导读:本文包含了细胞分离培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,内皮,干细胞,生物学,纤维,特性,北京鸭。
细胞分离培养论文文献综述
李婷婷,许龙,梁峻[1]（2019）在《北京鸭肝间充质干细胞分离、培养及分化潜能研究》一文中研究指出试验旨在研究北京鸭肝间充质干细胞(liver mesenchymal stem cells,LMSCs)的分离、培养、鉴定及多向分化潜能等生物学特性。取孵化19日龄健康鸭胚通过酶消法分离出北京鸭LMSCs,进行体外培养,通过免疫荧光、RT-PCR和流式细胞术等技术对北京鸭LMSCs特异性标记物(CD29、CD44、CD71、CD73、CD90、CD105、CD133及CD166)进行检测,因北京鸭LMSCs分离过程中会存在少量造血干细胞,所以对造血干细胞特异性标记物CD31、CD34进行检测,同时对细胞进行成脂和成骨的分化诱导,检测其多向分化潜能。结果显示,通过酶消法获得的北京鸭LMSCs具有间充质干细胞特异性标记物,造血干细胞特异性标记物为阴性表达,证明其为肝间充质干细胞,且向成脂肪细胞和成骨细胞分化诱导。RT-PCR检测结果发现,成脂分化诱导中,过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、脂蛋白酶(lipoprotein lipase,LPL)呈阳性表达;成骨分化诱导中,Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和Runt相关转录因子2 (Runt-related transcription factor 2,RUNX2)呈阳性表达。北京鸭LMSCs较强的自我增殖能力可使畜禽遗传资源有无限利用的可能性,多向分化潜能强则说明重编程的水平较低,对畜禽种质资源的复原有巨大的优势,为组织再生研究提供了一定的理论基础,对于畜禽资源的开发与利用打开了一个更为宽广的平台。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年10期）
陈世钻,俞富祥,陈俊予,唐银河[2]（2019）在《肝细胞、肝窦内皮细胞分离培养及肝细胞支架的制备》一文中研究指出目的:探究大鼠肝细胞、肝窦内皮细胞的分离培养方法及肝去细胞支架的制备方法。方法:用胶原酶IV消化肝脏组织后经洗涤、过滤、离心等步骤分离出大鼠肝细胞,然后置于培养基内进行纯化、培养后行细胞免疫组织化学检测;通过Percoll密度梯度离心法分离出肝窦内皮细胞置于培养基内纯化、培养后行免疫荧光检测;肝组织经循环灌注去细胞处理制备成大鼠肝细胞去细胞支架后经扫描电镜证实。结果:分离出的大鼠肝细胞在显微镜下呈光亮圆形,饱满,胞核清晰。肝细胞细胞角蛋白18免疫组织化学染色后见胞浆内存在棕黄色颗粒。肝窦内皮细胞呈梭形,细胞核位于中央。内皮素-1免疫荧光染色后细胞表面呈红色信号。制备成的大鼠肝脏去细胞支架在扫描电镜下显示细胞外基质保留,无细胞核及细胞质成分。结论:成功分离出了肝细胞和肝窦内皮细胞并成功制备了肝去细胞支架。(本文来源于《温州医科大学学报》期刊2019年09期）
刘琴,陈芳,朱以良,张宜[3]（2019）在《一种新的佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞分离培养法》一文中研究指出目的采用悬浮组织块法建立一种新的、操作简单的佐剂性关节炎新西兰大白兔模型成纤维样滑膜细胞体外分离培养法。方法选择健康新西兰大白兔16只,随机分为2组:正常组和模型组,每组8只。对模型组多点多次注射弗氏完全佐剂制备佐剂性关节炎模型,取膝关节滑膜组织,分别采用悬浮组织块法、组织块贴壁法分离培养佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞,观察细胞生长状况及形态特征,用CCK-8法检测细胞活力,免疫荧光法鉴定波形蛋白的表达情况。结果模型组兔足跗关节及足趾部较正常组明显肿胀,解剖兔足趾部后肉眼可见模型组伴有明显的微血管增生和炎症。H-E染色结果显示,正常组兔膝关节滑膜细胞呈串珠样规则排列,而模型组滑膜细胞排列紊乱,提示佐剂性关节炎新西兰大白兔模型制备成功。悬浮组织块法和组织块贴壁法操作所需时间分别约为25 min、1 h,分离所得细胞的形态、活性相似,波形蛋白阳性率分别为98.01%、98.35%。结论悬浮组织块法可成功分离培养出佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞,操作简单,所需时间短。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2019年07期）
