导读:本文包含了配体杂交论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:受体,酵母,诱饵,蛋白,激素,文库,载体。
配体杂交论文文献综述
徐连应,彭海霞,邵玉宇,王毕妮,张富新[1]（2018）在《以亚甲基蓝为杂交指示剂的电化学适配体鼠伤寒沙门氏菌传感技术》一文中研究指出【目的】构建一种更具实用性的可定量检测鼠伤寒沙门氏菌的新型电化学适配体传感器,克服传统沙门氏菌检测方法在时效性、灵敏度和操作简便性等方面的不足。【方法】将反应制得的氧化石墨烯(GO)滴涂在玻碳电极(GCE)表面,于PBS缓冲液中采用电化学还原法将其还原为还原氧化石墨烯(r GO),随后放置电极于氯金酸溶液中进行电沉积,于表面修饰一层纳米金(Au NPs)。依靠金硫键的作用将鼠伤寒沙门氏菌适配体互补链(S)固定在电极上,滴加封闭剂巯基己醇(MCH)占据电极表面空余位点,保证电极无非特异性吸附后,再将鼠伤寒沙门氏菌适配体(Apt)滴涂于电极表面,使S与Apt杂交形成DNA双链结构。将电极于37℃下同鼠伤寒沙门氏菌与核酸外切酶I(Exo I)的混合液孵育,依靠鼠伤寒沙门氏菌与Apt高度特异性结合,将Apt从电极表面带离,再基于Exo I对单链DNA的剪切作用,使鼠伤寒沙门氏菌得以循环重复作用于适配体,再将电极浸入亚甲基蓝(MB)溶液一段时间后,通过监测电极表面的电信号,并对其在菌液中的孵育时间及Exo I的浓度进行优化,构建检测鼠伤寒沙门氏菌的新型电化学适配体传感器。使用构建的传感器对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、单增李斯特菌以及副溶血弧菌进行检测,以确定该传感器的特异性;对2×102—2×107 cfu/m L的鼠伤寒沙门氏菌进行检测,以确定该传感器的敏感性;对猪肉样品进行鼠伤寒沙门氏菌的定量检测,以确定该传感器的实用性。【结果】所构建的鼠伤寒沙门氏菌电化学适配体传感器在菌液中的最适孵育时间为40 min,Exo I的最适浓度为0.8 U·μL-1。特异性试验结果表明,该传感器仅在鼠伤寒沙门氏菌存在时有电信号响应,而对非目标菌无响应。敏感性试验结果表明,该传感器具有很高的敏感性,对鼠伤寒沙门氏菌的敏感性可达67 cfu/m L。使用构建的鼠伤寒沙门氏菌电化学适配体传感器对猪肉中的鼠伤寒沙门氏菌进行定量检测,加标回收率在97.3%—106.7%。【结论】所构建的新型鼠伤寒沙门氏菌电化学适配体传感器具备灵敏度高、特异性强、易于操作、检测迅速及成本低廉等优点,有望应用于食品工业中鼠伤寒沙门氏菌的现场快速定量检测。(本文来源于《中国农业科学》期刊2018年06期）
田敏[2]（2014）在《酵母双杂交技术筛选CT813配体的研究》一文中研究指出沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis, CT）是一类严格活细胞内生长，具有独特二相发育周期的原核微生物，发育周期即原体→始体→原体，原体代谢能力弱但感染性强，始体代谢能力强但没感染性。沙眼衣原体主要引起沙眼疾病，是全球致盲的首要病因；可通过性传播途径，引起人类泌尿生殖道感染；也可侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿，严重危害人类健康。CT的生物合成和装配是包涵体内进行的，包涵体不仅为沙眼衣原体复制提供微环境，而且保护CT免遭宿主免疫系统的识别和清除。另外包涵体膜是CT从宿主细胞中摄取营养和代谢的中间产物以及信号变换的必经之路。包涵体膜的主要组成成分是由CT基因编码、表达于包涵体膜上的蛋白质即包涵体膜蛋白。自从Rochey等【1995年】用实验首次证实衣原体通过转位其自身基因编码的蛋白到包涵体膜上以来，不断有新的包涵体膜蛋白被鉴定出来。根据已经鉴定的膜蛋白的疏水性特性，计算机辅助程序预测出36个CT基因编码的蛋白为候选包涵体膜蛋白。CT813是被预测并经过证实的包涵体膜蛋白之一，但对CT813的具体生物学功能尚不清楚，为此我们用酵母双杂交技术寻找与CT813相互作用的蛋白，以期为进一步深入研究CT813的生物学特性及阐述沙眼衣原体的致病机制提供重要信息。