导读:本文包含了铁超载论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:铁超载,窘境,客流,退票,一票,休假制度,车次,黑名单,赔偿责任,让人
铁超载论文文献综述
吴云青[1]（2019）在《“买短补长”高铁超载，窘境如何破》一文中研究指出这个“五一”小长假，出现了一种以往比较少见的现象：一些热门线路高铁超载，导致部分旅客明明有票，却上不去车。高铁超载是因为太多乘客“买短补长”，对于持票上不去车的旅客，铁路部门答应全额退票。所谓“买短补长”，就是长途票买不到，于是买短途票上车后再(本文来源于《南京日报》期刊2019-05-05）
周琼琳[2]（2019）在《MCU依赖性线粒体铁超载诱导线粒体自噬介导apelin-13促人主动脉血管平滑肌细胞增殖》一文中研究指出目的:Apelin是七次跨膜G蛋白偶联受体APJ的内源性配体,在心血管系统和相关疾病的发展中起着重要的生物学作用。实验室前期的研究结果表明,apelin-13具有促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用,并且发现自噬途径参与apelin-13促VSMC增殖的过程。线粒体钙离子单向转运体(MCU)也是一种铁离子通道,阻断MCU通道可显着影响线粒体中铁的转运。铁超载是指全身器官中包括心脏、血管、肝脏和内分泌腺在内的铁离子过度沉积。线粒体铁超载会催化芬顿反应导致羟基自由基的产生并调节细胞增殖。本课题旨在探讨apelin-13对MCU、线粒体铁超载、线粒体活性氧和线粒体自噬的影响,并在前期研究的基础上探讨MCU依赖性线粒体铁超载诱导线粒体自噬介导apelin-13促HA-VSMCs增殖的分子机制,揭示apelin-13/APJ系统诱导VSMCs增殖的新作用机制为靶向APJ受体分子抗AS的新治疗靶标提供理论依据。方法:1.Western Blot检测HA-VSMCs中MCU,Drp1,PINK1,Parkin,VDAC1,Tom20,PCNA的表达;2.RNA干扰:干扰链SiRNA-Drp1,SiRNA-PINK1和SiRNA-Parkin抑制HA-VSMCs中Drp1,PINK1和Parkin的表达;3.流式细胞术检测HA-VSMCs中G1,S,G2/M的细胞百分比;4.透射电子显微镜术观察HA-VSMCs中线粒体自噬的形成;5.免疫荧光技术观察HA-VSMCs中线粒体与LC3的共定位;6.免疫组织化学观察人尸检动脉粥样硬化斑块血管组织与双肾双夹高血压大鼠血管组织中MCU,Drp1的表达;7.RPA红色荧光探针检测HA-VSMCs中的线粒体铁的含量;8.Mito-SOX红色荧光探针检测HA-VSMCs中线粒体ROS的产生;9.BCA蛋白质定量试剂盒检测HA-VSMCs中蛋白质的浓度。结果:1.与正常冠状动脉人的血管组织标本相比,动脉粥样硬化病人冠状动脉的血管组织标本中MCU、Drp1的表达增加,线粒体铁含量表达增加;与正常的大鼠主动脉血管组织标本相比,双肾双夹高血压大鼠主动脉血管组织标本中MCU、Drp1的表达增加,线粒体铁含量表达增加;2.Apelin-13浓度(0-1μM,24h)及时间(0-24h)依赖性促进HA-VSMCs中MCU的表达;APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13促HA-VSMCs中MCU的表达;3.Apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体铁超载:APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体铁超载;MCU抑制剂Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体铁超载;4.Apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体ROS的生成:APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体ROS的生成;枸橼酸铁负载铁剂FAC进一步提高apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