陈瑞平,吴楚漫,周文怡,姜浩东,吴越[4]（2019）在《Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析》一文中研究指出本文旨在建立快速获取豚鼠耳朵成纤维细胞的方法,为豚鼠体细胞重编程技术提供起始细胞。首先采用0. 05%Trypsin-EDTA和Collagenase IV两种消化酶对脱毛后的耳朵组织碎块进行消化;然后对获取的细胞进行体外培养和形态学观察,支原体检测,Vimentin蛋白免疫荧光鉴定,测定细胞生长曲线计算细胞倍增时间;用绿色荧光蛋白的逆转录病毒感染后用流式细胞仪检测感染效率,核型鉴定检测病毒对核型的影响。分离的豚鼠耳朵成纤维细胞为贴壁生长细胞,消化后2～3 h即大部分贴壁并基本完全伸展,细胞呈梭形或多角形,胞浆饱满,立体感强,细胞核清晰形态良好,支原体检测阴性。细胞表达成纤维细胞特异性蛋白Vimentin。生长曲线为S形,符合体外培养细胞正常生长增殖规律,细胞倍增时间为24. 85 h。逆转录病毒感染效率达75. 6%,病毒感染后染色体2n=64的细胞占90%,遗传稳定核型正常。本研究提供的体细胞获取方法操作简单,效率高,获取的细胞状态良好,细胞增殖速度快,细胞感染率高,是一种非常合适的豚鼠耳朵成纤维细胞分离手段,为后续进一步研究豚鼠体细胞重编程提供了技术基础。(本文来源于《激光生物学报》期刊2019年03期）
向俊西,刘鹏,田波彦,李青山,杨丽斐[5]（2019）在《肝癌实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞分离培养方案的优化》一文中研究指出目的分离培养人原发性肝癌(肝癌)实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAF),并检测其生物学特性。方法标本来源于2015年9月至2016年10月西安交通大学第一附属医院15例肝癌患者手术切除新鲜肝癌组织。其中男12例,女3例;年龄28～64岁,中位年龄45岁;肝细胞癌13例,胆管细胞型肝癌2例。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。采用胶原酶消化法分离培养人原代肝癌细胞及CAF。倒置显微镜下观察肝癌实质及CAF的形态特征。CCK-8法测定细胞活性,免疫荧光鉴定肝癌细胞标志物AFP及CAF标志物波形蛋白(Vimentin)表达。结果原代肝癌实质细胞培养成功率为2/15,CAF培养成功率为11/15,均为肝细胞癌。肝癌实质细胞为上皮样细胞,铺路石样分布。CAF为长梭形或多角形,呈"鱼群样"分布。肝癌细胞与CAF生长状态良好,增殖活跃,呈对数型生长,CAF的增殖能力略强于肝癌细胞。免疫荧光染色显示原代肝癌细胞质中AFP染色阳性,CAF中Vimentin蛋白表达阳性。结论采用胶原酶消化法可以成功获得高增殖活性的人原代肝癌实质细胞及CAF。(本文来源于《中华肝脏外科手术学电子杂志》期刊2019年03期）
李珂雅,石桂英,高舒平,白琳,秦川[6]（2019）在《小鼠、大鼠、食蟹猴与人的脂肪干细胞分离培养方法和生物学特性的比较分析》一文中研究指出目的比较分析实验动物脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)与人脂肪间充质干细胞的分离培养方法和生物学特性的差异,为自体脂肪干细胞移植治疗人类疾病的临床前研究提供临床前的实验数据和方法。