导读:本文包含了供体细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪,卵母细胞,体外成熟培养,体细胞核移植
供体细胞论文文献综述
于婷婷[1]（2018）在《卵母细胞成熟条件及供体细胞传代次数对猪体细胞核移植影响的研究》一文中研究指出体细胞核移植(Somatic Cell Nuclear Transplantation,SCNT)是一个复杂、多步骤的哺乳动物克隆技术,包括卵母细胞成熟、供体细胞周期同步、去核、细胞融合、卵母细胞激活和胚胎培养发育等过程。其中卵母细胞体外成熟(IVM)不仅为SCNT提供大量优质的成熟卵母细胞受体,对体外受精(In Vitro Fertilization,IVF)、单精注射(Intracytoplasmic Sperm Injection,ICSI)等技术也有非常重要的意义。卵母细胞作为受体细胞为重编程提供了微环境,因此卵母细胞的质量(是否与体内自然成熟的卵母细胞作用特征相同)就显得尤为重要;另外供体细胞提供了基因组,其染色质状态直接关系到核重编程是否能顺利进行。此外,要启动重构胚的发育,供体细胞与卵母细胞发育周期同步也是必要条件。本实验就从上述两个方面入手:一方面通过在猪培养体系中分别加入不同的激素刺激因子(RosA、pNPPBB/E2、FGF2、LIF、IGF1、LH),研究其能否改善猪卵母细胞质量,提高孤雌胚胎发育能力;另一方面探究了供体传代次数及直径体积大小这些供体细胞参数及供体细胞与卵母细胞发育周期同步对猪SCNT后植入前胚胎发育的影响。首先,本实验对卵母细胞成熟的100nM pNPPB/100nM E2最佳处理时间和RosA、FGF2、LIF、IGF1的最优处理浓度进行研究。结果显示:1.使用的100nM pNPPB/100nM E2对卵母细胞处理2h时后,进行体外培养时卵母细胞成熟的效率较好,处理1h时,孤雌胚的分裂率及囊胚率有明显提高;2.LH的最佳培养浓度为5ng/ml,在此浓度下,培养成熟的卵母细胞与对照组相比其成熟及发育无明显差别;3.IGF1、LIF、FGF2 最佳浓度分别为 15ng/ml、15ng/ml、25ng/ml 时,对卵母细胞进行培养均有效的促进了其成熟率及囊胚率;4.RosA最佳浓度在5μM时,卵母细胞的成熟率、及孤雌后胚胎的囊胚率有上升趋势。在此基础上,使用不同激素组合(pNPPB/E2+FLI+RosA、pNPPB/E2+FLI、pNPPB/E2+RosA、FLI+RosA)对卵母细胞进行培养,然后孤雌观察胚胎发育状况。结果显示,pNPPB+FLI与对照组相比其成熟率、卵裂率并无明显差异,囊胚率呈明显上升趋势,其它组合pNPPB/E2+FLI+RosA、FLI+RosA与pNPPB/E2+RosA对卵母细胞的成熟和发育无明显效果,可能还存在不利的影响。然后,本实验探究了供体细胞对猪SCNT效率的影响。用不同传代次数(F1-F10)的猪胎儿成纤维细胞作为供体细胞进行SCNT并观察植入前胚胎发育情况,结果显示供体细胞在F7-F8代时SCNT效率较好。而且,供体细胞直径大小不会对SCNT后的重构胚的发育产生显着影响,但对后期胚胎的囊胚细胞数及凋亡有一定的影响。综上所述,本实验探究了不同刺激激素对卵母细胞体外成熟的影响和供体细胞状态对SCNT胚胎发育的影响,为以后提升卵母细胞体外成熟及核移植效率方面的研究提供了参考。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-06-01）
