陈立朝[1]2003年在《CRH通过PKA途径调节大鼠下丘脑CRHmRNA表达的研究》文中研究指明应激反应的主要特征是以下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamic- pituitary- adrenal axis,HPA)的激活为核心的生理和心理反应。HPA轴激活的中枢控制是十分复杂的，在这一系列神经内分泌调节过程中，下丘脑合成和释放的促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone ，CRH)起着关键的作用，它控制着HPA轴的兴奋水平。应激诱导的HPA激活及随后血浆促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone ，ACTH）及糖皮质激素（glucocorticoid ，GC）含量的升高均依赖于CRH。CRH除对垂体腺的影响外，在中枢神经系统（central nervous system ，CNS）中CRH可影响应激导致的行为、神经内分泌、自发反应等。1985年Ono提出下丘脑室旁核（paraventricular nucleus, PVN）存在CRH神经元超短正反馈理论，后来许多研究证实存在这一理论，但其机制尚未阐明。CRH如何激活下丘脑神经元,其调控机制如何,目前仍不十分清楚。本实验通过大鼠下丘脑脑片实验模型，运用免疫组织化学、Western blot、RT-PCR技术，观察CRH激活下丘脑 促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(corticotropin-releasing hormone type 1 receptor, CRH1R)后蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）信号通路的活性变化，及其与CRH信使核糖核酸（CRH messenger ribonucleic acid ,CRHmRNA）表达的关系，旨在阐明下丘脑CRH神经元超短正反馈理论信号传导通路调控机制。用培养的下丘脑脑片模型较系统的探讨了CRH对下丘脑神经元表达CRH的调节作用及相关信号转导机制，为调控创伤性应激反应提供理论和实验依据。本课题的主要结果和结论1.建立了大鼠下丘脑脑片培养实验模型。该模型具有：集中了在体和体外实验模型的优点，保留了实验模型的组织细胞特异性，重复性好，是研究严重创伤后应激反应较好的实验模型。2. CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA含量明显增加，运用CPl54526可显着抑制磷酸化 PKA的生成，而运用CRF9-41仅轻微抑制磷酸化 PKA的生成，提示CRH可通过下丘脑神经元CRHlR激活PKA信号通路。3.CRH可引起下丘脑脑片磷酸化CREB含量明显增加，运用CPl54526、H89可显着抑制磷酸化CREB的生成，而运用CRF9-41仅轻微抑制磷酸化CREB的生成，结合CRH可引起下丘脑神经元活化PKA生成增多，提示CRH可通过下丘脑神经元CRHlR激活PKA<WP=8>后可使CREB磷酸化含量增加，以调控下丘脑神经元转录活性。4.CRH可引起培养的下丘脑脑片CRHmRNA含量显着增加，运用CPl54526、H89可明显抑制CRHmRNA含量增加，而运用CRF9-41轻微抑制CRHmRNA含量增加，说明PKA信号通路在CRH通过与CRHlR结合而刺激下丘脑神经元引起其自身基因表达中起重要作用。表明CRH可通过PKA信号通路调节下丘脑神经元表达CRH。5. CRH刺激下丘脑脑片后下丘脑CRH和CRHlR含量明显增多，而CP-154526、H89可显着抑制CRH和CRHlR的增加，说明CRH刺激下丘脑脑片后增多的CRH与CRHlR结合后进一步引起下丘脑PVN神经元CRH和CRHlR表达增加。提示在严重创伤应激反应中，CRH通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH的表达的超短正反馈调节。
陈立朝, 许民辉, 周继红[2]2005年在《PKA信号通路调控大鼠下丘脑脑片CRHmRNA的表达研究》文中提出目的 探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的蛋白激酶A(PKA)信号调控机制。方法 通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Westernblot及逆转录多聚合酶链反应(RT PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRHmRNA表达的关系。结果 CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRHmRNA含量明显增加,而CP -154526、H89可显着抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRHmRNA含量的增加。结论 在严重创伤应激反应中, CRH主要通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRHmRNA表达的超短正反馈调节。