方法将临床患者、食蟹猴、C57小鼠和SD大鼠的皮下脂肪组织进行分离培养后得到人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)、食蟹猴脂肪间充质干细胞(cynomolgus monkey adipose-derived mesenchymal stem cells,c ADSCs)、小鼠脂肪间充质干细胞(mouse adipose-derived mesenchymal stem cells,m ADSCs)和大鼠脂肪间充质干细胞(rat adipose-derived mesenchymal stem cells,r ADSCs);采用流式细胞术鉴定ADSCs表面标记物;细胞成脂、成骨诱导分化,于诱导后21 d和28 d固定染色,鉴定ADSCs的成脂成骨分化能力。结果 h ADSCs、c ADSCs、m ADSCs和r ADSCs的分离培养方法类似,贴壁培养后均呈成纤维细胞样生长;流式检测显示,不同物种ADSCs间充质干细胞表面标记物CD90、CD29为阳性,少量表达造血干细胞标记物CD34,血管内皮细胞标记物CD31为阴性。成脂和成骨分化能力检测显示,h ADSCs、c ADSCs、m ADSCs和r ADSCs和均具有成脂成骨分化能力,但其成脂成骨分化的时间略有差异。结论实验动物ADSCs与h ADSCs采用相同的分离培养方法,有类似的表面标记物表达及成脂成骨分化潜能,生物学特性具有一致性,是自体脂肪干细胞移植临床前研究的良好模型。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2019年06期）
刘钊[7]（2019）在《小鼠骨髓淋巴管内皮祖细胞分离培养与鉴定》一文中研究指出目的在小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)的基础上,分离淋巴管内皮祖细胞(LEPCs),并引入外源性血管内皮生长因子-C(VEGF-C)进行干预,完善小鼠淋巴内皮祖细胞(LEPCs)体外分离、培养及诱导分化的实验方法。方法1、研究以C57BL/6小鼠为对象,通过改良差时贴壁法收集48小时内未贴壁的细胞,并使用EGM-2MV培养基培养至第叁代,从而分离纯化骨髓细胞中的内皮祖细胞(EPCs)。2、使用流式细胞仪检测第叁代细胞表面标记物CD34、CD133、VEGFR-3,并分析VEGFR-3+CD34+细胞和VEGFR-3+CD133+细胞在EPCs中所占的百分比。3、通过流式细胞术分选出表面标记物血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)阳性的细胞,并使用免疫荧光化学法鉴定其表面CD34、CD133的分布及表达情况。4、将流式细胞仪分选出的LEPCs培养至第3代,用MTT比色法检测LEPCs增殖能力。5、引入外源性血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对LEPCs进行诱导分化,光镜下观察LEPCs形态变化,诱导分化28天后通过免疫荧光化学法检测淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)表达情况。6、用50ng/ml、100ng/ml及150ng/ml叁组不同浓度VEGF-C对LEPCs进行诱导分化,通过免疫荧光化学法检测LYVE-1在叁组中的表达情况。结果1、流式细胞仪检测结果VEGFR-3+CD34+细胞占EPCs细胞的0.67%,VEGFR-3+CD133+细胞占EPCs细胞的1.52%。免疫荧光化学法检测显示流式细胞仪分选出VEGFR-3+细胞的细胞膜上同时表达CD34及CD133,即分选的细胞为LEPCs。2、LEPCs体外增殖能力较强,前3天细胞数量无明显变化,第4天开始进入对数生长期,第11天后进入平台期,生长曲线呈现“S”形。3、LEPCs经过VEGF-C诱导分化用免疫荧光化学法检测其表面表达淋巴管内皮特殊标记物LYVE-1。4、浓度为100ng/ml的VEGF-C是体外诱导分化小鼠骨髓LEPCs的理想浓度结论通过差时贴壁法和流式细胞仪可从小鼠骨髓中分离提纯LEPCs,EGM-2MV培养基可扩增LEPCs,VEGF-C可诱导LEPCs向淋巴管内皮细胞分化。(本文来源于《石河子大学》期刊2019-05-01）