顾珊[2]（2018）在《小分子化合物处理供体细胞对奶山羊克隆早期胚胎发育的影响》一文中研究指出山羊奶制品是现代奶业的重要组成部分,但是在我国奶山羊遗传品质低下限制了该产业稳定发展。动物克隆技术中的体细胞核移植(SCNT)是家畜育种的新手段,主要存在效率低、克隆重构胚胎发育异常和后代存活率低等问题,其中核供体细胞的表观遗传状态被认为是影响SCNT克隆效率的关键因素之一。本实验选取叁种小分子化合物TTNPB、DZNeP和Forskolin(TDF)处理奶山羊克隆供体细胞,对比分析细胞形态变化、克隆重构胚胎的体内外发育,并通过RNA-seq和qRT-PCR检测小分子化合物影响的分子机制。研究结果如下:1、通过对实验组和对照组细胞膜标记和核染色形态检测发现,小分子化合物处理5-10天的奶山羊体细胞胞质收缩、细胞核变大。2、体细胞转录组测序分析显示,51个与重编程、胚胎发育、细胞分裂和染色质调节相关基因中,包括SOX2、POU5F1、SNAI1和CD44等21个基因表达上调;包括GATA4、CD14和CD34等16个基因表达下调。其中小分子化合物处理5天时有7个基因的表达显着上调(DNMT3B、UTF1、ESRRB、TET1、NCAPH、TP53和USF1),然而在处理10天时不表达或表达量很低。3、通过qRT-PCR检测干细胞关键6个基因表达结果显示,OCT4和TP53在小分子化合物处理第5天分别显着(P﹤0.05)和极显着上调(P﹤0.01);SOX2分别在处理第5天和第10天极显着(P﹤0.01)和显着上调(P﹤0.05);KLF4和P21在处理第5天和第10天基本不变或者下调;NANOG在处理第5天的基因表达基本不变,但到处理第10天显着上调(P﹤0.05)。4、将实验组和对照组的细胞作为核供体进行SCNT,发现经小分子化合物处理的实验组第5天的核供体细胞-受体卵子融合胚融合率显着高于对照组(82.26%vs 57.84%,P﹤0.05)。克隆重构胚胎的卵裂率与2-4细胞早期胚胎体外发育率在处理第10天的实验组略高于对照组,但是没有显着性差异。5、把2-4细胞阶段的克隆重构早期胚胎移植到同期发情调整的受体母羊后,不论是奶山羊体细胞处理组还是对照组均获得了受胎结果,但是克隆动物发育及后代是否正常正在跟踪检测。本实验应用叁种小分子化合物TDF对奶山羊成纤维细胞进行处理,探讨了其对于细胞形态变化、SCNT细胞融合、克隆重构胚胎的体内外发育能力的影响,并通过RNA-seq和qRT-PCR检测小分子化合物影响的分子机制。实验结果证明小分子化合物TDF能够影响细胞形态变化、表观遗传和干细胞重编程相关基因的表达变化,为探索奶山羊等家畜克隆技术产业化应用提供了新思路,相关分子机制与高效克隆技术流程的建立将进一步研究。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-06-01）
张圣梅,黄飞榕,齐忠权,李良成[3]（2018）在《糖尿病细胞治疗供体细胞来源及其研究进展》一文中研究指出据2015年国际糖尿病联盟报道,全球已确诊的糖尿病患者约有4.15亿,而中国糖尿病患者已超过1亿~([1]),约占全球糖尿病患者的1/4,因而,严重威胁着我国人民的健康~([2])。根据发病机制不同,糖尿病可分为1型、2型糖尿病以及妊娠期糖尿病。1型糖尿病是由于免疫系统攻击自身的胰岛β-细胞,导致其数量减少,致使胰岛素合成减少而引起的糖代谢紊乱性疾病[3];而中、晚期2型(本文来源于《实用器官移植电子杂志》期刊2018年02期）
楚秋霞,施巧婷,魏成斌,徐照学,丁岩[4]（2017）在《动物体细胞核移植中供体细胞的选择》一文中研究指出影响体细胞核移植效率的因素很多,供体细胞选择是核移植实验成功的基础和关键。本文参考近年来国内外在动物体细胞核移植技术方面的资料,从供体体细胞类型、细胞年龄、细胞传代及细胞周期对克隆效率的影响进行简要综述。(本文来源于《中国牛业科学》期刊2017年06期）