陈立朝, 许民辉, 周继红[3]2005年在《PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRHmRNA表达的研究》文中提出目的 探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制。方法 通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Westernblot及逆转录多聚合酶链反应(RT PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRHmRNA表达的关系。结果 CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRHmRNA含量明显增加,而CP 15 45 2 6、H89可显着抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRHmRNA含量的增加。结论 在下丘脑离体脑片培养条件下,CRH可通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRHmRNA的表达的超短正反馈调节。
陆建华[4]2002年在《海马NMDA受体对严重烫伤HPA轴兴奋性的影响及其机制研究》文中提出应激是机体在受到应激原刺激时作出的适应性综合反应。当有害的应激原(如严重创伤)作用强烈持久时，机体将出现过度应激，过度应激的最主要表现之一是下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)异常亢进。 HPA轴的异常亢进可导致机体免疫功能抑制，使感染易于扩散。近期的诸多研究表明，创伤后的免疫抑制可促进感染的发生，从而诱发系统性炎性反应综合症(SIRS)、多器官功能障碍综合症(MODS)等。另外，HPA轴的亢进还可能是创伤应激不良综合症、应激性溃疡等的发病原因。这些都说明，以HPA轴亢进为主要表现之一的过度应激导致机体稳态失恒，因此，调节HPA轴的兴奋性可适时适度地控制机体的应激反应、维持机体的稳态、改善机体免疫功能。设法弄清楚HPA轴过度兴奋的原因，并从此原因着手进行调控，无疑为创伤的救治提供了新的思路， 海马是控制应激时HPA轴兴奋性的主要脑区，因此，海马功能的改变会影响其神经冲动的传导从而影响HPA轴。海马功能的改变又与NMDA受体(NR)密切相关，因此，我们设想，严重创伤可能会导致海马NR活性发生改变，进而引起HPA轴兴奋性的异常改变。 基于以上设想，我们以大鼠背部30％TBSA Ⅲ度烫伤作为严重创伤过度应激模型，采用Cell-attached膜片钳、放射配基结合法、RT-PCR、原位杂交、RIA双抗体法、Western blot、免疫共沉淀+Western blot、海马内微量注射、高效液相色谱及反义核酸技术，研究了：1)严重烫伤后海马NR活性的变化特点，2)严重烫伤后海马NR活性的变化对HPA轴的影响，3)严重烫伤后海马NR活性的变化对HPA轴影响的机制，4)严重烫伤后海马NR活性增强的机制。主要研究结果及结论如下： 一、严重烫伤后海马NR活性变化特点 l．严重烫伤后 0．sh、lh、Zh、4h、sh、24 h、48h海马NR的亲和力显着增加，尤以烫伤后 Zh最为明显。最大结合量从 lh起亦显着增加，说明严重烫伤后海马NR活性显着增强。 2．通过膜片钳技术，直接观察到烫伤后备时相点海马单个NR通道的开放概率增加非常显着，尤以烫伤后Zh最为明显。开放时间常数在部分烫伤组织中亦有不同程度的增加，说明烫伤应激导致了NR通道持续激活。这与放射配基结合法检测的NR亲和力及最大结合量的变化相互印证。 二、严重烫伤后海马NR的变化对HPA轴的影响 l．30OTBSA Ill度烫伤后0．sh，大鼠的血皮质醇浓度即异常升高，烫伤后Zh达高峰，烫伤后二天仍显着高于正常对照组；下丘脑CRH转录水平的基因表达持续上升，烫伤后Zh达高峰。说明严重烫伤导致HPA轴持续过度亢进。本实验中HPA轴兴奋性的变化趋势与大鼠严重烫伤海马NR活性的变化趋势基本一致，初步提示严重烫伤后海马NR激活可能是HPA轴持续兴奋的重要原因。 2．