首先，根据STD基因库（www.stdgen. lanl. gov）提供信息设计引物，用PCR法从沙眼衣原体的D型菌株中获取目的基因片段CT813，用限制性内切酶Sma I和Pst I酶切处理CT813和pGBKT7质粒，经T4连接酶连接，转入感受态细胞E.coli, BL-21中培养。用菌落PCR、Sma I/Pst I双酶切验证后，对确认的阳性质粒进行测序，使用BLAST软件比对分析。将构建成功的诱饵质粒转入酵母菌株AH109和Y187中，经检证无自激活和细胞毒性作用。以pGBKT7-CT813作为诱饵质粒与HeLa细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库进行酵母双杂交实验。待叁叶草（或米奇）形状合子形成后，涂布于缺腺嘌呤、组氨酸、亮氨酸、色氨酸缺陷型培养基并铺有X-Gal（SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-Gal）的平板上初筛，经过3次筛选收集阳性菌落。把阳性菌液点种在滤纸上，在液氮中反复冻融3次，然后浸泡在Z缓冲液-β巯基乙醇-X-Gal混合液中室温温育8h。筛选出的阳性菌液进行PCR验证。将克隆阳性的菌液提取质粒进行回交实验验证。对阳性质粒进行碱基序列测定，经BLAST比对检测其同源蛋白，确定筛选基因。经过检索比对得出与pGBKT7-CT813特异性相互作用的蛋白有：半乳糖凝集素-1（LGALS1）、环腺苷酸应答原件结合蛋白3（CREB3）、核糖体核糖体蛋白L10a（RPL10a）、微管蛋白37E-16（RP1-37E16）。(本文来源于《河北北方学院》期刊2014-03-01）
田颖新[3]（2013）在《酵母双杂交技术筛选Cpn0147和Cpn0308配体的研究》一文中研究指出肺炎衣原体(Chlamydiapneumonia, Cpn)是一类严格的细胞内生长并具有独特的二相发育周期的病原微生物,主要引起呼吸道和肺部感染,并与心脑血管疾病的发生、发展密切相关。现有研究显示部分衣原体基因编码的分泌性蛋白以及包涵体膜蛋白(inclusion protein, Inc)在衣原体的一系列生命活动过程中扮演重要角色,其中Cpn0147与Cpn0308为已发现的衣原体包涵体膜蛋白,但其对衣原体生长发育的影响及与宿主细胞的相互作用机制尚不清楚。为此本研究构建了HeLa细胞的酵母GAL4AD融合的cDNA文库,应用酵母双杂交技术寻找Cpn0147, Cpn0308的配体蛋白,为进一步探讨Cpn0147, Cpn0308的特性和可能的生物学作用提供了前瞻性研究。首先,采用Trizol法从HeLa提取总的RNA,应用SMARTTM技术,以CDSⅢ、SMARTⅢ为引物,同时加入MMLV反转录酶合成cDNA第一链,在经LD-PCR合成双链cDNA后用CHROMA SPINTM+TE-400柱纯化双链cDNA,去除200bp以下的片段；将制备好的ds cDNA与pGAD T7-Rec、Herring Tests Carrier DNA(已变性)转化到酵母Y187感受态细胞中进行同源重组,在SD/-Leu/Amp+平板上培养4d后,用冷冻培养基收集菌体,做菌落PCR检测文库多态性；经琼脂糖凝胶电泳结果显示,PCR产物大小在0.3～3kb之间,显示文库具有良好的多态性。然后从Cpn菌株AR39基因组中PCR扩增特异性片段Cpn0147, Cpn0308,经限制性内切酶EcoRⅠ和BamH Ⅰ双酶切后克隆到诱饵载体pGBKT7中；经菌落PCR、EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ双酶切初步验证后,以pGBKT7载体上的T7引物作为测序引物进行碱基序列测定,测序结果经BLAST分析证实为Cpn0147, Cpn0308,将构建成功的诱饵质粒同时转化酵母菌株AH109和Y187,经检测无自激活和细胞毒性作用。最后分别将诱饵基因pGBKT7-Cpn0147, pGBKT7-Cpn0308与HeLa细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库进行酵母双杂交；用p-半乳糖苷酶印膜法、质粒PCR进行筛选,并通过回交实验进行验证；对阳性质粒进行碱基序列测定,经BLASK比对检测其同源蛋白,确定筛选基因。