阮子芸[5]（2017）在《水牛供体细胞性别对其核移植胚胎发育及印记基因甲基化的影响》一文中研究指出供体细胞重编程不完全是体细胞克隆效率低的主要原因,包括DNA甲基化、印记基因表达、X染色体失活、组蛋白修饰等方面。为此,本研究拟探讨雌雄体细胞克隆(SCNT)胚胎的发育、DNA甲基化及其甲基化转移酶、组蛋白H3K9甲基化的差异,以及印记基因Xist、H19、IGF2的甲基化和表达水平,并通过降低H3K9me3和Xist的表达,以期提高克隆效率。研究结果如下:1.水牛成纤维细胞性别对SCNT胚胎发育的影响比较雌雄SCNT胚胎发育潜能和速度的结果显示,SCNT-♀胚胎的囊胚率显着高于SCNT-♂胚胎(P<0.05),与来自于X、Y精子的单精子胞质内注射胚胎(ICSI-X和ICSI-Y)及体外受精(IVF)胚胎相比差异不显着(P>0.05)。此外,SCNT-♀和SCNT-♂胚胎的发育速度快于IVF胚胎,,SCNT-♀、SCNT-♂的8细胞率(48h)和囊胚率(120h)显着高于IVF组(P<0.05)。QRT-PCR检测OCT4、SOX2、NANOG在各类胚胎的表达结果显示:SCNT-♀桑椹胚的OCT4和NANOG以及囊胚期NANOG表达量显着高于SCNT-♂组(P<0.05),而SCNT-♂囊胚期OCT4的表达量显着高于SCNT-♀组(P<0.05),SOX2在SCNT-♀和SCNT-♂的桑椹胚和囊胚的表达差异不显着(P>0.05)。2.雌雄水牛克隆胚胎甲基化差异的研究比较雌雄SCNT胚胎DNA甲基化及其甲基化转移酶和H3K9me2、H3K9me3的表达水平,探讨SCNT胚胎甲基化差异的分子机制。采用免疫组化检测 5mC、5hmC 以及 H3K9me2、H3K9me3 的表达;QRT-PCR 分析 Dnmts和TETs mRNA的表达水平。结果显示:5mC、5hmC分别主要表达于SCNT-♀、SCNT-♂胚胎,且SCNT-♀胚胎甲基化水平低于SCNT-♂胚胎;而DnmtN、Dnmt3a和Dnmt3b在SCNT-♀和ICSI-X早期胚胎的表达差异不显着(P>0.05),但在SCNT-♂和ICSI-Y早期胚胎的表达差异显着(P<0.05)。TET1高表达于SCNT-♂胚胎;TET2和TET3在早期胚胎低表达。H3K9me2高表达于IVF胚胎;H3K9me3显着高表达于SCNT-♂的8cell期(P<0.05)。3.雌雄克隆胚胎印记基因的甲基化模式及调控研究采用重亚硫酸盐结合PCR法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)检测Xist、H19、IGF2在雌雄克隆胚胎和来自于X、Y精子的IVF-X、IVF-Y胚胎的甲基化状态。结果显示:Xist的甲基化水平在IVF-X、IVF-Y胚胎分别为44.8%和72.3%,在SCNT-♀胚胎甲基化状态类似IVF-X胚胎,但在SCNT-♂胚胎甲基化水平为0%。H19和IGF2在这四组早期胚胎的甲基化水平变化为80%-94%。KDM4B显着降低雌雄SCNT胚胎H3K9me3的表达且提高SCNT-♂胚胎的分裂率、囊胚率和SCNT-♀胚胎的分裂率(P<0.05)。4.雌雄水牛克隆胚胎印记基因的表达和调控QRT-PCR 检测 Xist、H19、IGF2 在 ICSI-X、ICSI-Y、SCNT-♀、♀CNT-♂早期胚胎的表达情况。Xist-shRNA降低SCNT-♀胚胎Xist的表达以期提高克隆胚胎发育潜能。结果发现:Xist高表达于各类胚胎的8cell(P<0.05),在各时期SCNT-♀胚胎的表达高于SCNT-♂胚胎(P<0.05);H19、IGF2高表达于SCNT的2cell和8cell(P<0.05)。