海马内微量注射MK叱 6fig可明显降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度，注射MK七 12吃可进一步降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度，表明HPA轴的兴奋程度依赖于海马NR通道的激活程度，初步证明严重烫伤时海马NR的激活是HPA轴亢进的重要原因。 3．海马内微量注射ANRI 10nmol 可明显降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度；注射ANRI 20nmol可进一步降低烫伤后下丘脑CRHmRNA阳性神经元数及血皮质醇浓度。进一步证明海马NR介导了严重烫伤HPA轴的持续过度激活。 叁、严重烫伤后海马NR的变化对HPA轴影响的机制 1．与单纯烫伤大鼠相比，腹腔注射生理盐水未引起烫伤后血皮质醇浓度的显着变化，腹腔注射地塞米松使烫伤后的血皮质醇浓度有所降低，下 Vlll 降幅度为 8刀％，但并无统计学差异（P＞0刀5），这表明烫伤大鼠的负反馈 功能受到了损害。 2．烫伤后，海马 GR mRNA水平即显着下降，GR蛋白也显着下降， 说明背部严重烫伤可导致海马GR减少，且GR的减少是由于基因表达受 到抑制从而使其合成减少引起的。由于GR的改变将使得GC在海马水平 的负反馈受到影响，因此，严重烫伤后海马GR的表达下降是严重烫伤GC 的负反馈受到抑制的重要原因，从而也是HPA轴持续过度兴奋的重要原 因。 3．烫伤前腹腔注射NRtA抗剂MK801 3mg从g可以使烫伤后海马GR mRNA水平显着上升，注射 MK801 6mg几g使 GR mRNA水平进一步上升， 烫伤前使用生理盐水却没有这种作用，表明烫伤应激时GR的基因表达受 到NR的调节，NR引起HPA轴的亢进可能是通过下调海马GR从而影响 了GC在海马水平的负反馈引起的。 4．严重烫伤后海马 CAI区、CA3区以及齿状回都有大量 CRH mRNA 阳性神经元，转录整体水平较对照组显着增强，提示严重烫伤过度应激时 海马可能通过直接合成CRH，参与了严重烫伤后的HPA轴的亢进。烫伤 前腹腔注射NRtA抗剂MKE01 3mg从g可使CM mMA水平显着下降，
陈立朝, 许民辉, 周继红[5]2003年在《下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达及信号通路的研究进展》文中提出本文就下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达的影响因素、相关的信号通路作一综述。在生理状态下 ,大鼠促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体在下丘脑室旁核区的表达非常低 ,急、慢性应激、促肾上腺皮质激素释放激素、脂多糖促进下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达 ,而大剂量糖皮质激素抑制下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达。促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体是与G蛋白相耦联的跨膜结构的受体 ,第二信使为环腺苷一磷酸 ,后者激活蛋白激酶A信号途径 ,促肾上腺皮质激素释放激素的诸多作用都是通过此信号途径实现的。
王斌[6]2008年在《运动对HPA轴分泌、海马相关蛋白及信号分子作用的研究》文中研究说明研究目的:适宜运动使机体产生良好适应,根据应激适应理论,可以说应激是机体产生适应的基础。中枢神经系统的海马脑区是应激的敏感部位,应激则可能引致海马的损伤发生。应激过程中以肾上腺皮质激素增多为主要特征,海马中含有丰富的糖皮质激素受体,在神经元兴奋性双向调节、细胞凋亡、突触长时程增强及学习和记忆形成中均有重要作用,应激引起海马糖皮质激素受体变化,通过激素反应元件影响蛋白质合成、海马神经元兴奋性的改变等。海马内有丰富的谷氨酸能神经元,神经元释放兴奋性氨基酸,通过NMDA受体影响细胞膜对离子的通透性,尤其是钙离子的通透性,正常的NMDA受体活性和海马神经内的钙离子水平是海马学习和记忆的基础;在严重应激损伤时兴奋性氨基酸或NMOA受体活性加大,引起细胞内及线粒体内的钙离子超载,钙离子超载则引起氧化磷酸化脱偶联等效应,产生自由基,而自由基又会进一步引起组织的氧化损伤,即氧化应激。钙离子、活性氧则迅速启动神经的保护机制,如核因子kappa B、雌激素等。雌激素自身即具有抗氧化作用,是一种抗氧化剂;同时,雌激素通过非基因组(快速)和基因组机制(慢速)起到神经保护作用,并可能对HPA轴起到调节作用,应对机体的应激状态。本研究旨在通过游泳这一运动模式,以水环境为参照,观察环境及运动对海马功能相关指标及应激反应的HPA轴激素的影响,探讨应激对海马功能的影响,以及海马神经保护和对HPA轴的可能调节机制,为运动性中枢疲劳理论的发展提供依据。