梁杰玲[8]（2019）在《一种简单高效的原代心肌细胞分离培养方法及毛郁金抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的活性成分研究》一文中研究指出目的:对新生SD大鼠原代心肌细胞(NRCMs)的分离培养方法进行改良,建立简单高效的NRCMs分离技术,为心血管疾病药物活性筛选提供模型和技术新方法;建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型,并进行NRCMs对药物的活力反应检测;应用所建立的模型研究毛郁金对H/R损伤心肌细胞起保护作用的活性成分。方法:(1)新生大鼠心室肌先用0.06%胰蛋白酶消化,接着应用不同的消化酶进行消化:0.06%胰蛋白酶消化(I);0.08%胶原酶II(II);0.06%胰蛋白酶和0.08%胶原酶II逐步消化(III);与方法III相同的消化步骤(IV);直至组织块完全消失后,加入完全培养基使消化终止,将细胞悬液过100μm BD塞除去组织絮状物;前叁种消化方法(I,II,III),分别在400 g下离心10 min;方法IV过滤后的细胞悬液直接差速贴壁培养,不经过离心步骤。用台盼蓝染色法检测分离的细胞数量和存活率;倒置显微镜下连续15天观察记录各组细胞形态学和自发性搏动率的变化;共聚焦免疫荧光法评估各组NRCMs的纯度。(2)应用氮气避氧法建立上述方法I~IV的NRCMs和H9c2心肌细胞的H/R损伤模型,平行对照实验测定这些模型心肌细胞对毛郁金乙酸乙酯部位的活力反应,以进一步验证改良分离NRCMs方法(IV)的可靠性。(3)MTT法检测毛郁金各部位抗心肌细胞H/R损伤的活性,借助试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、一氧化氮(NO)的含量以及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,以说明各部位抗心肌细胞H/R损伤的作用机理。(4)应用MTT法对抗心肌细胞H/R损伤活性最佳部分的化合物进行活性筛选。结果:胰蛋白酶和胶原酶II逐步消化直接培养法(IV)在细胞形态学、自发性搏动率、对药物活性反应结果没有显着性差异,但其细胞存活率、细胞纯度比传统单一胰蛋白酶消化法(I)更具有优势(p<0.05);毛郁金乙酸乙酯部位、正丁醇部位、70%乙醇提取物各浓度均可显着提高NRCMs和H9c2心肌细胞H/R损伤后的存活率并呈现良好的剂量依赖关系,可以显着降低H/R损伤后心肌细胞的LDH、AST、MDA、NO的含量(p<0.05),提高SOD的含量(p<0.05);毛郁金各部位抗心肌细胞H/R损伤活性作用大小排序为:乙酸乙酯部位>正丁醇部位>70%乙醇提取物>石油醚部位>水层部位;前期从乙酸乙酯部位中分离提取得到的化合物CAW-2(Curcumol)、CAW-5(Methylzdoarondiol)、CAL-1(aromaticain A)、CAL-2(aromaticain B)、姜黄素可显着提高心肌细胞H/R损伤后的存活率,并表现出良好的剂量依赖性(p<0.05)。结论:胰蛋白酶和胶原酶II逐步消化直接培养法(IV)得到的细胞形态学变化稳定、自发性搏动率良好、纯度高、反应性好,是一种简单方便、省时高效、稳定分离原代心肌细胞的可靠的方法;毛郁金70%乙醇提取物、乙酸乙酯部分、正丁醇部位对H/R损伤的心肌细胞具有明显的保护作用,且乙酸乙酯萃取物呈现出强的活性作用并具有良好的剂量依赖性,其主要作用机制可能与清除细胞氧自由基、减少胞内脂质过氧化物产生、稳定细胞膜系统以及抑制NO生成或释放从而抑制细胞凋亡有关;从毛郁金乙酸乙酯部位分离得到的化合物CAW-2、CAW-5、CAL-1、CAL-2、吉马酮以及姜黄素有良好的抗心肌细胞H/R损伤活性。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
许素铭,王耀琴,朱鹏飞,李宵,王春芳[9]（2019）在《人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性》一文中研究指出目的:建立原代人卵巢颗粒细胞(hGCs)的分离培养方法,观察其生物学特性。方法:取卵日,收集hGCs,分为对照组(DMEM培养基)和实验组(DMEM培养基∶卵泡液=1∶1)进行培养。比较2组hGCs的生长状态和雌激素分泌情况。利用RT-qPCR检测Nanog、Oct4、Sox2的表达,应用流式细胞术检测CD44、CD73、CD45的表达。结果:hGCs培养24 h贴壁良好,细胞间伸出伪足。对照组和实验组分别在培养14 d和21 d后出现凋亡。实验组雌激素的分泌显着增加,第9天出现高峰,第21天显着下降。培养第7天实验组Oct4和Nanog mRNA表达显着增加。培养7 d后,CD44、CD73表达阳性, CD45表达阴性。结论:该方法简单、有效,可获得大量hGCs。培养基中添加卵泡液有益于hGCs的生长,增加培养天数。同时hGCs可分泌雌激素并具有一定的干细胞特性。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2019年02期）