Xist-shRNA显着降低SCNT-♀胚胎的Xist的表达及其囊胚率(P<0.05)。5.雌雄克隆水牛印记基因的甲基化和表达情况采用BSP法和QRT-PCR法分别检测印记基因Xist、H19、IGF2在雌雄的存活(♀LI-3,♂LI-3)、死亡克隆水牛(♀S1-3,♂S1-3)和普通水牛(♀N1-3,♂N1-3)耳部的甲基化和表达情况。结果显示:(1)Xist基因甲基化水平在♀L组的与♀N组差异不显着(P>0.05),而♀S组显着低于♀N组(P<0.05);在♂L、♂S和♂N组差异不显着(P>0.05)。(2)H19的甲基化水平在♀L、♀S和♀N以及♂L、♂S和♂N组差异不显着(P>0.05)。IGF2的甲基化水平在♀L、♀S和♀N以及♂L和♂N组差异不显着(P>0.05)。但♂S组显着低于♂L和♂N组(P<0.05)。(3)Xist的表达水平在♀S组显着高于♀L和♀N组(P<0.05),但♂S、♂L和♂N组无显着差异(P>0.05);而H19、IGF2在♀L和♀N以及♂L和♂N组无显着差异(P>0.05),但在♀S和♂S组分别显着高于♀L、♀N以及♂L、♂N组(P<0.05)。上述结果表明:(1)SCNT-♀胚胎的发育潜能高于SCNT-♂胚胎;(2)SCNT-♀胚胎的DNA甲基化水平低于SCNT-♂胚胎,且其Dnmts的转录模式和Xist的甲基化较于SCNT-♂胚胎趋于正常;(3)抑制H3K9me3的表达,促进SCNT胚胎的发育;(4)抑制Xist的表达,促进SCNT-♀胚胎的发育;(5)Xist、H19和IGF2的甲基化和表达水平在存活克隆水牛正常,在死亡克隆水牛低甲基化和高表达。(本文来源于《广西大学》期刊2017-06-01）
唐红,张宾,张译元,郭延华,王立民[6]（2016）在《供体细胞对绵羊转基因体细胞克隆胚胎体外发育影响的研究》一文中研究指出研究比较了转入不同外源基因、转同一基因的不同细胞克隆、供体细胞的培养代数及冷冻对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育的影响,旨在为进一步探寻建立供体细胞个性化准备方案,为提高动物克隆效率提供参考。结果表明,转不同外源基因的供体细胞对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育无影响;转同一基因的不同细胞克隆对转基因体细胞克隆羊重构胚体外发育有一定影响,且转TERT基因的不同克隆间的重构胚的融合率及囊胚率差异显着(P<0.05)。随着供体细胞培养代数的增加,重构胚体外发育的桑葚胚率及囊胚率无显着影响,但融合率随着培养代数的增加有上升趋势,且差异显着(P<0.05);供体细胞冷冻可促进其融合率、桑葚胚率及囊胚率。研究结果表明,供体细胞的不同克隆、培养代数、冷冻等因素对转基因效率有一定的影响。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2016年10期）
曹慧,苏文龙,王寒阳,郝永兰,田树军[7]（2016）在《Scriptaid处理供体细胞对绵羊体细胞核移植胚胎发育效果的影响》一文中研究指出引言/目的研究证实,供体核的不完全重编程是导致体细胞核移植胚胎发育效率低下的主要原因。组蛋白乙酰化作为重要的重编程方式之一,能够反映克隆胚胎表观遗传重编程的程度。大量研究表明,应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂可显着提高体细胞核移植效率。本试验通过在卵丘细胞培养液中添加不同浓度的Scriptaid并在最佳Scriptaid浓度条件下筛选供体细胞的最佳处理时间,比较绵羊重构胚早期胚胎发育率,旨在筛选Scriptaid对绵羊重构胚(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集》期刊2016-08-18）