研究方法:研究选用雄性SD大鼠进行实验,分别观察急性(一次)运动、经过耐力训练过的大鼠进行急性运动的效应。实验设计几个不同的时间观测点,即运动15min、运动至力竭后即刻、运动至力竭后1hr、运动至力竭后24hr。相应的参照组大鼠以水环境暴露,也类似设立急性(一次)水环境及长期水环境,取样也设为相同的4个点。实验进行中使用两个独立的水池,耐力训练大鼠进行游泳的同时,参照组大鼠则同时浸于水中(自由),以尽量减少非实验施加因素的影响,如水温、激素的生物节律等,但参照组的水深仅为大鼠直立后达耳下缘左右(约15-20cm)。以本实验室创立的大鼠负重游泳乳酸阈强度模型建立的强度进行耐力训练和力竭性运动强度设定。测试大鼠的血红蛋白、力竭游泳能力及乳酸阈强度的提高为模型建立成功的考察指标。实验采用放射免疫法测定了大鼠部分激素含量,包括下丘脑中的促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质酮、雌二醇;血清中的促肾上腺皮质激素、皮质酮、睾酮。观察了海马CA1区神经元的细胞体的电镜超微结构。采用顺磁共振自旋捕获技术测定了海马CA1区羟自由基信号强度。采用western blot法测定了海马糖皮质激素受体(GR)、雌激素受体alpha(ERα)、核因子kappa B(NF-κB)、N-甲基-D-天门冬氨酸受体2A亚型(NMDAR2A)、钙调蛋白激酶Ⅱalpha亚型(CaMKⅡα)。研究结果:1、动物运动模型。每周6次,每次30min以乳酸阈强度90%负重游泳6周后,大鼠游泳到达力竭的时间显着延长(训练过的大鼠44.42±32.29min,未训练过的大鼠21.32±20.12min,p＜0.05);训练大鼠血红蛋白含量显着性高于未训练大鼠(训练过的大鼠146.08±7.35g/L,未训练过的大鼠134.50±8.33g/L,p＜0.05)。2、海马CA1区锥体细胞形态。急性、慢性水环境及急性、慢性运动作用均可能引起其超微结构的变化。其变化程度有所不同,均未见有明显的核固缩、核碎裂及核溶解等细胞凋亡的典型表现。急性水环境因素作用下,大鼠海马CA1区锥体细胞形态发性改变,如细胞外膜不清,细胞内细胞器也发生损伤,如核膜消失、线粒体空泡化现象等。从急性水环境作用时间看,急性水环境作用15min和作用后1hr,细胞的受损状况更为严重,而在急性环境因素后即刻和24hr受损则小于15min和1hr大鼠的情况。慢性水环境与急性影响结果类似。急性运动因素作用下,大鼠海马CA1区锥体细胞形态发性改变,细胞外膜和核膜的变形,内质网和线粒体肿胀等。急性运动作用后即刻和之后的1hr,细胞受损情况最为严重,之后的24hr,细胞形态已经基本正常化。慢性运动因素作用下,大鼠海马CA1区锥体细胞结构变形最大的是运动15min和运动后24hr,在运动后即刻及1hr,其受损状况反而相对来说较小。3、海马羟自由基。长期水环境影响的大鼠再施加急性水环境因素与未进行水预适应的大鼠施加急性水环境因素,以及耐力训练大鼠和未进行过耐力训练的大鼠进行急性力竭运动时,从各因素作用的总体看海马羟自由基信号强度无显着性差异,水环境和运动对海马羟自由基的影响具有同一性;但耐力训练大鼠力竭运动后即刻海马羟自由基强度显着性高于未训练大鼠运动后即刻大鼠,与之相对应的长期水环境大鼠在水环境作用后即刻与水预适应大鼠水环境后即刻比没有差异。4、激素。各组大鼠下丘脑CRH无显着性差异,但仍可见耐力训练过的大鼠在力竭后即刻下丘脑CRH均数高于未训练大鼠力竭运动后即刻(无显着性差异)。耐力运动大鼠下丘脑皮质酮整体上显着性高于长期水环境大鼠;训练和未训练过的大鼠在力竭性运动后即刻下丘脑皮质酮均显着性高于各自的运动15min大鼠;未训练过的大鼠运动后1hr下丘脑皮质酮就显着性低于运动后即刻,而耐力训练大鼠则依然保持较高的下丘脑皮质酮水平。各组大鼠血清ACTH无显着性差别。血清皮质酮,各组大鼠在水或运动因素作用后即刻显着低于15分时,因素作用后1hr显着高于即刻值。以所有大鼠下丘脑皮质酮含量与血清皮质酮浓度作相关分析发现,下丘脑皮质酮含量与血清皮质酮呈弱的负相关关系,R=-0.228,p＜0.05。下丘脑雌二醇,耐力训练大鼠和长期水环境大鼠均较一次水环境或一次运动大鼠高,但只有长期水环境大鼠与一次水环境大鼠比有显着性差异;一次水环境、长期水环境后急性水环境、一次运动和耐力训练大鼠急性运动后即刻、1hr和24hr均显着性高于各自15min,运动后直至24hr均处于高水平。一次水环境组大鼠血清睾酮显着性高于长期水环境、急性运动和耐力训练大鼠急性运动组。各组大鼠运动后24hr血清睾酮达最高值,差异具有显着性。5、海马相关信号蛋白含量。