转移载体论文_任婉婉

导读:本文包含了转移载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,狂犬病,鉴定,病毒,隆回,技术,基因。

转移载体论文文献综述

任婉婉^[1]（2019）在《打造中部地区技术转移新高地》一文中研究指出近期，省科技厅公布了去年省级以上技术转移示范机构考核优秀名单，在全部19家单位中，高新区的洛阳智达石化工程有限公司等7家单位获得表彰，占比36.8%，总量位居全省第一。为深入落实《中华人民共和国促进科技成果转化法》，2017年9月，国务院发布实(本文来源于《洛阳日报》期刊2019-06-27）

白洁,罗磊,梁晨,郑素军,段钟平^[2]（2019）在《尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因和溶质载体阴离子转运蛋白家族1B基因突变与高间接胆红素血症的相关性研究》一文中研究指出目的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因是与高间接胆红素血症有关的最重要的基因。溶质载体阴离子转运蛋白家族1B基因(SLCO1B)在胆红素代谢过程中的重要性也越来越被认识到。本研究旨在探讨UGT1A1和SLCO1B基因的突变对中国成人轻度高间接胆红素血症的影响。方法本研究纳入148名高间接胆红素血症患者和158名正常对照,收集其临床资料,并检测(本文来源于《第十届全国疑难及重症肝病大会论文汇编》期刊2019-05-16）

拓昊苑,路风中,张元元,于好强,付凤玲^[3]（2019）在《利用转移PCR技术构建玉米SnRK2基因家族表达载体》一文中研究指出在构建玉米蔗糖非酵解型蛋白激酶2(SnRK2)基因家族表达载体的过程中,因为表达载体可供选择的多克隆位点较少,且有些还与目的基因同源,所以采用转移PCR(T-PCR)扩增技术替代通常的酶切连接方法。为避免错误连接或未连接的第一轮T-PCR中间产物对退火温度不同的第二轮扩增循环产生干扰,本研究对T-PCR接头引物3′-端和5′-端的两段序列及其退火温度、引物、供体质粒和目标质粒模板的浓度,特别是温度循环程序进行设计和筛选,并用扩增构建的重组载体转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,进行菌液PCR和测序验证。结果表明,在两条引物3′-端序列理论退火温度相差不大的情况下,T-PCR第一轮扩增的退火温度以低于或接近其中较低的理论退火温度为宜。但在两条引物3′-端序列理论退火温度相差较大的情况下,则应高于其中较低的理论退火温度。T-PCR第二轮扩增的退火温度,适当低于两条引物理论退火温度的平均值。按优化的温度循环程序,从供体质粒pMD19-T扩增ZmSnRK2基因家族8个成员的编码序列,并整合到目标载体pHBT95启动子下游特异位点,重组率达60%以上。综上表明,T-PCR对没有适用多克隆位点的载体构建的实用性较强。本研究通过优化的温度循环程序为表达或诱变载体构建提供了一定的理论参考。(本文来源于《核农学报》期刊2019年07期）