体ROS的生成;反之,MCU抑制剂Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体ROS的生成;5.APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的Drp1的表达;MCU抑制剂Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的Drp1的表达;线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的Drp1的表达;6.透射电子显微镜术结果显示apelin-13能诱导HA-VSMCs中线粒体自噬的形成;线粒体分裂抑制剂Mdivi-1抑制由apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体自噬的形成;免疫荧光发现Apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体与LC3共定位,而Mdivi-1和SiRNA-Drp1减少apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体与LC3共定位;7.线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的PINK1,Parkin,VDAC1,Tom20的表达;Mdivi-1和SiRNA-Drp1抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的PINK1,Parkin,VDAC1,Tom20的表达;8.Western blot发现APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;Mito-TEMPO抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;Mdivi-1和SiRNA-Drp1抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;SiRNA-PINK1和SiRNA-Parkin抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖。结论:MCU依赖性线粒体铁超载诱导线粒体自噬介导apelin-13促HA-VSMCs增殖。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）
李静,周天红,唐卒卒,陈明星,周钧宁[3]（2019）在《广西重型β地中海贫血患者贫血和铁超载现状调查》一文中研究指出目的了解广西重型β地中海贫血(TM)患者的贫血及铁超载状况,为其临床治疗提供基础数据和依据,以改善患者生存质量。方法利用地贫管理系统,统计2011—2017年共7年间就诊于本医院的1029名TM患者资料,共测定输血前血红蛋白(Hb)12 119次、血清铁蛋白(SF)4834次,分析Hb、SF的整体情况;每1年的平均Hb、SF情况;不同年龄患者的Hb、SF情况,利用SPSS软件对相关数据进行分析处理。结果患者输血前Hb>90 g/L、(60—90)g/L、(30—60)g/L、<30 g/L分别为28.9%(297/1 029)、49.1%(505/1 029)、19.4%(200/1 029)和2.6%(27/1 029),Hb平均水平与年份及年龄均无明显相关性。87.3%(898/1 029)的TM患者铁超载,46.8%(482/1 029)为重度铁超载(SF>2 500 ng/mL);平均SF水平随着患者年龄的增长呈上升趋势。结论广西的TM患者治疗现状远低于预期,迫切需要加强输血和去铁治疗。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2019年02期）
