CRISPR/Cas9系统介导的miR-155基因敲除细胞的制备

论文摘要

为研究miR-155基因在猪肺泡巨噬细胞系（3D4/21）中的功能,采用CRISPR/Cas9系统构建miR-155敲除的猪肺泡巨噬细胞系。首先,采用sgRNA-cas9程序,设计4个靶向miR-155的特异性sgRNA引物序列。然后构建sgRNA表达载体,与pEGFP-C1-cas9载体共转染3D4/21细胞,进行流式分选并富集表达绿色荧光蛋白GFP的细胞。最后,采用T7E I酶酶切、Sanger测序、实时荧光定量PCR（qPCR）、western blot等方法检测敲除效率,发现miR-155基因可以被以上4个sgRNA编辑,其中sgRNA39的敲除效率最高,T7E I酶酶切检测流式分选后的敲除效率有42%;Sanger测序显示sgRNA39细胞系敲除31个碱基;RT-qPCR结果显示miR-155-5p/3p表达量均有下降;western blot结果表明miR-155靶基因SHIP1的蛋白表达量升高。成功构建miR-155敲除的3D4/21细胞为进一步探讨miR-155在巨噬细胞发挥的调控功能研究提供细胞模型。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李聪聪,张永辉,赵婉霞,吴姣,韩浩园,李梦云,牛晖,宋素芳,李婉涛

关键词: 敲除,猪肺泡巨噬细胞

来源: 生物技术通报 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 河南牧业经济学院动物科技学院,郑州市动物生殖分子调控重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目（31702102）,河南省高等学校重点科研项目（18A230002）,河南牧业经济学院博士启动资金项目（53000139）,郑州市1125创新领军人才项目（2016XL003）

分类号: Q78

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0609

页码: 231-239

总页数: 9

文件大小: 3656K

下载量: 361

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标签：敲除论文;  猪肺泡巨噬细胞论文;