刘维海,王鹏,杨军[10]（2019）在《大鼠毛囊神经嵴干细胞分离培养及鉴定》一文中研究指出目的:采用显微分离+组织块贴壁法培养大鼠毛囊神经嵴干细胞(hf NCSC)。方法:显微分离SD大鼠触须部毛囊膨凸部(bugle),采用组织块贴壁法培养毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态。采用免疫荧光多重标记法检测Nestin和神经营养素受体p75(p75NTR)的表达。结果:用显微分离+组织块贴壁法可成功获得毛囊神经嵴干细胞,倒置显微镜下观察细胞活性好,形态多样,以梭形为主,也可见叁角形、椭圆形细胞,核大而明显,多居于胞质一侧。免疫荧光鉴定显示细胞Nestin和p75NTR双阳性。结论:从SD大鼠触须部毛囊bugle区成功分离到毛囊神经嵴干细胞。(本文来源于《神经解剖学杂志》期刊2019年02期）
细胞分离培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探究大鼠肝细胞、肝窦内皮细胞的分离培养方法及肝去细胞支架的制备方法。方法:用胶原酶IV消化肝脏组织后经洗涤、过滤、离心等步骤分离出大鼠肝细胞,然后置于培养基内进行纯化、培养后行细胞免疫组织化学检测;通过Percoll密度梯度离心法分离出肝窦内皮细胞置于培养基内纯化、培养后行免疫荧光检测;肝组织经循环灌注去细胞处理制备成大鼠肝细胞去细胞支架后经扫描电镜证实。结果:分离出的大鼠肝细胞在显微镜下呈光亮圆形,饱满,胞核清晰。肝细胞细胞角蛋白18免疫组织化学染色后见胞浆内存在棕黄色颗粒。肝窦内皮细胞呈梭形,细胞核位于中央。内皮素-1免疫荧光染色后细胞表面呈红色信号。制备成的大鼠肝脏去细胞支架在扫描电镜下显示细胞外基质保留,无细胞核及细胞质成分。结论:成功分离出了肝细胞和肝窦内皮细胞并成功制备了肝去细胞支架。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞分离培养论文参考文献
[1].李婷婷,许龙,梁峻.北京鸭肝间充质干细胞分离、培养及分化潜能研究[J].中国畜牧兽医.2019
[2].陈世钻,俞富祥,陈俊予,唐银河.肝细胞、肝窦内皮细胞分离培养及肝细胞支架的制备[J].温州医科大学学报.2019
[3].刘琴,陈芳,朱以良,张宜.一种新的佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞分离培养法[J].第二军医大学学报.2019
[4].陈瑞平,吴楚漫,周文怡,姜浩东,吴越.Hartley豚鼠耳朵成纤维细胞分离培养与鉴定分析[J].激光生物学报.2019
[5].向俊西,刘鹏,田波彦,李青山,杨丽斐.肝癌实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞分离培养方案的优化[J].中华肝脏外科手术学电子杂志.2019
[6].李珂雅,石桂英,高舒平,白琳,秦川.小鼠、大鼠、食蟹猴与人的脂肪干细胞分离培养方法和生物学特性的比较分析[J].中国比较医学杂志.2019
[7].刘钊.小鼠骨髓淋巴管内皮祖细胞分离培养与鉴定[D].石河子大学.2019
[8].梁杰玲.一种简单高效的原代心肌细胞分离培养方法及毛郁金抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的活性成分研究[D].广西医科大学.2019
[9].许素铭,王耀琴,朱鹏飞,李宵,王春芳.人卵巢颗粒细胞分离培养的优化及生物学特性[J].解剖学杂志.2019
[10].刘维海,王鹏,杨军.大鼠毛囊神经嵴干细胞分离培养及鉴定[J].神经解剖学杂志.2019
论文知识图
