SRT1720抗老年大鼠骨髓间充质干细胞衰老的作用及机制研究

SRT1720抗老年大鼠骨髓间充质干细胞衰老的作用及机制研究

论文摘要

目的探究SRT1720抗老年大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)衰老的作用及其机制并建立一种可行的预处理方案。方法以CCK-8法检测细胞生存率,通过过氧化应激模型,确定SRT1720预处理方案。之后采用SRT1720预处理和溶剂DMSO预处理,以β-半乳糖苷酶染色法显示细胞衰老情况,荧光定量PCR法检测衰老相关的p16、p21 mRNA表达水平,Western blot法检测衰老相关的p16、p21蛋白表达水平。管腔形成试验分析预处理的细胞上清液重悬人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成情况。采用活性氧检测试剂盒检测MSCs内活性氧类物质含量。免疫荧光法检测MSCs细胞内DNA损伤情况。结果最适宜的SRT1720预处理方案为1μM SRT1720预处理老年MSC 24h,在此条件下,细胞在氧化应激条件下生存率最高,48h后衰老相关的β-半乳糖苷酶染色阳性率明显下降,细胞衰老相关的p16、p21 mRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞上清液促HUVEC管腔形成能力增强,细胞内活性氧类物质含量减少,DNA损伤反应减弱。结论 SRT1720预处理可通过减轻细胞内活性氧类物质的产生及DNA损伤而改善老年MSC衰老表型及旁分泌功能。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 实验动物
  •   1.2 试剂和仪器
  •   1.3 MSCs的收集、分离和培养
  •   1.4 细胞应激模型的建立和细胞生存率分析
  •   1.5 MSCs药物处理
  •   1.6 衰老相关的β半乳糖苷酶染色
  •   1.7 衰老相关的p16、p21 mRNA表达水平检测
  •   1.8 衰老相关的p16、p21蛋白表达水平检测
  •   1.9 管腔形成试验
  •   1.1 0 活性氧类物质含量检测
  •   1.1 1 细胞内DNA损伤免疫荧光法检测
  •   1.1 2 统计学处理
  • 2 结果
  •   2.1 SRT1720预处理对老年MSCs生存率的影响
  •   2.2 SRT1720预处理对老年MSCsβ-半乳糖苷酶染色阳性细胞率和衰老相关蛋白的影响
  •   2.3 SRT1720预处理老年MSCs对HUVEC管腔形成的影响
  •   2.4 SRT1720预处理对活性氧类物质产生和γ-H2A.X表达的影响
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 朱美飞,江荣林,雷澍,吴建浓

    关键词: 老年骨髓间充质干细胞,衰老,过氧化物,损伤

    来源: 浙江医学 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 浙江中医药大学附属第一医院重症医学科

    基金: 浙江省医药卫生一般研究计划(2013KYA142)

    分类号: R329.2

    页码: 322-327+331+408

    总页数: 8

    文件大小: 2923K

    下载量: 134

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