陈明辉,田娟[4]（2019）在《Ndfip1对神经细胞铁超载损伤的保护作用及机制探讨》一文中研究指出目的探讨Ndfip1过表达对神经细胞SH-SY5Y铁超载损伤的保护作用及机制。方法以SH-SY5Y细胞为细胞模型,并成功构建Ndfip1质粒。应用Ndfip1质粒和空质粒分别转染SH-SY5Y细胞,建立实验组和对照组。MTT法检测不同浓度FeSO_4作用下,SH-SY5Y细胞存活率的变化,确定铁超载浓度;Ndfip1质粒转染SH-SY5Y细胞,确定转染效率;Ndfip1质粒和空质粒分别转染SH-SY5Y细胞,MTT法检测2组细胞存活率的变化;应用Calcein AM法处理细胞,荧光显微镜下观察2组细胞的荧光强度,以确定细胞内铁离子的含量;荧光分光光度计检测2组细胞的荧光强度变化,以确定细胞铁摄入能力的改变。结果随着FeSO_4浓度增加,SH-SY5Y细胞存活率逐渐降低。200μmol/L FeSO_4可导致SH-SY5Y细胞存活率明显下降。Ndfip1质粒转染可明显增加SH-SY5Y细胞Ndfip1蛋白表达量,提高SH-SY5Y细胞铁超载损伤后的存活率,减少细胞内铁离子含量及细胞对铁离子的摄入。结论铁超载对神经细胞造成损伤,导致其存活率降低;Ndfip1可减少铁离子进入神经细胞,减轻神经细胞内铁蓄积,降低铁超载对神经细胞的损伤作用,提高细胞存活率,从而发挥其保护作用。(本文来源于《天津医药》期刊2019年02期）
张惠琴[5]（2019）在《铁超载在骨髓增生异常综合征中的研究进展》一文中研究指出骨髓增生异常综合征(MDS)是以无效造血为特点的异质性克隆性疾病,红细胞输注是其支持治疗的重要组成部分,但长期输血会导致铁超载,产生活性氧(ROS),引起肝脏、心脏等多器官损害,同时,ROS的积累对造血干细胞也有不利影响,可能导致MDS进展,而有效的铁螯合治疗能改善血液学参数,减少并发症的发生,从而提高生存率。本文概述了关于MDS患者铁超载及其对造血系统影响的近期发现,并简要地讨论了螯合疗法在新发展背景下的地位。(本文来源于《海南医学》期刊2019年03期）
陈临溪,唐名珠,吴娣,何璐,黄仕芳[6]（2018）在《铁自噬促Sideroflexin1依赖性线粒体铁超载介导apelin-13促心肌细胞肥大》一文中研究指出目的:本课题拟研究apelin-13对铁自噬及线粒体铁代谢的影响,并在前期研究的基础上探讨铁自噬-线粒体铁离子转运蛋白Sideroflexinl(SFXNl)依赖性线粒体铁超载介导apelin-13促心肌细胞肥大的新机制,揭示apelin-13/APJ系统诱导心肌肥厚的新的作用机制。方法:1、WesternBlot:检测大鼠H9c2心肌细胞NCOA4,FTH1,SFXN1,BNP,LC3II/I的表达;2、分离线粒体并应用WB检测线粒体蛋白的表达;3、RNA干扰:设计RNA干扰链干扰H9c2心肌细胞中NCOA4,SFXN1的表达;4、普鲁士蓝染色法(Prussian blue staining)观察H9c2心肌细胞及心肌组织中铁沉积;5、钙黄绿素(Calcein-AM)荧光探针、流式细胞术、RPA荧光探针检测H9c2心肌细胞中游离铁的变化;6、Mito-SOX荧光探针检测H9c2细胞中线粒体ROS的生成;7、免疫荧光观察NCOA4和LC3B共定位;8、Scepter~(TM)手持细胞计数器测量H9c2心肌细胞的直径和体积;9、BCA试剂金测定H9c2心肌细胞中的蛋白含量;10、免疫组化观察人尸检心肌肥厚心脏组织标本、双肾双夹大鼠肾血管性高血压模型大鼠心脏和外源性注射apelin-13的大鼠心脏组织组织中apelin,BNP,NCOA4,SFXN1蛋白的表达;结果:1、Apelin-13增加H9c2心肌细胞内游离和线粒体内ROS、铁含量;2、Apelin-13剂量及时间依赖性促进H9c2细胞中铁自噬货物受体NCOA4和线粒体转铁蛋白SFXN1的表达,而抑制铁自噬底物铁蛋白(FTH1)的表达;3、APJ拮抗剂F13A和自噬体降解抑制剂-羟基氯喹(HCQ)可阻断apelin-13对NCOA4的诱导作用,以及阻断对FTH1的降解作用;4、Apelin-13促进NCOA4与GFP-LC3B融合;5、透射电子显微镜下观察apelin-13引起H9c2心肌细胞线粒体肿胀及空泡化;6、NCOA4-siRNA抑制apelin-13诱导的心肌细胞内游离铁增加和SFXN1表达;7、SFXN1-siRNA抑制apelin-13诱导的线粒体铁超载以及线粒体ROS生成;8、NCOA4-siRNA、SFXN1-siRNA和靶向-线粒体ROS抑制剂拮抗apelin-13诱导的H9c2心肌细胞直径、体积增大以及心肌肥大因子BNP表达;9、人尸检心肌肥厚心脏标本、双肾双夹肾血管性高血压模型大鼠心脏和外源性注射apelin-13的大鼠心脏组织BNP,apelin,SFXN1呈现高表达,且出现线粒体铁聚集。