结果显示,Cpn0147、Cpn0308与HeLa细胞cDNA文库中多个基因的编码产物发生了相互作用,其中CpnO147杂交结果包括脂肪酰辅酶A结合蛋白(ACBD3)、环腺苷酸应答原件结合蛋白3(CREB3)、低密度脂受体相关蛋白11(LRP11)、离子通道相关蛋白(FXYD5)、真核翻译延长因子1D(EEF1D)。Cpn0308杂交结果为脂肪酰辅酶A结合蛋白(ACBD3)。利用酵母双杂交的方法初步成功筛选出与Cpn0147, Cpn0308相互作用的配体基因,为进一步研究其生物学功能打下了基础。(本文来源于《河北北方学院》期刊2013-05-01）
欧阳峰[4]（2006）在《小分子配体酵母叁杂交系统的建立》一文中研究指出苦参碱能抑制白血病K562细胞的增殖[1],但其作用的分子机制仍未明了,尤其是它的细胞内作用靶点。本课题拟构建小分子配体酵母叁杂交系统以直接在活细胞内筛选与苦参碱有相互作用的靶蛋白。该研究课题主要分为叁个部分:①运用RT-PCR技术扩增糖皮质激素受体结合域片段(GR);②pGBKT7-GR重组载体的构建、转化与表达;③human erythroleukemia MATCHMAKER cDNA library质粒的准备与小分子配体对酵母细胞生长与交配的影响。成功扩增糖皮质激素受体的结合域片段并构建重组质粒pGBKT7-GR,克隆的片段经测序证实与人体糖皮质激素cDNA序列一致,重组质粒pGBKT7-GR对酵母细胞无自激活和毒性作用。在培养基中加入地塞米松-苦参碱杂合的小分子配体对酵母细胞生长和交配无影响。对人白血病MATCHMAKER cDNA文库细胞培养后抽提质粒并用酶切检测cDNA的多样性。经进一步鉴定后该系统可用于苦参碱作用靶点的活细胞筛选。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2006-05-01）
李淑蓉,粟永萍,程天民[5]（2002）在《糖皮质激素受体配体结合区的克隆及酵母双杂交诱饵载体的构建和表达》一文中研究指出目的 用糖皮质激素受体配体结合区 (GR LBD)片段构建酵母双杂合系统中的诱饵载体。方法 根据GenBankGR LBD序列设计引物 ,以人胎肝cDNA文库为模板 ,PCR扩增GR LBD片段 ,该片段与pGEM TVectorSystems连接 ,SmaⅠ SalⅠ双酶切鉴定。回收相应连接片段 ,与酵母表达载体pGBKT7连接 ,重组质粒命名为pGBKT7 GRLBD ,送大连宝生物公司测序。用醋酸锂法转化酶母菌AH10 9,在选择性培养基上观察pGBKT7 GRLBD在AH10 9中的表达情况 ,酵母双杂交检测GR与已知阳性蛋白SRC 1的结合 ,鉴定转化酵母株表型及表达。结果 PCR扩增出的DNA片段约 893bp ,大小正确 ,并成功连接到T 载体 ,释放出所需片段893bp。构建与Gal4 BD融合表达载体pGBKT7 GRLBD ,测序结果表明序列完全正确 ,融合区域的读码框正确。pGBKT7 GRLBD转化感受态AH10 9,在SD Trp板上生长良好 ,AH10 9[pGBKT7 GRLBD]与Y187[pTD1 1]杂交后在SD Trp、 Leu、 Trp Leu板上生长而不能在 His Leu Trp、 Ade His Leu Trp板上生长 ,说明AH10 9[pGBKT7 GRLBD]转化成功但并未自主激活报告基因 ,酵母双杂交测定GRLBD与SRC 1有结合作用。结论 获得了在酵母细胞中正确表达且未自主激活报告基因的融合表达载体pGBKT7-GRLBD ,可作为酵母双杂合系统中的“诱饵”。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2002年12期）
