论文摘要
目的用定点自旋标记-电子顺磁共振（SDSL-EPR）技术检测自噬相关蛋白LC3B功能结构域上特定氨基酸位点的运动特性。方法采用序列重叠延伸PCR（SOE-PCR）法对LC3B蛋白NHD结构域α1螺旋Q9位点、ULD结构域α3螺旋N59位点以及口袋结构内部β1折叠135位点引入半胱氨酸（cysteamine,Cys）突变,表达纯化获得LC3B突变体蛋白;甲烷硫代磺酸（2,2,5,5-tetramethyl-1-oxyl-3-methyl methanethiosulfonate,MTSL）自旋标记后进行电子顺磁共振（EPR）检测,通过计算EPR波谱旋转相关时间τc,分析不同氨基酸位点的运动特性。结果构建了LC3B突变体基因的原核表达载体pET-22b-LC3B,实现了蛋白的可溶性高效表达;Q9C和N59C位点EPR波谱呈现双成分叠加谱,Q9C位点不同运动成分的τc值分别为1和3.8 ns,N59C位点为1和3.4 ns;I35C位点为三成分叠加谱,其τc值分别为0.7、2.9和8.1 ns。结论存在于特定氨基酸位点的运动性差别,预示着溶液状态下LC3B蛋白各功能结构域的同一氨基酸位点处可能存在不同的构象特征。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 赵曦,董国福,马蕾,郭俊旺,吴可
关键词: 自噬相关蛋白质类,旋转相关时间,运动性
来源: 军事医学 2019年09期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 基础医学
单位: 军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所
基金: 国家自然科学基金项目(31800053)
分类号: R341
页码: 664-668
总页数: 5
文件大小: 1825K
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标签：自噬相关蛋白质类论文; 旋转相关时间论文; 运动性论文;