曹慧,苏文龙,王寒阳,郝永兰,田树军[8]（2016）在《Zebularine处理供体细胞对绵羊供体卵丘细胞和核移植胚胎DNA甲基化水平的影响》一文中研究指出引言/目的尽管多个物种的体细胞克隆已经取得成功,但克隆效率依然很低,目前认为,体细胞核移植胚胎发育失败是由供体细胞DNA甲基化不完全重编程造成的。大量研究证实,核移植胚胎在多个发育阶段DNA甲基化水平均高于同期的体外受精胚胎,因此,应用DNA甲基转移酶抑制剂阻断DNA的高度甲基化,降低核供体细胞或核移植重构胚的DNA甲基化程度,将有利于提高重构胚的重编程效率和发育能力。Zebularine作为一种DNA甲基转(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集》期刊2016-08-18）
阮子芸,赵鑫,秦希玲,蒋建荣,石德顺[9]（2016）在《供体细胞性别对水牛体细胞核移植胚胎印迹基因甲基化影响的研究》一文中研究指出引言/目的体细胞核移植克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)动物普遍存在出生效率低的问题,主要由于供体细胞的重编程不完全,其中包括印迹基因、DNA甲基化等方面。印迹基因通过DNA甲基化来实现其亲本依赖性的表达。父源印迹基因H19和母源印迹基因IGF2及Xist对胎儿以及胎盘的生长发育有着重要的作用,SCNT胚胎基因的印迹异常直接(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集》期刊2016-08-18）
李嘉琪,李紫聪,吴珍芳,刘德武[10]（2016）在《G418处理核供体细胞对猪克隆胚胎体外发育效率的影响》一文中研究指出【目的】探索G418处理供体细胞对其核移植胚胎发育效率的影响。【方法】利用G418单独处理猪成体成纤维细胞6 d后,收集细胞,利用荧光定量PCR的方法检测处理前后细胞中抗氧化应激、细胞凋亡相关基因的表达水平,运用亚硫酸盐结合测序法分别检测基因组重复序列LINE-1、微卫星的DNA甲基化状态,以及其核移植胚胎体外发育的能力。【结果】经不同质量浓度G418处理的供体细胞的抗氧化应激酶相关基因及细胞凋亡基因表达发生显着变化(P<0.05),但其DNA甲基化水平没有发生改变(P>0.05);经G418处理的供体细胞的核移植胚胎的体外发育效率显着低于对照组(P<0.05)。【结论】G418处理供体细胞可能对其克隆胚胎体外发育效率有抑制作用。(本文来源于《华南农业大学学报》期刊2016年05期）
供体细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
山羊奶制品是现代奶业的重要组成部分,但是在我国奶山羊遗传品质低下限制了该产业稳定发展。动物克隆技术中的体细胞核移植(SCNT)是家畜育种的新手段,主要存在效率低、克隆重构胚胎发育异常和后代存活率低等问题,其中核供体细胞的表观遗传状态被认为是影响SCNT克隆效率的关键因素之一。本实验选取叁种小分子化合物TTNPB、DZNeP和Forskolin(TDF)处理奶山羊克隆供体细胞,对比分析细胞形态变化、克隆重构胚胎的体内外发育,并通过RNA-seq和qRT-PCR检测小分子化合物影响的分子机制。研究结果如下:1、通过对实验组和对照组细胞膜标记和核染色形态检测发现,小分子化合物处理5-10天的奶山羊体细胞胞质收缩、细胞核变大。