黄思哲^[4]（2019）在《CRISPR/Cas9编辑C-erbb-2基因超声微泡靶向载体的构建及对子宫内膜癌细胞增殖转移的影响》一文中研究指出目的:构建载CRISPR/Cas9质粒的阳离子微泡,优化制备参数和超声辐照条件,观察阳离子微泡载体在体内体外的超声造影效果,通过低频超声爆破的转染方法,检测转染后目的蛋白C-erbb-2的表达情况,及对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖、侵袭、迁移的作用,为研发子宫内膜癌的靶向治疗提供一种新型、高效、副作用小的可视化治疗方法提供实验依据。方法:1、通过机械震荡法制备出普通微泡(NMB),阳离子微泡(CMB);2、构建C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒;3、检测NMB、CMB的基本特征、物理学性质及体内与体外造影效果;4、将CRISPR/Cas9质粒与CMB结合(CMB-CRISPR/Cas9),在低频超声辐照的作用下将C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒转染于子宫内膜癌HEC-1A细胞;5、转染成功后,通过Western Blot、qPCR检测目的蛋白C-erbb-2的表达情况,且通过CCK8、细胞克隆、划痕实验、Transwell与检测子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、侵袭、迁移能力情况。结果:1、镜下可见CRISPR/Cas9质粒与阳离子微泡(CMB)结合效率良好,且结合后的CMB-CRISPR/Cas9与目的细胞HEC-1A的寻靶性良好;2、NMB,CMB于体外与体内造影成像效果均满意;3、在细胞转染实验中,在转染辐照参数为30s,0.75W/cm~2条件下,成功促进了转染;4、在成功转染C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒后,目的蛋白C-erbb-2的表达降低,且子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移、侵袭能力较control组均存在明显减弱,有统计学差异。结论:CRISPR/Cas9质粒与阳离子微泡(CMB-CRISPR/Cas9)结合后具有良好的超声造影显像功能,且在低频超声爆破的作用下,能成功转染C-erbb-2的CRISPR/Cas9质粒于HEC-1A细胞,使目的蛋白C-erbb-2的表达降低,且子宫内膜癌HEC-1A细胞的增殖、迁移、侵袭能力均存在明显减弱,有统计学差异。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）

