口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

口蹄疫病毒3C蛋白多克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

扩增口蹄疫病毒(FMDV) 3C蛋白编码基因,将其克隆到原核表达载体,并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达; 3C重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,通过ELISA和Western blot检测多克隆抗体的效价和特异性,并将该抗体通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot应用于3C的检测。ELISA结果显示,制备的3C蛋白多克隆抗体效价达1∶256 000; IFA结果显示,该抗体能够检测到3C蛋白在细胞中的定位; Western blot结果显示,该多克隆抗体能够检测到在细胞中过表达的3C蛋白。本研究制备的FMDV 3C蛋白多克隆抗体为FMDV及其3C蛋白的相关研究提供了重要的物质基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 引物设计与合成
  •   1.3 3C基因的扩增及纯化
  •   1.4 重组质粒的构建及鉴定
  •   1.5 重组蛋白的诱导表达及纯化
  •   1.6 重组蛋白免疫
  •   1.7 抗体效价测定
  •   1.8 Western blot检测多克隆抗体与蛋白的反应性
  •   1.9 3C蛋白多克隆抗体应用于3C蛋白细胞定位的检测
  •   1.1 0 3C蛋白多克隆抗体应用于3C蛋白的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 FMDV 3C基因PCR扩增
  •   2.2 重组质粒p ET-28a-3C的鉴定
  •   2.3 重组蛋白的诱导表达及Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化
  •   2.4 3C重组蛋白的超滤及浓缩
  •   2.5 3C蛋白多克隆抗体特异性检测
  •     2.5.1 3C蛋白多克隆抗体效价测定
  •     2.5.2 3C蛋白多克隆抗体与3C重组蛋白反应性检测
  •   2.6 多克隆抗体的应用
  •     2.6.1 多克隆抗体检测3C蛋白在细胞中的定位
  •     2.6.2 多克隆抗体检测细胞中表达的3C蛋白
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈飞,吴香菊,齐静,成子强,杜以军

    关键词: 蛋白,原核表达,蛋白纯化,多克隆抗体

    来源: 畜牧与兽医 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 山东农业大学动物科技学院,山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东省农业科学院畜牧兽医研究所

    基金: 国家重点研发计划课题(2016YFD0501505),泰山学者青年专家(tsqn20161057),山东省农业科学院农业科技创新工程(CXGC2016C07)

    分类号: S852.65

    页码: 71-75

    总页数: 5

    文件大小: 831K

    下载量: 164

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