论文摘要
DNA甲基化修饰是一种重要的表观遗传修饰现象,它在基因表达调控、基因组稳定性维持和细胞分化方面起关键作用[1]。DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）异常表达导致的DNA甲基化与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关,被认为是抗癌治疗和药物筛选的潜在药靶[2]。目前,检测DNMT的传统方法主要有放射性物质标记法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、凝胶电泳法等[2-4]。这些方法虽然能够实现对DNMT的灵敏测定,但却存在局限性,比如操作过程繁杂、放射性物质的参与、耗时、仪器昂贵且需专业人员操作等,制约了该类方法的广泛使用。因此急需发展具有高灵敏性、高选择性、简单快速的新方法用于DNA甲基转移酶的分析。本研究利用核酸外切酶的高效特异性水解能力,以聚阳离子鱼精蛋白为媒介,构建新型信号放大策略,结合磁性纳米材料的高效富集特性及金纳米粒子优异的光学性能,发展了一种通用型磁控功能化纳米光学探针用于检测DNA甲基转移酶。本体系中以单克隆抗体修饰的磁性纳米粒子作为捕获探针,多克隆抗体/核酸外切酶共修饰的金纳米粒子作为信号探针。当溶液中不存在DNA甲基转移酶时,捕获探针表面无信号探针,此时,聚阳离子鱼精蛋白优先和带负电荷单链DNA发生静电相互作用,金纳米粒子呈现良好的分散状态颜色保持本身的红色;当溶液中存在DNA甲基转移酶时,由于抗原-抗体的特异性结合,使得信号探针被吸附在捕获探针表面,此时,信号探针携带的核算外切酶会将单链DNA水解,于是体系中自由态的鱼精蛋白与金纳米粒子发生相互静电作用导致金纳米粒子发生聚集,吸光度值也随之发生变化。基于此,实现了对DNA甲基转移酶的定量分析。本方法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等优势,为生物标志物的分析提供了新的选择。
论文目录
文章来源
类型: 国内会议
作者: 林浩,付秀丽,文嘉慧,李婧闻
关键词: 甲基转移酶,磁性纳米材料,鱼精蛋白,金纳米粒子
来源: 中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会 2019-11-22
年度: 2019
分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑
专业: 生物学,化学
单位: 烟台大学化学化工学院
分类号: O657.3;Q503
DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.078907
页码: 169
总页数: 1
文件大小: 1001k