何小莉^[5]（2019）在《PRV变异株GZDZ2016的分离鉴定与TK基因缺失转移载体的构建》一文中研究指出伪狂犬病病毒为双股DNA病毒,隶属于疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科,全长约150 kb,GC含量高达73%。猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒引起的以神经症状、繁殖障碍为主要特征的严重危害我国养猪业的持续健康发展的疾病,在我国各省规模化猪场普遍存在。据童武2013年报道,自2011年以来中国各省先后发生PR疫病,且免疫PRV疫苗的猪场仍发生,发病率和死亡率明显上升,毒株分离鉴定结果显示,引起该病大规模爆发的病原为变异的猪伪狂犬病毒。贵州省部分已免疫PRV Bartha-K61疫苗株的猪场,也发生类似的PR疫病。2016年贵州省丹寨县某规模化种猪场,在已免疫PRV Bartha-K61疫苗的情况下,部分种猪先后发生流产、产死胎和木乃伊胎,后经实验室诊断确诊为感染PRV野毒所致。为了解该病例中PRV毒株的情况,本研究应用Vero细胞对其进行了分离和鉴定,证实该分离毒株系一株PRV变异毒株(GZDZ2016),并基于该毒株基因序列构建了TK基因缺失转移载体,为PRV变异株TK基因缺失疫苗的研究奠定了基础。1.PRV变异株GZDZ2016的分离鉴定本研究取2016年丹寨县某猪场送检的经实验室确诊为PRV阳性的流产胎儿组织样品,经系列处理后接种于Vero细胞进行传代分离,并应用电镜技术对分离的PRV进行形态学观察,对病毒效价、一步生长曲线及部分基因序列等进行了测定。分离鉴定结果显示,当盲传至第5代时开始产生CPE,至第7代时呈现稳定的CPE,表现为细胞变圆、脱落、呈拉网状等典型CPE;透射电镜下可见位于囊泡中呈近似圆形的成熟病毒粒子,在胞核中可见衣壳呈晶格状排列的病毒包涵体以及空心、实心2种无囊膜的病毒粒子;分离的病毒在Vero细胞上的生长滴度为10~(-8.12)/0.1mL,一步生长曲线显示该病毒滴度在12 h内处于潜伏期,从12 h以后到56 h之间呈增长趋势,至60 h滴度达最大;将分离毒株接种家兔,2天后出现奇痒、亢奋的症状,3天后死亡;后取保存备用的第11代细胞培养液进行gD部分基因的扩增,并对测序结果进行分析,PCR扩增产物经测序证明系PRV gD基因的部分序列。结果表明,成功分离获得了1株猪伪狂犬病病毒贵州株,命名为PRV GZDZ2016株。本试验通过设计合成特异性引物,通过PCR方法扩增了分离株的gB、gC、gD、gE和TK基因,预期大小分别为:2784bp、1651 bp、1273 bp、、1752 bp、1535 bp,并对gC、gD、gE和TK基因进行克隆测序,将测序结果与国内外毒株基因序列进行比对和序列相似性分析,用推导的氨基酸序列绘制系统发育进化树。序列相似性分析结果表明:该分离株主要基因与变异株相似性较高,而与国外毒株相似性较低。序列比对结果显示,该分离株gB、gC、gE和TK蛋白分别有不同数量的氨基酸的变异,gE蛋白第48位和496位均有天冬氨酸(D)的插入,第236位由亮氨酸(L)变为脯氨酸(P);TK蛋白第6位由异亮氨酸(I)变为丙氨酸(A),第157位由天冬氨酸(D)变为甘氨酸(G);gC蛋白第81位由组氨酸(V)变为丙氨酸(A);gB蛋白与国外毒株在第55、70、72~73等位存在明显的氨基酸差异;gD蛋白与2012年后分离的HeN1、TJ、JS2012株等变异毒株未存在氨基酸差异。遗传进化分析结果显示,该分离株与国内近年来分离的变异毒株亲缘关系较近,而与国内外分离的经典毒株亲缘关系较远。以上结果均表明,该分离株属于国内近几年流行的变异毒株,命名为PRV变异株GZDZ2016。2.PRV变异株GZDZ2016 TK基因缺失转移载体的构建设计特异性引物分别扩增PRV变异株GZDZ2016 TK基因上下游同源臂TKL、TKR,大小分别为1066 bp、906 bp。设计特异性引物从pCMV-beta质粒中扩增出报告基因LacZ,大小为4062 bp。将pMD19T-TKR质粒经HindⅢ、EcoRⅠ双酶切后,亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-TKR质粒,其大小为6334 bp。之后,再将pMD19T-TKL质粒经NheⅠ-HindⅢ双酶切后,亚克隆至pcDNA3.1-TKR质粒载体中,构建pcDNA3.1-TKL-TKR质粒,其大小为7400 bp。最后,将报告基因LacZ的扩增产物,通过HindⅢ酶切后,克隆至pcDNA3.1-TKL-TKR质粒载体中,构建pcDNA3.1-TKL-LacZ-TKR质粒,该质粒测序鉴定结果表明大小为11462 bp,与预期结果相符。(本文来源于《贵州大学》期刊2019-05-01）