2、体细胞转录组测序分析显示,51个与重编程、胚胎发育、细胞分裂和染色质调节相关基因中,包括SOX2、POU5F1、SNAI1和CD44等21个基因表达上调;包括GATA4、CD14和CD34等16个基因表达下调。其中小分子化合物处理5天时有7个基因的表达显着上调(DNMT3B、UTF1、ESRRB、TET1、NCAPH、TP53和USF1),然而在处理10天时不表达或表达量很低。3、通过qRT-PCR检测干细胞关键6个基因表达结果显示,OCT4和TP53在小分子化合物处理第5天分别显着(P﹤0.05)和极显着上调(P﹤0.01);SOX2分别在处理第5天和第10天极显着(P﹤0.01)和显着上调(P﹤0.05);KLF4和P21在处理第5天和第10天基本不变或者下调;NANOG在处理第5天的基因表达基本不变,但到处理第10天显着上调(P﹤0.05)。4、将实验组和对照组的细胞作为核供体进行SCNT,发现经小分子化合物处理的实验组第5天的核供体细胞-受体卵子融合胚融合率显着高于对照组(82.26%vs 57.84%,P﹤0.05)。克隆重构胚胎的卵裂率与2-4细胞早期胚胎体外发育率在处理第10天的实验组略高于对照组,但是没有显着性差异。5、把2-4细胞阶段的克隆重构早期胚胎移植到同期发情调整的受体母羊后,不论是奶山羊体细胞处理组还是对照组均获得了受胎结果,但是克隆动物发育及后代是否正常正在跟踪检测。本实验应用叁种小分子化合物TDF对奶山羊成纤维细胞进行处理,探讨了其对于细胞形态变化、SCNT细胞融合、克隆重构胚胎的体内外发育能力的影响,并通过RNA-seq和qRT-PCR检测小分子化合物影响的分子机制。实验结果证明小分子化合物TDF能够影响细胞形态变化、表观遗传和干细胞重编程相关基因的表达变化,为探索奶山羊等家畜克隆技术产业化应用提供了新思路,相关分子机制与高效克隆技术流程的建立将进一步研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
供体细胞论文参考文献
[1].于婷婷.卵母细胞成熟条件及供体细胞传代次数对猪体细胞核移植影响的研究[D].吉林大学.2018
[2].顾珊.小分子化合物处理供体细胞对奶山羊克隆早期胚胎发育的影响[D].内蒙古大学.2018
[3].张圣梅,黄飞榕,齐忠权,李良成.糖尿病细胞治疗供体细胞来源及其研究进展[J].实用器官移植电子杂志.2018
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[6].唐红,张宾,张译元,郭延华,王立民.供体细胞对绵羊转基因体细胞克隆胚胎体外发育影响的研究[J].家畜生态学报.2016
[7].曹慧,苏文龙,王寒阳,郝永兰,田树军.Scriptaid处理供体细胞对绵羊体细胞核移植胚胎发育效果的影响[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集.2016
[8].曹慧,苏文龙,王寒阳,郝永兰,田树军.Zebularine处理供体细胞对绵羊供体卵丘细胞和核移植胚胎DNA甲基化水平的影响[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集.2016
[9].阮子芸,赵鑫,秦希玲,蒋建荣,石德顺.供体细胞性别对水牛体细胞核移植胚胎印迹基因甲基化影响的研究[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十八届学术研讨会暨中日韩第四届动物繁殖学术交流会论文集.2016
[10].李嘉琪,李紫聪,吴珍芳,刘德武.G418处理核供体细胞对猪克隆胚胎体外发育效率的影响[J].华南农业大学学报.2016