导读:本文包含了构建及鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪圆环病毒2型,羊驼,纳米抗体文库,抗体库容量
构建及鉴定论文文献综述
王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤[1]（2019）在《猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出为构建猪圆环病毒2型(PCV2)特异性纳米抗体文库,并对其库容和多样性进行鉴定分析,使用PCV2全病毒灭活疫苗免疫羊驼,经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,通过RT-PCR反转录合成cDNA;根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物,通过巢式PCR扩增羊驼单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)基因片段vhh,并将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,构建pCANTAB-vhh重组质粒;通过电穿孔法将重组质粒导入E. coli TG1获得抗PCV2特异性纳米抗体基因文库。文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数,并通过菌液PCR鉴定重组菌阳性率,计算抗体文库库容量;对PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,分析抗体文库多样性。结果显示,构建的PCV2特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为92.0%,库容量为2.75×1010CFU/m L;测序后序列比对分析结果表明,纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样性。本研究成功构建了PCV2特异性纳米抗体文库,且文库质量满足后续试验要求,为进一步获得针对PCV2抗原的纳米抗体奠定了基础。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2019年11期）
赵丹华,李玉华[2]（2019）在《带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建带有荧光素酶基因的乙型脑炎(简称乙脑)病毒感染性克隆,并通过体外拯救获得恢复病毒,用于乙脑病毒致病机理研究、病毒感染在小鼠体内的动态分布以及乙脑疫苗免疫效果评价的高通量方法建立。方法:应用反向遗传学、融合PCR以及无缝拼接等体外重组技术,将荧光素酶报告基因(F-LUC)插入到乙脑病毒SA14-14-2全长感染性克隆的5'非编码区与C蛋白编码区之间,线性化后体外转录为RNA并转染BHK_(21)细胞,在细胞感染和动物试验分别检测恢复病毒的拯救和F-LUC的表达情况。结果:成功构建了带有F-LUC报告基因的SA14-14-2乙脑病毒全长感染性克隆,并拯救获得了重组病毒。基因序列分析及细胞与动物水平均证明拯救的病毒可较高水平表达荧光素酶基因。结论:本研究构建出带有荧光素酶报告基因F-LUC的SA14-14-2感染性克隆,并拯救获得带有荧光素酶的重组乙脑病毒,为乙脑血清中和抗体的高通量筛选、病毒感染在小鼠体内的动态分布和致病机理研究奠定了基础。(本文来源于《中国药事》期刊2019年11期）
姬凯元,齐淑慧,刘博,蒋书东,范瑞文[3]（2019）在《黑色素瘤细胞单域抗体文库的构建及鉴定》一文中研究指出黑色素瘤作为一种多发于皮肤部位的恶性肿瘤,严重危害着动物和人们的健康。与传统抗体比较,单域抗体具有结构简单、分子量小、免疫原性弱等特点,使其在疾病的诊断及治疗方面具有广阔的应用空间。本研究以B16-F10细胞蛋白质为研究对象,通过反复冻融与超声破碎相结合的方式获得B16-F10蛋白质作为抗原,免疫成年雄性羊驼。采用噬菌体单域抗体展示技术,构建了质量优良的B16-F10细胞蛋白质单域抗体免疫文库,其库容为5.76×10~(10),VHH重组率为96%,文库丰度为3.00×10~(10)个/mL。该结果为研究黑色素瘤的生物学特性提供了新思路,同时也为后续筛选B16-F10单域抗体奠定了基础。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2019年11期）
陈风雷,胡佳慧,戴安娜,刘婉洋,屈玉杏[4]（2019）在《小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定》一文中研究指出针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10~7 TU/mL～10×10~7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显着抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%～90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年11期）