海马雌激素受体α水平,一次水环境、长期水环境和一次运动大鼠在相应作用因素后即刻均显着性高于15min时、以及之后的1hr及24hr,而耐力训练大鼠在运动后即刻是下降趋势,运动后24hr升高。耐力训练大鼠海马糖皮质激素受体在相同的采样时间点时均有低于其它各处理因素大鼠的趋势,但无显着性差异。海马NF-κB整体上各处理因素和采样时间点间无显着性差异,但一次水环境后即刻显着性低于一次水环境后1hr和24hr,并且显着性低于同样是即刻状态的长期水环境大鼠、一次运动大鼠和耐力训练大鼠;运动后24hr,耐力训练大鼠海马NF-κB显着性高于未训练大鼠;同时,未训练大鼠运动后即刻最高,而耐力训练大鼠则是运动后24hr最高。海马NMDAR2A含量,耐力训练大鼠整体上显着性高于一次运动大鼠,耐力训练大鼠力竭运动后即刻显着性高于长期水环境大鼠;耐力训练和未训练大鼠运动后即刻均高于各自的后1hr和24hr水平。CaMKⅡα水平,从整体看,一次急性运动与一次水环境大鼠存在显着性差异,长期水环境大鼠与一次水环境大鼠存在显着性差异,因素后24hr与因素作用后即刻和之后1hr有显着性差异;耐力训练大鼠运动后24hr水平显着性高于长期水环境24hr组和未训练大鼠运动力竭后24hr组。6、相关性分析。大鼠力竭游泳时间与下丘脑CRH和海马ERα相关,偏相关系数分别为0.573,p＜0.001:-0.584,p＜0.001。其它具有显着性的两变量pearson相关有:NF-κB与CaMKⅡα相关(r=0.253,p＜0.05),ERα与GR、下丘脑雌二醇、下丘脑皮质酮(r=0.428,p＜0.001;r=-0.250,p＜0.05;r=-0.219,p＜0.05),海马羟自由基信号强度与血清睾酮、血清皮质酮(r=0.232,p＜0.05;r=-0.443,p＜0.001),血清皮质酮与下丘脑皮质酮(r=-0.220,p＜0.05),下丘脑内皮质酮与CRH(r=0.214.p＜0.05)。结论:1)HPA轴激素相互调节中CRH和下丘脑皮质酮起重要作用,而非血清皮质酮;下丘脑应激增高(皮质酮增高),伴随雌二醇生成增多。下丘脑皮质酮和血清皮质酮含量呈负相关关系,尚需进一步研究。2)海马超微结构可因环境和游泳运动刺激发生改变,其变化可在不长的时间内恢复,可能不是损伤性变化,更可能是学习和记忆或适应过程中的一个阶段表现。3)海马对HPA轴的负反馈调节与海马的整体机能状况有关,海马ERα和羟自由基与HPA的负反馈调节有关。CaMKⅡα可能与HPA轴下游激素有关,并影响海马在应激时的机能。4)海马NF-κB可能起到的神经保护作用,在运动性疲劳发生时(本研究的力竭运动)并不具重要意义,其意义在于修复和恢复过程,这对于运动训练的适应机制的研究十分重要。5)海马ERα直接与运动能力有关,ERα含量越高,运动能力越低(可能是提供此直接证据的首次报道)。下丘脑CRH与运动能力正相关,CRH含量越高,运动能力越强。
张娇娇[7]2014年在《针刺调整下丘脑室旁核CRH相关神经元电活动的腧穴特异性研究》文中研究指明目的：1.研究针刺激活下丘脑室旁核CRH相关神经元电活动的穴位特异性，遴选出特异性穴位；2.以电刺激肾神经激活的下丘脑室旁核区特异分泌CRH相关神经元的放电情况为指标，明确针刺强度和该神经元被激活的量-效关系；3.明确针刺激活该神经元的神经信息传递通路。通过对以上问题的研究，进一步探讨针刺激活下丘脑室旁核参与应激反应神经元（CRH相关神经元）的调控机制及效应机制。对临床针灸调节机体内环境的平衡，增强对外界变化适应能力的选穴，提供可能有别于传统概念的、全新的指导性选穴原则，提高临床疗效。方法：实验用雄性成年SD大鼠，172只。采用神经电生理学方法，胞外记录下丘脑室旁核应激反应相关神经元电活动。1.将记录到的神经元单位电活动进行靶神经元鉴定：对热刺激增强、静脉注射氢化可的松抑制、睾酮轻微抑制、雌激素无反应的神经元即为下丘脑室旁核靶神经元；2.以电刺激肾神经使记录的靶神经元放电增加20%的刺激量为指标，观察分别针刺不同部位的33个穴位对下丘脑室旁核同步记录的43个参与应激反应靶神经元的激活效应及强度差异,遴选了特异性相关穴位，并分析了特异性相关穴位与所属经脉及脊髓神经节段支配的相关性；3.通过观察损毁脊髓后针刺特异性相关穴位，观察CRH相关神经元的电活动,判断针刺的应激效应是通过哪种传递途径将信息传导到下丘脑的，揭示穴位产生的效应与何种感觉和何类传入纤维有关。结果：1.本项研究在172只雄性SD大鼠下丘脑室旁核共记录到653个神经元单位电活动，实验从121个兴奋性神经元单位中选择了47个静脉注射氢化可的松，发现有43个神经元参与了应激反应，并能够被氢化可的松抑制，结合下丘脑CRH神经元的生理特性，这些神经元单位电活动被认为与CRH神经元电活动有相关性，为本项研究的靶神经元单位。2.