咸文^[6]（2019）在《PRV变异株GZYY2015的分离鉴定与gE基因缺失转移载体的构建》一文中研究指出伪狂犬病毒(Pseudo rabies virus,PRV)引起的猪伪狂犬病(PR)是我国严格控制和扑灭的二类动物疫病,目前尚无特效药,预防该病仍需疫苗接种。由自然缺失gE基因的Bartha-K61株制造的疫苗,广泛推广应用于猪场,效果稳定且良好,为PR的防控做出了巨大贡献。直至2011年末,经过经典疫苗株Bartha-K61免疫的猪场再次暴发PR疫情,表明经典疫苗株Bartha-K61已不能再为猪只提供完全的免疫保护。母猪繁殖障碍和新生仔猪死亡率不断增加,PRV gE抗体阳性检出率也在不断上升,给养猪行业带来了巨大经济损失。贵州省养猪生产实践中,我们也时常遇到已免疫Bartha-K61株的猪群发生PR疫病的情况。为了解此类疫病PRV毒株情况,为更好地解决养猪生产中的PR问题,本研究采用经典的病毒分离方法,从临床送检样品中分离获得了一株PRV变异毒株(GZYY2015),并基于该毒株基因序列构建了gE基因缺失转移载体,为PRV变异株gE基因缺失疫苗的研究奠定了基础。1、PRV变异株GZYY 2015的分离鉴定本研究取2015年贵阳云岩区某泔水散养户送检的经实验室诊断为PRV阳性的组织病料样品,经匀浆、冻融和无菌滤器过滤后,取滤液接种至单层致密的Vero细胞,进行传代分离PRV毒株,并对其部分生物学特性进行了鉴定。实验结果表明,当盲传至6代后,PRV分离毒即可在Vero细胞上形成稳定CPE现象。电镜下可见病毒粒子在核内包涵体中呈现典型的晶格状排列,负染的病毒粒子呈圆形,正二十面体核衣壳结构明显,具有典型的PRV病毒粒子形态特征。测定其TCID_(50)为10~(-9.13)TCID_(50)/0.1mL,一步生长曲线显示该病毒在12 h内处于潜隐期,12 h~48 h病毒滴度上升较快,60 h病毒滴度达到最高值。将该毒株接种于家兔,可致其体温升高,注射部位奇痒。本研究对TK、gE、gD和gC基因进行T克隆,将克隆质粒和gB基因PCR产物送上海生工测序,结果显示,各基因大小及ORF依次为1535 bp(963 bp)、1752 bp(1740 bp)、1273 bp(1209 bp)、1651 bp(1464 bp)和2784 bp(2745bp),与预期大小一致。序列相似性及遗传进化分析结果显示,TK、gE、gC、gB基因均和PRV变异流行株位于同一进化分支上,且具有较高相似性,而gD基因序列与Ea株完全相同,并与经典株位于同一进化分支上,这五个基因与国外PRV毒株均不在同一进化分支。通过对各基因的氨基酸序列进行比对分析,gE基因在第48、496位均有一个天冬氨酸(D)的插入,这两个位点的变异与国内PRV变异流行株变异位置相同,符合赵鸿远等人报道的PRV变异分子特征。该毒株gC、gB、gD、TK基因推导的氨基酸序列,存在不同程度的变异,变异位点及类型均与参与比较的变异毒株相似。2、PRV GZYY2015变异株gE基因缺失转移载体构建设计引物分别扩增PRV GZYY2015变异株gE上下游同源臂LA、RA,以及pEGFP-C1中绿色荧光蛋白表达相关基因序列。首先将扩增的gE左同源臂LA片段酶切后,克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,构建pcDNA3.1-LA质粒。之后,再将扩增的gE右同源臂RA片段酶切后,克隆至pcDNA3.1-LA质粒载体中,构建pcDNA3.1-LA-RA质粒。最后将扩增的EGFP-C1片段通过酶切,克隆连接至pcDNA3.1-LA-RA质粒载体中,构建pcDNA3.1-LA-EGFP-RA质粒。测序结果表明,克隆的LA-EGFP-RA片段大小为3571 bp,两端分别为NheⅠ和XbaⅠ酶切位点,中间835 bp～2609 bp为EGFP序列,其两端均为Bam HⅠ酶切位点,测序结果与预期相符。(本文来源于《贵州大学》期刊2019-05-01）

谢文远^[7]（2019）在《全市沪昆百里工业走廊基本建成》一文中研究指出邵阳日报4月14日讯 （记者 谢文远） 邵东县通过大力扶持智能制造技术研究院、锐科机器人等公共技术服务平台建设，帮助一批传统轻工企业实现智能化改造，减少人工80%，产值增长近四成；邵阳经开区在叁一专汽、邵纺机等龙头企业的带动下，先进装备制造业实现快速发展(本文来源于《邵阳日报》期刊2019-04-15）