讨论:该研究表明apelin-13/APJ系统通过铁自噬-SFXN1依赖性线粒体铁过载促心肌肥厚的新调控机制,首次将铁自噬-线粒体铁超载与心肌肥厚联系起来,并扩展对铁自噬在心肌细胞中功能研究。(本文来源于《中国药理学会分析药理学专业委员会成立大会、第叁届全国分析药理学学术大会暨贵州省药学会药学青年专业委员会成立大会论文集》期刊2018-11-23）
赵天宇[7]（2018）在《高铁超载“无力运行”背后的技术经济学》一文中研究指出“本次列车已无力运行,请丹阳北、无锡东短途旅客抓紧时间下车。”今年国庆期间,不少网友被这段高铁上拍摄的视频刷屏,10月1日8时17分左右,当G108列车途经常州北站时,车站开启广播,表示复兴号动车组“超载”了,并要求无票旅客下车。技术先进、时速(本文来源于《北京科技报》期刊2018-10-29）
曹玥,孙梦云,蔡静明,张立加,赵艳[8]（2018）在《miR-34a及其下游基因在铁超载大鼠非酒精性脂肪肝发生过程中的作用》一文中研究指出目的:探讨miR-34a及其下游基因在铁超载大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)发生过程中的作用。方法:将36只5周龄雄性SD大鼠随机分为对照组(基础饲料)、高铁组(含1%FeSO 4的基础饲料)、高脂组(脂肪供能比为35%的高脂饲料)和高脂高铁组(含1%FeSO 4的高脂饲料)。干预12周后,称取大鼠体质量;肝脏油红O染色观察大鼠肝脏中脂质堆积程度;测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测大鼠肝脏中miR-34a、沉默信息调节因子1(SIRT1)及过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的mRNA表达水平,并用Westernblot方法检测SIRT1和PPARα的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,高脂组和高脂高铁组大鼠体质量、血清ALT及miR-34a表达水平均显着增加(P均<0.05),SIRT1及其下游PPARα的mRNA和蛋白表达水平均降低(P均<0.05),肝脏脂质堆积程度加重;与高脂组比较,高脂高铁组SIRT1和PPARα的mRNA和蛋白表达水平均显着降低(P均<0.05)。结论:高脂高铁联合作用,可进一步激活miR-34a的表达,进而抑制其下游基因的表达,从而加重NAFLD大鼠肝脏脂代谢紊乱。(本文来源于《癌变·畸变·突变》期刊2018年05期）
吕小梅,冉兵,杨茂,李雪森,蔺艳[9]（2018）在《硝苯吡啶在铁超载HK-2细胞氧化应激中的作用及机制》一文中研究指出目的研究硝苯吡啶对HK-2细胞铁超载引起的氧化应激的作用和可能的机制。方法 HK-2细胞分成空白组、铁超载组、硝苯吡啶组和共处理组,用柠檬酸铁铵和(或)硝苯吡啶处理细胞24 h后检测细胞丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,谷胱甘肽(GSH)含量,细胞内铁含量以及二价金属离子转运蛋白1(DMT1)和膜铁转运蛋白1(FPN1)的表达。结果与铁超载组相比硝苯吡啶组和共处理组MDA含量降低(P<0.05),T-SOD活性增加(P<0.05),GSH含量增加(P<0.05),细胞内铁含量降低(P<0.05),DMT1表达增加(P<0.05),FPN1表达增加(P<0.05)。结论硝苯吡啶在铁超载HK-2细胞的氧化应激中有保护作用,这一作用与硝苯吡啶促进DMT1和FPN1的表达、降低细胞内铁含量有关。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2018年12期）
