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A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备

2020-12-01阅读(267)

A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备

论文摘要

本研究旨在表达A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a（+）中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 病毒、细胞、菌株和质粒
  •     1.1.2 试验动物
  •     1.1.3 主要试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物设计与合成
  •     1.2.2 SVAVP2基因扩增
  •     1.2.3 重组表达质粒的构建及鉴定
  •     1.2.4重组SVA VP2蛋白的诱导表达及可溶性分析
  •     1.2.5 重组VP2蛋白的纯化
  •     1.2.6 重组VP2蛋白多克隆抗体的制备
  •     1.2.7 多克隆抗体的纯化与保存
  •     1.2.8 多克隆抗体效价测定
  •     1.2.9 多克隆抗体间接免疫荧光鉴定
  •     1.2.1 0 多克隆抗体的特异性试验
  • 2 结果
  •   2.1 重组表达质粒的构建与鉴定
  •   2.2 重组SVA VP2蛋白的诱导表达与可溶性分析
  •   2.3 重组SVA VP2蛋白的纯化
  •   2.4 多克隆抗体效价测定
  •   2.5 多克隆抗体的间接免疫荧光鉴定及特异性分析
  • 3 讨论
  • 4 结论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张永宁,张舟,诸明欣,梅琳,王彩霞,吴绍强,林祥梅

    关键词: 型塞内卡病毒,衣壳蛋白,原核表达,多克隆抗体

    来源: 中国畜牧兽医 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所

    基金: 国家重点研发计划(2016YFD0501102)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.01.030

    页码: 256-263

    总页数: 8

    文件大小: 1635K

    下载量: 450

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