以电刺激肾神经使记录的神经元放电增加20%的刺激量(电流强度为1mA)为阈刺激量，并以阈刺激量的不同倍数（0.5、1、2、3倍）的刺激量分别电针刺激肾俞穴（特异性相关穴位），观察到电针电流强度设定为2mA时，刺激肾俞穴激活的靶神经元放电增加20%，该刺激量被认为电针激活靶神经元的最佳刺激量。3.观察电针刺激的33个穴位，靶神经元电活动效应增加20%的穴位共有24个穴位，其激活效应的顺序为:肾俞膀胱经)、期门(肝经)、肝俞(膀胱经)>京门(胆经)、大椎(督脉)>日月(胆经)、章门(肝经)>耳甲（Auricular concha region,ACR）>阳陵泉(胆经)、腹哀(脾经)、水沟(督脉)、命门(督脉)>太冲(肝经)、内关(心包)、膻中(任脉)、天枢(胃经)、风池(胆经)、足叁里(胃经)、叁阴交(脾经)>神门（心经）、大横(脾经)、商曲(肾经)、外关(叁焦经)、中脘(任脉)，其中肾俞、肝俞、期门、京门、日月、章门、大椎及耳甲为特异性相关穴位；肝经、胆经、督脉为特异性相关经脉,膀胱经的相同神经节段效应较明显(主要是背俞穴效应)。4.实验选择了11个下丘脑室旁核CRH相关神经元，观察了损伤对侧脊髓背索（T4-T6），分别针刺肾俞、期门，对该神经元的激活效应较损伤前相对减弱(177.0834.12（n=8）,148.1621.32(n=7))；选择了10个下丘脑室旁核CRH相关神经元，观察了损伤对侧脊髓背外侧索（T4-T6），分别针刺肾俞、期门对该神经元的激活效应，（电活动为114.3512.06（n=9），105.1110.27（n=8））；选择了8个下丘脑室旁核CRH相关神经元，观察了横断脊髓（T4-T6）后，分别针刺肾俞、期门CRH相关神经元的激活效应（电活动为54.139.13（n=7），41.108.43（n=6））。结论：1.针刺能够激活下丘脑室旁核参与应激反应神经元（CRH相关神经元）电活动。2.针刺激活下丘脑室旁核CRH相关神经元具有穴位特异性，经脉特异性。不同部位相同经脉及不同经脉相同或相邻神经节段支配的穴位激活效应不同，提示针灸临床选穴既要考虑穴位所在经脉，又要参考穴位的神经节段支配。值得关注的是针刺对应激反应的调控相关经脉的局部穴位效应更明显。3.针刺激活CRH相关神经元的信息传递与脊髓背外侧索关系密切。背外侧索的上行纤维主要来自伤害性感受器的细纤维(细的有髓A纤维和无髓C纤维末梢)。
齐丛丛[8]2014年在《脱落酸通过下调促肾上腺皮质激素释放激素的表达介导抗抑郁作用》文中认为促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)被认为是下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的中枢驱动力,并且在应激反应和抑郁症中发挥着重要的作用。临床研究表明,过量的视黄酸(RA)与抑郁症的发病相关。脱落酸(ABA)和RA都是类胡萝卜素的衍生物,并且具有相似的化学结构。本实验意于验证ABA是否通过共享RA信号通路参与CRH活性的调节。我们的研究首次报道了在正常大鼠中,相对于大脑皮层和海马,下丘脑中ABA的含量最高。在急性应激条件下,伴随着血清中皮质酮水平和下丘脑中c-fos基因表达水平的升高,血清中ABA含量增加而下丘脑中ABA含量显着降低。此外,长期给药ABA大鼠的糖水摄入量显着增加,下丘脑中CRH和视黄酸受体(RARα)的mRNA表达水平显着下降。更为重要的是,ABA改善了慢性不可预见性应激模型(CUMS)大鼠,表现在升高了CUMS大鼠的糖水摄入量,增加了强迫游泳检测中大鼠的游泳时间,并且降低了下丘脑中CRH和RARα的表达水平。体外研究进一步证实在不同的神经细胞中ABA均下调CRH基因的表达。在BE(2)-C细胞中,ABA抑制了一系列视黄酸受体的表达,其中包括RARα,而RARα作为核受体可以直接调控CRH基因的转录。这些研究结果表明,ABA可能通过共享视黄酸信号通路下调CRH基因表达,在抑郁症的发病过程中发挥着重要的作用。在本实验中,我们发现正常人血清中ABA含量和CRH的水平成负相关性,并且这种负相关性在血清CRH水平高的抑郁病人中消失。ABA与CRH的负相关性在BE(2)-C细胞中也得到验证。同时,ABA抑制了视黄酸受体(RARa)的表达,而RARa可以被募集到CRH启动子上直接调节CRH的基因表达。此外,RARα的过表达和敲除实验结果表明RARα对CRH的表达调节是必须的。当哺乳动物体内的ABA受体蛋白羊毛硫氨酸合成酶类C蛋白2(LANCL2)基因表达沉默后,ABA对CRH的下调作用消失。有趣的是,LANCL2沉默导致CRHmRNA表达下调的同时,RRα的mRNA水平和蛋白水平的表达均下降,而当沉默RARα表达时,LANCL2的表达没有任何影响。这些结果提示我们,ABA对CRH mRNA表达的调节是通过LANCL2-RARα介导的。本实验还对长期给药ABA的青年大鼠对空间学习和记忆的能力进行了检测。ABA的药代动力学结果显示外源性ABA可以进入并广泛分布于大鼠脑中,而且ABA具有吸收快和代谢慢的特点。行为学检测结果显示ABA大鼠在Morris水迷宫中目标象限的停留时间和进入次数明显增加,而寻找目标象限所花费的延迟时间明显降低。此外,ABA大鼠进入Y-迷宫新臂的延迟时间降低,并伴随着进入叁个臂的总次数和总运动距离的增加。然而,在旷场试验和高架十字迷宫中,ABA处理的大鼠与对照组相比没有显着差异。这些结果表明,ABA可以改善青年大鼠长期空间记忆和探索活动能力。