吴茜[10]（2018）在《脂肪干细胞体外定向分化为神经元样细胞及其对铁超载的原代皮层神经元保护作用的研究》一文中研究指出第一部分大鼠脂肪干细胞与原代皮层神经元分离、培养与鉴定【背景】脂肪干细胞是来源于脂肪组织的成体间充质干细胞的一种,在多种神经疾病,如退行性变、炎性脱髓鞘、卒中等动物疾病模型中发挥了重要的治疗及神经保护作用。因此本研究旨在探索脂肪干细胞参与神经修复的能力及机制。【目的】体外分离、培养稳定传代的脂肪干细胞和成熟的原代皮层神经元细胞。【方法】脂肪干细胞取材于4-6周龄,体重160 g雌性SD大鼠,大鼠腹股沟区的脂肪组织在无菌条件下取出,切碎,I胶原酶在中消化45分钟,等体积完全培养基终止消化,离心后接种于完全培养基中,3天换液一次,7-8天后根据生长情况予以传代处理。原代大鼠皮层神经元取材于胎龄16-17天的SD胎鼠,剥去脑膜,皮层切碎,胰蛋白酶消化消化15分钟,叁倍体积的完全培养基终止消化,巴氏吸管吹打,细胞接种于多聚赖氨酸包被的培养皿中,4小时后更换为神经元培养基,3天半量换液一次。【结果】体外培养的脂肪干细胞呈纺锤形,贴壁生长,ADSCs高表达CD44(86.69%)和CD29(98.49%),而不表达造血干细胞标志物CD45、极低表达内皮细胞标志物CD34(8.61%)。体外分离培养的原代神经元可在11天至14天发育成熟,胞体大,突起丰富,细胞间互相连接成网,具有神经元的功能。【结论】体外可培养出稳定传代的脂肪干细胞及具有功能的成熟神经元。第二部分脂肪干细胞体外定向分化为神经元样细胞及其初步功能学鉴定【背景】体外培养的脂肪干细胞可在小分子作用下选择性诱导成为神经元样细胞,在神经疾病的治疗中可能发挥重要的功能。是否具有神经元的形态及功能,能否整合形成新的神经网络因此成为近年来研究的热点。【目的】体外定向诱导脂肪干细胞向神经元样细胞分化并探索其功能。【方法】取稳定传代P3代生长良好的脂肪干细胞分两步进行诱导分化。第一步,在含20 ng/ml EGF,20 ng/ml b FGF-2,2%B27的无血清培养基中诱导脂肪干细胞向神经前体细胞悬浮成球分化。采用免疫荧光染色(Nestin、DCX、MAP2)对诱导前后的细胞进行鉴定。第二步,在含2%B27,50ng/ml BDNF,0.5umol/ml RA,10umol/ml Forskolin的无血清分化培养基中诱导神经前体细胞定向向神经元样细胞贴壁分化。采用免疫荧光染色(Nestin、DCX、MAP2)对不同分化时期的细胞进行鉴定。利用活体细胞荧光标记技术(Dio、FM4-64),对神经元样细胞进行初步功能学探索。利用Sholl analysis软件对不同分化时期的神经元样细胞的类突触复杂度进行定量分析。【结果】脂肪干细胞在b FGF、EGF细胞因子的作用下可悬浮成球生长,类似于神经干细胞的形态,神经球早期高表达干细胞标记物Nestin,不表达神经元的标记物MAP2、DCX。神经前体细胞在RA、Forskolin及神经生长因子(BDNF)的作用下可在体外贴壁生长,进一步定向向神经元分化。随着分化时间延长,形态上胞体逐渐增大,透光度下降,伸出突触并连接成网。神经元样细胞早期表达新生神经元的标记物DCX,后期表达成熟神经元的标记物MAP2。随着分化的时间延长,神经元样细胞的突触复杂度逐渐增加。于14天左右,分化成熟的神经元样细胞初具神经元的功能,在高钾离子浓度的刺激下可释放类突触小泡。【结论】脂肪干细胞可经过二步法体外定向分化为神经元样细胞,分化的神经元样细胞初具神经元的功能。第叁部分脂肪干细胞对铁超载的原代皮层神经元的保护作用分子机制研究【背景】脂肪干细胞除了具有自我更新、多向分化的潜能外,还兼具分泌多种生物活性的细胞因子及参与机体免疫调节的重要功能。铁凋亡是多种疾病模型细胞程序性死亡的重要途径,如卒中、神经退行性变等。探索脂肪干细胞对铁超载的神经元是否具有保护作用及其具体机制成为提高脂肪干细胞的疗效的新靶点。【目的】阐明脂肪干细胞对铁超载的神经元的保护作用及具体机制。【方法】选取0.4μm直径的Transwell培养皿建立脂肪干细胞与原代皮层神经元的间接共培养体系。硫酸亚铁(Fe SO4)处理原代皮层神经元模拟脑出血后继发性铁离子超载的体外模型,MTT实验确定最佳Fe SO4浓度。根据实验目的将皮层神经元分为4组,正常对照组(Vehicle组)、ADSCs共培养空白组(ADSCs组)、亚铁离子处理组(Fe SO4组)、ADSCs治疗组(ADSCs+Fe SO4组)。流式细胞学Annexin V/PI双标,检测不同组别的神经元细胞的凋亡率。