鸭源血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达与初步应用

鸭源血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达与初步应用

论文摘要

为了获得鸭源血清4型禽腺病毒(FAdV-4)重组Hexon蛋白,并掌握重组蛋白的免疫学活性和应用前景,试验采用PCR方法、原核表达技术、Western-blot检测和间接ELISA方法对鸭源FAdV-4 Hexon蛋白的主要抗原区域进行截短表达、鉴定与初步应用研究。结果表明:PCR方法扩增得到大小为1 011 bp的FAdV-4 Hexon主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白;重组蛋白变性纯化后进行Western-blot检测,其可与FAdV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性;以纯化蛋白为包被抗原,初步建立检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法,用该方法进行检测,FAdV-4灭活疫苗免疫鸭场的免疫合格率为96.46%,FAdV-4感染鸭场的阳性感染率为99.46%,无FAdV-4免疫史和感染史鸭场的阳性感染率为0。说明试验获得了具有良好生物学活性的FAdV-4 Hexon重组蛋白。

论文目录

  • 1 材料
  •   1.1 菌 (毒) 株、载体
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 试验动物及血清样品
  • 2 方法
  •   2.1 引物的设计与合成
  •   2.2 核酸的提取
  •   2.3 PCR扩增
  •   2.4 表达载体的构建与鉴定
  •   2.5 pET-Hexon的诱导表达与纯化
  •   2.6 FAdV-4抗血清的制备
  •     2.6.1 FAdV-4灭活疫苗的配制
  •     2.6.2 动物免疫
  •     2.6.3 血清的采集与效价的测定
  •   2.7 重组蛋白的Western-blot检测
  •   2.8 重组蛋白的初步应用
  • 3 结果与分析
  •   3.1 PCR扩增
  •   3.2 表达载体的构建与鉴定
  •   3.3 pET-Hexon的诱导表达与纯化
  •   3.4 FAdV-4抗血清的制备
  •   3.5 重组蛋白的Western-blot检测
  •   3.6 重组蛋白的初步应用
  • 4 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 粟元文,王怀禹,魏玲

    关键词: 血清型亚群禽腺病毒,蛋白,原核表达,初步应用

    来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 南充职业技术学院

    基金: 南充市研发资金项目(16YFZJ0146)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.05.0079

    页码: 77-80

    总页数: 4

    文件大小: 189K

    下载量: 146

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