人乳头瘤病毒18型L1抗原的肽图特征峰分析

论文摘要

目的:比较分析不同氨基酸序列人乳头瘤病毒（HPV）18型L1抗原的肽图,收集差异特征峰肽段,利用质谱方法对其进行鉴别。方法:将HPV18型L1抗原用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过RP-HPLC法分离肽段,得到HPV18型L1抗原肽图;用Megalign软件比较不同来源的L1抗原的氨基酸序列差异,分析不同HPV18型L1抗原的肽图特征峰,收集差异特征峰;HPLC色谱条件:采用C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以0.1%三氟乙酸-水为流动相A,0.1%三氟乙酸-乙腈为流动相B,梯度洗脱（0～10 min,100%A;10～80 min,100%A→30%A;80～91 min,30%A→100%A）,流速1.0mL·min-1,柱温30℃,检测波长214 nm,进样量100μL。再运用UPLC-MS/MS技术,采用电喷雾离子源（ESI）,正离子全扫描检测模式,喷雾电压2 kV,毛细管温度300℃,对差异特征峰进行鉴别。结果:5个公司生产的L1抗原平行6次重复检测,各共有峰保留时间的RSD最大值范围为0.24%～0.49%,表明肽图分析方法重复性良好。对5个公司的3批次抗原进行检测,主要峰保留时间的最大RSD范围为0.20%～0.74%,表明批间一致性良好。比较发现5个不同公司生产的HPV疫苗18型L1抗原的液相肽图有6个差异特征峰（1～6号）,分别对其进行质谱鉴定,结合氨基酸序列的比对分析,发现5个特征峰由氨基酸差异引起:487～496位氨基酸的缺失将导致1号特征峰的缺失;88位氨基酸N和T的相互转变导致2、3号特征峰相互转变;494位氨基酸S和A的相互转变导致1、4号特征峰相互转变;5号特征峰为4号特征峰胰蛋白酶酶切不完全出现的;6号峰为非特异峰。表明不同公司生产的HPV18型L1抗原具有各自的特征峰。结论:本研究建立的HPLC-MS/MS肽图特征峰分析方法,可应用于不同企业生产的18型的HPV L1抗原的鉴别和质量控制,进一步表明了肽图在疫苗原液质量控制中的重要意义。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 柳军凯,贺鹏飞,赖燕华,刘欢,宁婷婷,聂建辉,黄维金,王佑春

关键词: 人乳头瘤病毒,肽图,抗原,疫苗,液相色谱质谱联用,特征峰,鉴别

来源: 药物分析杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 化学,妇产科学,肿瘤学

单位: 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室

基金: 国家科技重大专项“重大新药创制课题”(创新生物技术药评价及标准化关键技术研究2018ZX09101001)

分类号: R737.33;O657.63

DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.10.12

页码: 1836-1843

总页数: 8

文件大小: 1699K

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