丁酸梭菌对产肠毒素大肠杆菌刺激猪肠道上皮细胞炎症反应的抑制效果

丁酸梭菌对产肠毒素大肠杆菌刺激猪肠道上皮细胞炎症反应的抑制效果

论文摘要

本试验旨在通过丁酸梭菌(CB)、产肠毒素大肠杆菌(ETEC)和猪肠道上皮细胞(IPEC-J2细胞)共培养细胞模型,探讨CB对ETEC产黏附基因、产肠毒素基因以及ETEC刺激IPEC-J2细胞炎症相关因子表达的影响。试验设5组,分别为对照组、ETEC组、ETEC+CB 106组、ETEC+CB 107组、ETEC+CB 108组。ETEC组在IPEC-J2细胞培养液中加入1×108CFU/mL的ETEC,ETEC+CB 106组、ETEC+CB 107组、ETEC+CB 108组在IPEC-J2细胞培养液中加入1×108CFU/mL ETEC的同时分别加入1×106、1×107和1×108CFU/mL CB,对照组IPEC-J2细胞培养液中不添加ETEC和CB,37℃培养2 h后用显微镜观察细胞形态并收集细胞。采用实时定量PCR分析ETEC产黏附基因FaeG与肠毒素基因estA、estB及IPEC-J2细胞中促炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-8与抗炎性因子IL-10 mRNA的相对表达水平。结果显示:CB可有效抑制ETEC诱导的IPEC-J2细胞损伤脱落。与ETEC组对比,不同浓度CB干预后显著抑制了ETEC产黏附基因FaeG与肠毒素基因estA、estB的表达(P<0.05),且CB浓度为1×108CFU/mL时效果最明显。与对照组相比,ETEC组IPEC-J2细胞中促炎性因子IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8 mRNA的相对表达水平显著升高(P<0.05),抗炎性因子IL-10 mRNA的相对表达水平显著降低(P<0.05)。而添加不同浓度CB干预后,IPEC-J2细胞中IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8 mRNA的相对表达水平较ETEC组显著降低(P<0.05),IL-10 mRNA的相对表达水平则较ETEC组显著升高(P<0.05),其中CB浓度为1×108CFU/mL时对IL-1β、IL-6和IL-8表达的抑制效果最强,浓度为1×107CFU/mL时对IL-2表达的抑制效果最强。以上结果表明,CB可降低ETEC黏附基因和产肠毒素基因表达,抑制ETEC诱导的猪肠道上皮细胞的炎症反应,降低ETEC对猪肠道上皮细胞的损伤作用。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 细胞与细菌培养
  •   1.3 试验处理和样品收集
  •   1.4 RNA提取和逆转录
  •   1.5 基因引物设计与实时荧光定量PCR
  •   1.6 数据分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 不同浓度丁酸梭菌对ETEC刺激IPEC-J2细胞形态的影响
  •   2.2 不同浓度丁酸梭菌对ETEC黏附基因FaeG表达的影响
  •   2.3 不同浓度丁酸梭菌对ETEC产肠毒素基因estA、estB表达的影响
  •   2.4 不同浓度丁酸梭菌对ETEC刺激IPEC-J2细胞中促炎性因子IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8表达的影响
  •   2.5 不同浓度丁酸梭菌对ETEC刺激IPEC-J2细胞中抗炎性因子IL-10表达的影响
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨华,施杏芬,桂国弘,吕文涛,李娜,肖英平

    关键词: 丁酸梭菌,产肠毒素大肠杆菌,猪肠道上皮细胞,炎症反应

    来源: 动物营养学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 畜牧与动物医学

    单位: 浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,浙江省兽药饲料监察所

    基金: 国家自然科学基金项目(31402083),金华市科学技术局农业类重点项目(2016-2-001)

    分类号: S858.28

    页码: 5688-5695

    总页数: 8

    文件大小: 1689K

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