马骊,张智清,曾革非,周小明,陈爱君[6]（2000）在《利用酵母双杂交系统研究人血管内皮生长因子受体Flt-1的配体结合域》一文中研究指出The vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor Flt-1 is charaterized by seven Ig-like loops within the extracellular domain. To identify which part is responsible for ligand binding, four cDNA clones coding for truncated Flt-1 mutants consisting of loop 1, 1-2, 2-3 and 1-3 were obtained by PCR from human cardiac cDNA library and inserted into the vectors of the yeast two-hybrid system, with VEGF cDNA on the partner plasmid. The paired plasmids were transformed into yeast strain SFY526, and tested by filter membrane method and β-galactosidase activity. The results showed that Flt-1(1-2)、Flt-1(2-3) and Flt-1(1-3) all were able to bind VEGF, of which Flt-1(1-3) showed the highest binding affinity, but no binding of VEGF was observed with Flt-1(2) and VEGF.(本文来源于《病毒学报》期刊2000年02期）
张树民,缪时英,王琳芳[7]（1999）在《应用酵母双杂交法对人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区作用配体的筛选》一文中研究指出ＹＷＫⅡ蛋白质是本实验室发现的一种具有单一跨膜结构的精子膜蛋白，由胞外区、疏水的穿膜区和胞内区组成。其ｃＤＮＡ序列全长３６５７ｂｐ，命名为ＨＳＤ２，开放阅读框（ＯＲＦ）长２２８９ｂｐ，编码７６３个氨基酸。实验证明，胞外区部分结构具有较强的抗生育作用，(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊1999年04期）
张树民[8]（1999）在《应用酵母双杂交体系筛选人精子膜蛋白YWK-Ⅱ蛋白胞外区的作用配体》一文中研究指出精子膜蛋白在精子发生和精卵相互作用过程中起着重要的作用。YWK-Ⅱ蛋白是本实验室筛选出的一种具有单一跨膜结构的精子膜蛋白，其cDNA开放阅读框架(ORF)为2289bp，编码763个氨基酸。已知它的胞外区具有明显的抗生育作用，而胞内区能与G_o蛋白特异结合。据此推测，YWK-Ⅱ蛋白有可能作为精子细胞表面G蛋白偶联受体参与调节人类的生育活动。因此，寻找YWK-Ⅱ蛋白胞外区的作用配体，不仅有利于我们揭示其抗生育作用的机制，而且还可能为精子发生和／或受精的研究提供新的线索。 我们选择了YWK-Ⅱ蛋白胞外近膜端226个AA(与APP同源性较低区段)作为“诱饵”蛋白，利用酵母双杂交系统从睾丸文库和卵巢文库中筛选能与YWK-Ⅱ蛋白胞外段相互作用的配体。结果发现睾丸组织中的human diaphanous protein 1(HDIA1)以及卵巢组织中的穆勒氏抑制物(Mullerian inhibiting substance，MIS)和human HLA-B associated transcripts 3(BAT3)可能是与YWK-Ⅱ蛋白胞外区结合的配体。此外，我们还发现，“诱饵”蛋白中段的63个AA是YWK-Ⅱ蛋白胞外区与上述配体相互作用的活性部位，它与叁种配体之间的作用要远远强于整段“诱饵”蛋白(226AA)。而此63AA羧基端的35个AA却不能在体内与HDIA1结合。35AA与BAT3和MIS的相互作用强于整段”诱饵”蛋白(226AA)，但弱于63AA。 HDIA1是Rho分子(小G蛋白家族成员之一)的作用靶蛋白，已知其对精原和精子细胞的形态改变，粘附发生及胞质分裂等功能活动有影响。而MIS是睾丸Sertoli细胞和卵巢的卵丘颗粒细胞分泌的一种140Kd同源二聚体糖蛋白。除了在男(雄)性的性别发育中起着关键性的作用以外，MIS对精子的运动能力及存活率都有正性影响(本文来源于《中国协和医科大学》期刊1999-05-01）