罗兵,韩永笑,张淇鑫,郭浩,李红梅^[8]（2018）在《水稻UDP-N-乙酰葡萄糖胺酰基转移酶基因(OsLpxA)RNA干扰载体的构建及遗传转化》一文中研究指出细菌脂多糖由O-抗原,核心多糖和脂质A叁部分组成,脂质A是细菌内毒素活性的根源。植物脂多糖与细菌脂多糖组成基本相似,但不具有微生物脂多糖的高毒性。目前,对植物脂多糖的合成机制缺乏最基本的认识,因此研究植物脂多糖的合成具有重要的科学价值。作者在水稻基因组中发现一个含有大肠杆菌Ec Lpx A功能结构域的基因,命名为OsLpxA,该基因催化水稻脂质A合成的第一步反应。本研究用水稻(Oryza sativa subsp.Japonica)苗期的叶片为材料,提取总RNA并以此为模板,用反转录PCR扩增OsLpxA基因的si RNA靶序列,并将其连接到表达载体p TCK303上,构建了RNA干扰载体p TCK303-OsLpxA-RNAi。将该载体通过农杆菌介导法转化水稻,共获得59株具有潮霉素抗性的转化苗。然后利用潮霉素的特异性引物对全部抗性苗进行PCR检测,其中有38株转化苗呈阳性,表明潮霉素标记基因已整合到了水稻的基因组中。最后,利用定量PCR检测38株阳性苗中OsLpxA基因在转录水平表达的变化。结果表明,其中27株阳性苗中导入的OsLpxA基因RNA干扰结构成功地降低了目的基因的表达。该结果为后续对OsLpxA基因功能的研究提供参考。(本文来源于《分子植物育种》期刊2018年16期）

陆晓华^[9]（2018）在《26家国际合作载体助力技术转移》一文中研究指出苏报讯（记者　陆晓华）2018中国苏州跨国技术转移大会昨天开幕，200余中外嘉宾聚集苏州共商科技合作。大会重点组织APEC科技创新政策伙伴关系机制APEC中心第二次合作会议、国际技术转移与创新合作论坛、“创之星”中美创新创业大赛生物医药与医疗器械领域决赛(本文来源于《苏州日报》期刊2018-06-14）

张姗姗^[10]（2018）在《猪伪狂犬病病毒流行变异株JL1株分离鉴定及gE基因缺失转移载体的构建》一文中研究指出近年来,猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)在国内许多Bartha-K61疫苗免疫的猪场大规模爆发,相关研究表明,引起该病大规模爆发的病原为发生变异的猪伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV),多数猪场的PRV野毒感染普遍存在。该病传播迅速,严重危害我国养猪业的发展,引起人们的广泛关注。本研究对从吉林省某疑似PR发病猪场采集的病料进行病毒分离鉴定,分离出一株PRV JL1株,对该毒株的主要基因进行遗传变异分析,以进一步了解PRV遗传变异情况。同时,以分离的JL1株为亲本株,构建gE基因缺失转移载体,以期为后续构建PRV gE基因缺失株打下基础。研究内容分为以下3部分:1.PRV流行变异株JL1株的分离鉴定采集吉林省某疑似猪伪狂犬病发病猪场的组织样品,经研磨处理后,将采集的病料接种于ST细胞进行病毒分离,24h后在接种脾脏上清的细胞中可见细胞聚集、融合等细胞病变。PCR检测和序列测定结果表明,分离的病毒为猪伪狂犬病毒,命名为JL1株。动物回归试验结果表明,该分离毒株对2月龄仔猪具有较强的致病性。2.PRV流行变异株JL1株主要基因的遗传变异分析设计合成特异性引物,对PRV JL1株TK、gI、gD、gE和gB基因进行克隆测序,并与GenBank上发表的国内外毒株基因序列进行比较和遗传进化分析。PRV JL1株TK、gI、gD、gE和gB基因与国内外其他参考毒株的核苷酸同源性为99.4%~100%,95.5%~99.9%,98.3%~99.9%,97.6%~99.9%和98.1%~99.9%;氨基酸同源性为98.8%~99.7%,92.4%~99.5%,96.5%~99.5%,95.5%~99.5%和96.4%~99.6%。各基因核苷酸和氨基酸同源性分析结果表明,JL1株与我国新分离的流行变异株同源性较高,而与国外经典毒株同源性较低。氨基酸多序列分析结果显示,PRV JL1株gE基因第48位和496位各插入一个天冬氨酸(D),与新流行变异株的基因特征一致。同时gD基因、gI基因和gB基因分别有不同数量的氨基酸的插入和缺失。结果表明,JL1株的缺失变异情况与国内新流行变异株如JS-2012株相同。遗传进化分析结果表明,PRV JL1株与国内近年来分离的流行变异毒株亲缘关系较近,而与国内外分离的经典毒株亲缘关系较远。以上结果均表明,PRV JL1株属于国内近几年分离的新流行变异毒株。3.PRV流行变异株JL1株gE基因缺失转移载体的构建通过对gE基因同源臂gEL和gER以及EGFP基因进行扩增,酶切,连接和克隆等方法,将gEL,EGFP和gER连接到pBluescript IISK表达载体上,构建PRV gE基因缺失转移载体pSK-gELR-EGFP。经酶切和测序结果鉴定,该转移载体构建成功。此外,采用FuGENE~?HD转染试剂,将构建好的转移载体转染于PK-15细胞,通过倒置荧光显微镜可在转染细胞中观察到绿色荧光。以上结果表明,构建并获得了gE基因缺失转移载体,并且该转移载体能够在PK-15细胞内表达。本研究从分离的PRV流行变异株JL1株的遗传进化和分子特征分析可知,该毒株为PRV流行变异毒株,与国外毒株尤以Bartha毒株存在较大的遗传差异,为进一步解释中国Bartha疫苗免疫猪场再次突发PR的原因提供理论依据;同时,成功构建带有筛选标记EGFP的gE基因缺失转移载体,为gE基因缺失疫苗株的构建和新型疫苗的研制奠定基础。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2018-06-01）