利用丙二醛(MDA)试剂盒测定脂质过氧化产物MDA的浓度。ELISA检测不同组别培养基中胰岛素样生长因子-1的含量。利用一氧化氮合酶试剂盒测定t NOS和i NOS的活性。Western-Blot技术测定皮层神经元中PI3K/Akt、Nrf2/HO-1、Bax/Bcl-2相关信号通路的蛋白表达水平。利用免疫荧光染色技术测定脂肪干细胞中HO-1表达水平。【结果】Fe SO4对皮层神经元的毒性作用呈浓度依赖性,8μM是最佳Fe SO4浓度。与Vehicle、ADSCs组相比,Fe SO4组神经元中的MDA含量、t NOS、i NOS的活性明显升高,而ADSCs+Fe SO4组MDA含量、t NOS、i NOS的活性显着低于Fe SO4组。ADSCs组及ADSCs+Fe SO4组IGF-1水平均显着高于Vehicle组及Fe SO4组。流式细胞学结果显示,Vehicle、ADSCs组细胞有少许细胞凋亡,凋亡率约16.9%左右,Fe SO4组神经元凋亡率明显上升,达27.6%,而ADSCs+Fe SO4组凋亡率下降至22.4%。WB结果显示,正常情况下,Vehicle、ADSCs组表达极低含量p-PI3K、Nrf2、HO-1,表达一定含量的Akt、p-Akt、Bax、Bcl2以发挥正常生理作用。Fe SO4组的神经元中p-PI3k、p-Akt、Bcl2表达量显着下降,Nrf2、HO-1表达显着升高。与Fe SO4组相比,ADSCs+Fe SO4组p-PI3k、p-Akt、Bcl2表达量显着升高而Nrf2、HO-1表达量进一步显着升高。上室ADSCs中,Fe SO4处理后HO-1表达量显着升高(*p<0.05或者**p<0.01)。【结论】脂肪干细胞与皮层神经元共培养可以降低Fe SO4引起的脂质过氧化产物的水平,减少神经元的凋亡,降低NOS的活性,下调炎症水平。具体机制可能是脂肪干细胞通过旁分泌IGF-1激活PI3K/Akt信号通路促进神经元存活,激活氧化应激通路Nrf2/HO-1发挥抗炎作用,激活线粒体凋亡途径Bax/Bcl-2抗凋亡相关蛋白的表达,减少神经元的凋亡。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
铁超载论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:Apelin是七次跨膜G蛋白偶联受体APJ的内源性配体,在心血管系统和相关疾病的发展中起着重要的生物学作用。实验室前期的研究结果表明,apelin-13具有促血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用,并且发现自噬途径参与apelin-13促VSMC增殖的过程。线粒体钙离子单向转运体(MCU)也是一种铁离子通道,阻断MCU通道可显着影响线粒体中铁的转运。铁超载是指全身器官中包括心脏、血管、肝脏和内分泌腺在内的铁离子过度沉积。线粒体铁超载会催化芬顿反应导致羟基自由基的产生并调节细胞增殖。本课题旨在探讨apelin-13对MCU、线粒体铁超载、线粒体活性氧和线粒体自噬的影响,并在前期研究的基础上探讨MCU依赖性线粒体铁超载诱导线粒体自噬介导apelin-13促HA-VSMCs增殖的分子机制,揭示apelin-13/APJ系统诱导VSMCs增殖的新作用机制为靶向APJ受体分子抗AS的新治疗靶标提供理论依据。方法:1.Western Blot检测HA-VSMCs中MCU,Drp1,PINK1,Parkin,VDAC1,Tom20,PCNA的表达;2.RNA干扰:干扰链SiRNA-Drp1,SiRNA-PINK1和SiRNA-Parkin抑制HA-VSMCs中Drp1,PINK1和Parkin的表达;3.流式细胞术检测HA-VSMCs中G1,S,G2/M的细胞百分比;4.透射电子显微镜术观察HA-VSMCs中线粒体自噬的形成;5.免疫荧光技术观察HA-VSMCs中线粒体与LC3的共定位;6.免疫组织化学观察人尸检动脉粥样硬化斑块血管组织与双肾双夹高血压大鼠血管组织中MCU,Drp1的表达;7.RPA红色荧光探针检测HA-VSMCs中的线粒体铁的含量;8.Mito-SOX红色荧光探针检测HA-VSMCs中线粒体ROS的产生;9.BCA蛋白质定量试剂盒检测HA-VSMCs中蛋白质的浓度。