配体杂交论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis, CT）是一类严格活细胞内生长，具有独特二相发育周期的原核微生物，发育周期即原体→始体→原体，原体代谢能力弱但感染性强，始体代谢能力强但没感染性。沙眼衣原体主要引起沙眼疾病，是全球致盲的首要病因；可通过性传播途径，引起人类泌尿生殖道感染；也可侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿，严重危害人类健康。CT的生物合成和装配是包涵体内进行的，包涵体不仅为沙眼衣原体复制提供微环境，而且保护CT免遭宿主免疫系统的识别和清除。另外包涵体膜是CT从宿主细胞中摄取营养和代谢的中间产物以及信号变换的必经之路。包涵体膜的主要组成成分是由CT基因编码、表达于包涵体膜上的蛋白质即包涵体膜蛋白。自从Rochey等【1995年】用实验首次证实衣原体通过转位其自身基因编码的蛋白到包涵体膜上以来，不断有新的包涵体膜蛋白被鉴定出来。根据已经鉴定的膜蛋白的疏水性特性，计算机辅助程序预测出36个CT基因编码的蛋白为候选包涵体膜蛋白。CT813是被预测并经过证实的包涵体膜蛋白之一，但对CT813的具体生物学功能尚不清楚，为此我们用酵母双杂交技术寻找与CT813相互作用的蛋白，以期为进一步深入研究CT813的生物学特性及阐述沙眼衣原体的致病机制提供重要信息。首先，根据STD基因库（www.stdgen. lanl. gov）提供信息设计引物，用PCR法从沙眼衣原体的D型菌株中获取目的基因片段CT813，用限制性内切酶Sma I和Pst I酶切处理CT813和pGBKT7质粒，经T4连接酶连接，转入感受态细胞E.coli, BL-21中培养。用菌落PCR、Sma I/Pst I双酶切验证后，对确认的阳性质粒进行测序，使用BLAST软件比对分析。将构建成功的诱饵质粒转入酵母菌株AH109和Y187中，经检证无自激活和细胞毒性作用。以pGBKT7-CT813作为诱饵质粒与HeLa细胞酵母GAL4AD融合cDNA文库进行酵母双杂交实验。待叁叶草（或米奇）形状合子形成后，涂布于缺腺嘌呤、组氨酸、亮氨酸、色氨酸缺陷型培养基并铺有X-Gal（SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-Gal）的平板上初筛，经过3次筛选收集阳性菌落。把阳性菌液点种在滤纸上，在液氮中反复冻融3次，然后浸泡在Z缓冲液-β巯基乙醇-X-Gal混合液中室温温育8h。筛选出的阳性菌液进行PCR验证。将克隆阳性的菌液提取质粒进行回交实验验证。对阳性质粒进行碱基序列测定，经BLAST比对检测其同源蛋白，确定筛选基因。经过检索比对得出与pGBKT7-CT813特异性相互作用的蛋白有：半乳糖凝集素-1（LGALS1）、环腺苷酸应答原件结合蛋白3（CREB3）、核糖体核糖体蛋白L10a（RPL10a）、微管蛋白37E-16（RP1-37E16）。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
配体杂交论文参考文献
[1].徐连应,彭海霞,邵玉宇,王毕妮,张富新.以亚甲基蓝为杂交指示剂的电化学适配体鼠伤寒沙门氏菌传感技术[J].中国农业科学.2018
[2].田敏.酵母双杂交技术筛选CT813配体的研究[D].河北北方学院.2014
[3].田颖新.酵母双杂交技术筛选Cpn0147和Cpn0308配体的研究[D].河北北方学院.2013
[4].欧阳峰.小分子配体酵母叁杂交系统的建立[D].重庆医科大学.2006
[5].李淑蓉,粟永萍,程天民.糖皮质激素受体配体结合区的克隆及酵母双杂交诱饵载体的构建和表达[J].第叁军医大学学报.2002
[6].马骊,张智清,曾革非,周小明,陈爱君.利用酵母双杂交系统研究人血管内皮生长因子受体Flt-1的配体结合域[J].病毒学报.2000
[7].张树民,缪时英,王琳芳.应用酵母双杂交法对人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区作用配体的筛选[J].中国医学科学院学报.1999
[8].张树民.应用酵母双杂交体系筛选人精子膜蛋白YWK-Ⅱ蛋白胞外区的作用配体[D].中国协和医科大学.1999
论文知识图
