布鲁氏菌vceA基因缺失株的构建及生物学特性研究

论文摘要

试验旨在构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统vceA基因缺失株,分析其生长特征及其在人胚胎滋养层细胞（HPT-8）中的存活能力。以布鲁氏菌S2308为模板,PCR扩增vceA基因上、下游同源臂,以pUC19K质粒为模板扩增kan基因,然后利用融合PCR技术将3段基因进行融合,再将此片段与pMD19-T载体连接,电转至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,构建ΔvceA基因缺失株（S2308ΔvceA）,通过卡那抗性对缺失株进行连续筛选,并检测其遗传稳定性。在相同培养条件下,观察亲本株S2308和S2308ΔvceA的生长变化趋势,以侵染复数（MOI）100∶1侵染HPT-8细胞,通过CFU计数检测亲本株S2308和缺失株S2308ΔvceA在细胞内的生存能力。结果显示,试验成功获得片段大小为372、510、1 093 bp的vceA基因上、下游同源臂和kan基因;且成功构建pMD19-T-vceA-kan自杀载体,将其电转入大肠杆菌DH5α感受态细胞,构建基因缺失株,连续传代10次未发现基因回复突变;在体外相同培养条件下,缺失株S2308ΔvceA与亲本株S2308生长趋势相似,均在12 h达到对数生长期,30 h进入平台期;侵染HPT-8细胞12 h时,缺失株S2308ΔvceA在细胞中的数量显著低于亲本株S2308（P<0.05）。综上所述,本试验成功构建并获得了具有良好遗传稳定性的布鲁氏菌vceA基因缺失株,该缺失株在体外培养条件下与亲本株生长趋势相似;但该缺失株在HPT-8细胞内的存活能力显著变弱。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王小凤,李明奇,郭嘉,赵天艺,刘航,张樊,孙晓露,何家琪,王震,张辉

关键词: 布鲁氏菌,基因缺失株,生长曲线,生物学特性

来源: 中国畜牧兽医 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 石河子大学动物科技学院动物疾病防控兵团重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31460650),兵团人才项目(CZ027202,2017CB002),国家SRP项目(201810759011)

分类号: S852.61

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.04.004

页码: 986-993

总页数: 8

文件大小: 1233K

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