陈小宁[9]2009年在《雌激素受体和视黄酸受体对促肾上腺皮质激素释放激素的调控》文中指出在抑郁症发病过程中,下丘脑-垂体-肾上腺轴的过度驱动和下丘脑室旁核(PVN)的促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)神经元的活性上调是抑郁症的重要特征。多种类固醇/甲状腺受体家族的成员参与了CRH基因的表达调控,例如糖皮质激素受体,雌激素受体和雄激素受体等。我们主要研究了雌激素受体和视黄酸受体对CRH基因的调控。1.雌激素受体对促肾上腺皮质激素释放激素的调控及其分子机制促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)在控制应激反应中起着重要的作用。我们的目标是确定雌激素受体对CRH基因的调控作用并对其内在机制进行分析。我们在人神经母细胞瘤细胞系BE(2)C中,研究了雌激素受体(estrogen receptor,ER)对其内源性CRHmRNA表达的调控。定量反转录-聚合酶链式反应显示,在雌激素存在的情况下,在BE(2)C细胞中过表达ERα或ERβ能使CRH的转录增加。染色质免疫共沉淀分析显示在雌激素的处理下ERα和ERβ都能与CRH启动子相结合。但是电泳迁移率分析表明两个CRH启动子区的半雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)并不能与ERs结合。为了阐明调控机制,我们采用了点突变实验和在CHO细胞系中的报告基因分析。我们发现当CRH启动子区的半雌激素反应元件和cAMP反应元件(CRE)突变后,ER介导的CRH启动子的激活也被降低。而且在两个半雌激素反应元件中,在-316位点的反应元件对ER诱导的CRH组成性的表达更有意义。总之,我们的结果确定了ERα和ERβ能够激活CRH基因的表达,证明了半雌激素反应元件和CRE在此激活作用中的重要性。2.视黄酸受体通过对促肾上腺皮质激素释放激素神经元的调控参与抑郁症的发病促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)被认为是应激反应的中枢驱动力并在抑郁症发病过程中起着关键作用。临床研究提示视黄酸(retinoic acid, RA)与抑郁症有关。我们首先对12例抑郁症患者和与之匹配的12例对照的下丘脑组织进行免疫荧光双标来分析其CRH和视黄酸受体α(retinoic acid receptor, RARα)的表达。然后在大鼠抑郁症模型中观察了RA信号通路中关键基因的表达。最后用体外实验研究了RARα对CRH基因表达的调控。我们发现RARα的表达与人下丘脑室旁核(PVN)CRH神经元共存。在抑郁症病人中,RARα免疫阳性和CRH-RARα共表达的神经元密度增加。CRH-RARα共表达的神经元占CRH神经元免疫阳性神经元的比例也增加。在大鼠下丘脑中,我们观察到RARα能与CRH启动子相结合。在抑郁症大鼠模型中,RA代谢和信号通路失调。最后,体外的研究表明RARα能够上调CRH基因的表达。这些结果提示RARα可能参与了体内CRH神经元活性的调控,而RA信号通路中关键蛋白的易感性可能为新抑郁症治疗策略提供了靶点。
富文俊[10]2009年在《逍遥散对慢性应激损伤大鼠HPA轴负反馈功能及GR、NR亚型调节机制的研究》文中研究说明1、研究目的慢性应激发生时,HPA轴兴奋性提高,促肾上腺皮质激素释放激素(Cortico-trophin releasing hormone,CRH)分泌增多,引起糖皮质激素水平升高,从而动员储能,适应应激反应。若机体长期处于应激状态HPA轴功能持续亢进,高皮质酮/醇血症将对大脑海马神经元细胞造成严重损伤,继发引起海马神经元内N-甲基-D-天门冬氨酸受体(NMDAR)过度激活及海马神经元内糖皮质激素受体(iGR)表达减少或其活性降低,引起HPA轴负反馈功能减弱,而这将进一步加重高皮质酮/醇血症,形成一恶性循环。因此慢性应激损伤的一个重要环节即为高皮质酮/醇血症,本论文即以此为切入点,通过地塞米松抑制试验(DEXT)检验慢性应激模型是否成功,用逍遥散和GR-受体阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其大脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA、海马神经元细胞内内糖皮质激素受体(iGR)及NR各亚型的表达状况,试图从NMDAR、GC/GR(iGR)、HPAA这一传导通路解释逍遥散对慢性应激的调控机理。