转移载体论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)基因是与高间接胆红素血症有关的最重要的基因。溶质载体阴离子转运蛋白家族1B基因(SLCO1B)在胆红素代谢过程中的重要性也越来越被认识到。本研究旨在探讨UGT1A1和SLCO1B基因的突变对中国成人轻度高间接胆红素血症的影响。方法本研究纳入148名高间接胆红素血症患者和158名正常对照,收集其临床资料,并检测

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

转移载体论文参考文献

[1].任婉婉.打造中部地区技术转移新高地[N].洛阳日报.2019

[2].白洁,罗磊,梁晨,郑素军,段钟平.尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因和溶质载体阴离子转运蛋白家族1B基因突变与高间接胆红素血症的相关性研究[C].第十届全国疑难及重症肝病大会论文汇编.2019

[3].拓昊苑,路风中,张元元,于好强,付凤玲.利用转移PCR技术构建玉米SnRK2基因家族表达载体[J].核农学报.2019

[4].黄思哲.CRISPR/Cas9编辑C-erbb-2基因超声微泡靶向载体的构建及对子宫内膜癌细胞增殖转移的影响[D].南华大学.2019

[5].何小莉.PRV变异株GZDZ2016的分离鉴定与TK基因缺失转移载体的构建[D].贵州大学.2019

[6].咸文.PRV变异株GZYY2015的分离鉴定与gE基因缺失转移载体的构建[D].贵州大学.2019

[7].谢文远.全市沪昆百里工业走廊基本建成[N].邵阳日报.2019

[8].罗兵,韩永笑,张淇鑫,郭浩,李红梅.水稻UDP-N-乙酰葡萄糖胺酰基转移酶基因(OsLpxA)RNA干扰载体的构建及遗传转化[J].分子植物育种.2018

[9].陆晓华.26家国际合作载体助力技术转移[N].苏州日报.2018

[10].张姗姗.猪伪狂犬病病毒流行变异株JL1株分离鉴定及gE基因缺失转移载体的构建[D].吉林农业大学.2018

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