结果:1.与正常冠状动脉人的血管组织标本相比,动脉粥样硬化病人冠状动脉的血管组织标本中MCU、Drp1的表达增加,线粒体铁含量表达增加;与正常的大鼠主动脉血管组织标本相比,双肾双夹高血压大鼠主动脉血管组织标本中MCU、Drp1的表达增加,线粒体铁含量表达增加;2.Apelin-13浓度(0-1μM,24h)及时间(0-24h)依赖性促进HA-VSMCs中MCU的表达;APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13促HA-VSMCs中MCU的表达;3.Apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体铁超载:APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体铁超载;MCU抑制剂Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体铁超载;4.Apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体ROS的生成:APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体ROS的生成;枸橼酸铁负载铁剂FAC进一步提高apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体ROS的生成;反之,MCU抑制剂Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs线粒体ROS的生成;5.APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的Drp1的表达;MCU抑制剂Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的Drp1的表达;线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的Drp1的表达;6.透射电子显微镜术结果显示apelin-13能诱导HA-VSMCs中线粒体自噬的形成;线粒体分裂抑制剂Mdivi-1抑制由apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体自噬的形成;免疫荧光发现Apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体与LC3共定位,而Mdivi-1和SiRNA-Drp1减少apelin-13诱导HA-VSMCs中线粒体与LC3共定位;7.线粒体靶向抗氧化剂Mito-TEMPO抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的PINK1,Parkin,VDAC1,Tom20的表达;Mdivi-1和SiRNA-Drp1抑制apelin-13诱导HA-VSMCs中的PINK1,Parkin,VDAC1,Tom20的表达;8.Western blot发现APJ受体拮抗剂F13A抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;Ru360抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;Mito-TEMPO抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;Mdivi-1和SiRNA-Drp1抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖;SiRNA-PINK1和SiRNA-Parkin抑制apelin-13诱导HA-VSMCs增殖。结论:MCU依赖性线粒体铁超载诱导线粒体自噬介导apelin-13促HA-VSMCs增殖。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
铁超载论文参考文献
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