重组蓖麻毒素A链的表达及半乳糖修饰

论文摘要

目的表达重组蓖麻毒素A链（ricin toxin A,RTA）,并进行半乳糖糖基化修饰。方法将重组质粒pET-28a-RTA转化E. coli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达重组蛋白RTA,通过镍离子亲和层析柱纯化包涵体,并复性。采用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-（3-dimethylaminopropyl）-3-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDC]/N,N-羟基琥珀酰亚胺（N-hydroxysuccinimide,NHS）法对重组RTA进行半乳糖糖基化修饰,并对偶联反应温度（20、25、30和37℃）和半乳糖与RTA的投料比（100∶1、500∶1、1 000∶1、1 500∶1和2 000∶1）进行优化。结果 RTA蛋白相对分子质量约34 000,主要以包涵体形式表达,纯化复性后纯度大于90%。最适偶联反应温度为25℃,半乳糖与RTA最适投料比为1 000∶1。结论成功表达了RTA蛋白,并通过EDC/NHS法实现了半乳糖与RTA的偶联。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 边红,王燕,孙成彪,许娜,朱文赫,刘文森,王秀然

关键词: 蓖麻毒素链,糖基化修饰,工艺优化

来源: 中国生物制品学杂志 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 吉林农业大学生命科学学院,军事医学研究院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

基金: 国家自然科学基金面上项目(81773630),吉林省科技厅重点科技攻关计划(20180201004YY)

分类号: Q51

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002617

页码: 565-569

总页数: 5

文件大小: 227K

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标签：蓖麻毒素链论文;  糖基化修饰论文;  工艺优化论文;