基质干细胞 ,用G4 1 8筛选得到Cx 4 3基因高表达的细胞 ;对照组为pcDNA3.0直接转染骨髓基质干细胞 .结果 :酶切电泳结果显示按设计构建的载体pcDNA3.0 Cx4 3,经G4 1 8筛选得到不同抗性的骨髓基质干细胞 ,免疫细胞化学显示有Cx 4 3蛋白的表达 .结论 :Cx 4 3可以在骨髓基质干细胞中表达 .
参考文献：
[1]. 真核表达载体pcDNA3.0-Cx43的构建及其在MSC中的表达[D]. 周和平. 第四军医大学. 2004
[2]. 真核表达载体pcDNA3.0-Cx43的构建及其在骨髓基质干细胞中的表达[J]. 周和平, 蔡振杰, 俞世强, 赵科研, 吴铁军. 第四军医大学学报. 2004