2、研究方法复制慢性不可预知应激大鼠模型,运用地塞米松抑制试验加以验证,以糖皮质激素受体阻滞剂RU-38486及中药复方逍遥散干预,探讨逍遥散对慢性应激损伤大鼠的调控作用及机理:1)在前期试验基础上,复制慢性不可预计应激模型;2)取地塞米松抑制试验的大鼠血清,应用酶联免疫吸附剂测定(Enzyme LinkedImmunosorbnent Assay ELISA)检测其血清皮质酮水平;3)取慢性应激大鼠模型的各组大鼠脑部石蜡切片,以原位杂交法检测其下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotrophin releasing hormone,CRH)mRNA的表达水平;4)取慢性应激大鼠模型的各组大鼠脑部石蜡切片,以荧光免疫组化的方法检测其海马区糖皮质激素受体(intracellular GLucocorticoid receptor,iGR)的表达水平;5)取慢性应激大鼠模型的各组大鼠脑部石蜡切片,以荧光免疫组化的方法检测其海马区N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体部分亚型(NR1、NR2A、NR2B)的表达水平。3、研究结果1)在地塞米松抑制试验中,单纯慢性应激损伤组大鼠血清皮质酮水平未见明显下降,其地塞米松抑制试验呈阴性,GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的血清皮质酮水平明显下降,其地塞米松抑制试验呈阳性;2)慢性应激损伤模型组大鼠的下丘脑室旁核CRH mRNA表达明显增多,海马神经元细胞内糖皮质激素受体(iGR)阳性表达明显降低,海马区NR1、NR2A、NR2B阳性表达明显升高;3) GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的CRH mRNA阳性表达水平明显下降;4) GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的海马神经元细胞内糖皮质激素受体(iGR)阳性表达水平显着上升;5) GR受体阻滞剂RU-38486组与中药复方逍遥散组大鼠的海马区NR1、NR2A、NR2B阳性表达水平显着下降。4、研究结论根据本文的研究我们可以推出以下结论:经地塞米松抑制试验检验,证实本实验所采用的慢性应激大鼠模型是成功的;逍遥散可以显着下调慢性应激大鼠海马神经元细胞中的NR1、NR2A、NR2B的表达,促进其海马神经元细胞内糖皮质激素受体(iGR)的阳性表达增加,降低其高皮质酮血症,促使其下丘脑室旁核区CRH mRNA表达下调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠HPA轴负反馈功能的作用,起到缓减诸应激症状的疗效。
参考文献：
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[2]. PKA信号通路调控大鼠下丘脑脑片CRHmRNA的表达研究[J]. 陈立朝, 许民辉, 周继红. 中华神经外科疾病研究杂志. 2005
[3]. PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRHmRNA表达的研究[J]. 陈立朝, 许民辉, 周继红. 第叁军医大学学报. 2005
[4]. 海马NMDA受体对严重烫伤HPA轴兴奋性的影响及其机制研究[D]. 陆建华. 第叁军医大学. 2002
[5]. 下丘脑室旁核区促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体表达及信号通路的研究进展[J]. 陈立朝, 许民辉, 周继红. 创伤外科杂志. 2003
[6]. 运动对HPA轴分泌、海马相关蛋白及信号分子作用的研究[D]. 王斌. 华东师范大学. 2008
[7]. 针刺调整下丘脑室旁核CRH相关神经元电活动的腧穴特异性研究[D]. 张娇娇. 长春中医药大学. 2014
[8]. 脱落酸通过下调促肾上腺皮质激素释放激素的表达介导抗抑郁作用[D]. 齐丛丛. 中国科学技术大学. 2014
[9]. 雌激素受体和视黄酸受体对促肾上腺皮质激素释放激素的调控[D]. 陈小宁. 中国科学技术大学. 2009
[10]. 逍遥散对慢性应激损伤大鼠HPA轴负反馈功能及GR、NR亚型调节机制的研究[D]. 富文俊. 广州中医药大学. 2009
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