番茄溃疡病菌微滴式数字PCR检测方法的建立

番茄溃疡病菌微滴式数字PCR检测方法的建立

论文摘要

由Clavibacter michigarensis subsp.michiganernsis引起的番茄溃疡病是茄科作物生产中最具毁灭性的种传病害之一,被列为我国检疫性有害生物。带菌番茄种子是该病害的主要初侵染源,是病原菌远距离传播的最主要方式,因此,对该病原菌尤其是种子上该病原菌的准确检测鉴定是防止病害传播为害的关键。本研究根据番茄溃疡病菌pat-1基因序列,筛选设计了其特异性检测引物(CMM CF/CR)及探针(CMM CP),并在此基础上建立了相应的数字PCR检测技术。利用5株番茄溃疡病菌、18株同属其他菌株及5株其他属病原菌,对所建立的检测体系进行了测试,并采用人工接种及自然带菌番茄种子进行验证。测试结果显示,所建立的数字PCR检测方法可以特异性检测出番茄溃疡病菌,而其他近缘菌株的检测结果均为阴性;该方法对番茄溃疡病菌的检测下限达到3.8 CFU/mL,高于实时荧光PCR检测方法;3次重复试验拷贝数的相对标准偏差小于25%,证明实验数据可以较为精确的反应样品浓度,且结果重复性良好。此外,所建立的数字PCR检测方法在模拟带菌种子及自然种子样品上也得到了成功验证,该方法可以准确检测出所有带菌种子。总的来说,本研究所建立的番茄溃疡病菌数字PCR检测方法具有特异性好,灵敏度高,重复性好等优点,能够满足病害实际检测中的需求。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 王丽,周佩,田茜,孙现超,赵文军

关键词: 番茄溃疡病菌,数字,检测

来源: 中国植物病理学会2019年学术年会 2019-07-20

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 西南大学植物保护学院中国检验检疫科学研究院中国农业大学植物保护学院

分类号: S432.42

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.020395

页码: 380

总页数: 1

文件大小: 45k

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