刘汉平[5]（2019）在《猪O型口蹄疫病毒样颗粒的构建及鉴定》一文中研究指出为开发猪O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒(VLPs)基因工程亚单位疫苗,试验参考GenBank中登录的FMDV毒株基因序列(登录号:JN998085),设计针对VP1、VP2、VP3和VP4 4个基因片段的特异性引物,以O型FMDV O/MYA98/XJ/2010毒株的cDNA序列为模板,对目的基因进行PCR扩增;将获得的VP3、VP1和VP4、VP2基因片段分别插入2个杆状病毒供体质粒(pFastBacDual)的p10和pH双元启动子中,构建pFBD-VP3-VP1和pFBD-VP4-VP2 2个重组转座质粒;将验证正确的2个重组转座质粒分别转化含有穿梭载体(Bacmid)的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得2个重组杆粒rBacmid-VP3-VP1和rBacmid-VP4-VP2,经验证正确后,对其进行扩增和提取,将其分别转染Sf9贴壁昆虫细胞,构建2个重组杆状病毒rvAc-VP3-VP1和rvAc-VP4-VP2;2个重组杆状病毒共同感染悬浮培养的Sf9昆虫细胞,利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞内对4个基因进行表达,目的蛋白通过间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE、Western blotting及透射电镜(EM)进行检测。结果显示,本研究成功构建2株分别表达FMDV VP1、VP2、VP3和VP4 4个结构蛋白的重组杆状病毒;特异性抗体检测发现,4个蛋白VP1～VP4均成功表达,且具有良好的特异性反应;4个蛋白在Sf9昆虫细胞内能够完成自我组装,形成与天然病毒结构相似的VLPs,直径大小在25～30 nm。本研究利用共感染表达方式在Sf9昆虫细胞内成功制备出FMDV病毒颗粒,为开发高效安全的FMDV基因工程亚单位疫苗开辟了一条新思路。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年11期）
花瞻,安静,王培刚[6]（2019）在《携带荧光素酶登革亚病毒颗粒的构建和鉴定》一文中研究指出目的拟将荧光素酶基因整合入登革病毒(DENV)亚病毒颗粒(RSPs)中,构建能用于抗体介导的感染增强(ADE)高通量筛选的研究工具。方法将荧光素酶基因luciferase插入DENV包膜蛋白基因prME的3′端,取代prME第二个跨膜区,构建prME-luc融合基因。用prME-luc融合基因转染293T细胞,在上清中检测携带荧光素酶的登革亚病毒颗粒(RSP-luc)。结果转染prME-luc的293T细胞可以将RSP-luc释放至培养上清中,共转染野生型prME能够提高RSP-luc的产量。Western-blot技术确认了RSP-luc中含有DENV包膜蛋白和荧光素酶形成的融合蛋白。RSP-luc易于制备并可通过超速离心分离纯化,且可通过测定荧光素酶活性快速定量。体外实验显示RSP-luc能够与Vero细胞、U937细胞以及小鼠腹腔巨噬细胞等DENV靶细胞结合,结合过程可被受体类似物硫酸肝素竞争性抑制,也可被DENV特异性抗体4E11增强。结论 RSP-luc能够模拟DENV感染过程,有望成为深入研究DENV与宿主相互作用及ADE发生机制的有效工具。(本文来源于《中国热带医学》期刊2019年11期）
黄珊,王亚利,王中卫,白明华,郭亚[7]（2019）在《基于调控网络构建的食管鳞状细胞癌放疗抵抗核心miRNA/mRNA鉴定》一文中研究指出目的基于食管鳞状细胞癌肿瘤组织RNA表达情况构建放疗抵抗miRNA-mRNA网络,鉴定并验证放疗抵抗核心miRNA及mRNA。方法癌症基因图谱(TCGA)数据库选取行放疗的食管鳞状细胞癌患者,R语言edgeR包对比获得放疗抵抗组肿瘤组织差异表达mRNA(DE mRNA)和miRNA(DE miRNA)。miRWalk 3. 0预测DE miRNA的靶mRNA,Cytoscape绘制放疗抵抗miRNA-mRNA调控网络。采用MMC法分析获得核心miRNA及mRNA,实时定量PCR在放射抵抗癌细胞中进行验证。结果共获得548个DE mRNA和5个DE miRNA,成功构建放疗抵抗miRNA-mRNA调控网络,分析后最终获得4个核心miRNA(miR-1293、miR-873、miR-375及miR-1468)和5个核心mRNA(ZDHHC22、IGFBP5、ADAM23、NTNG1和DCC)。细胞学验证显示miR-1293、miR-375、IGFBP5、ADAM23在食管鳞状细胞癌放疗抵抗细胞表达具有明显差异(P <0. 05)。结论该研究通过miRNA-mRNA调控网络构建,鉴定食管鳞状细胞癌放疗抵抗核心miRNA和mRNA,为逆转放疗抵抗提供潜在靶点。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2019年11期）
王明湖,张孝天,吴国林,蒋琪,施勇烽[8]（2019）在《SSR标记在宁波地区水稻品种DNA指纹图谱构建及纯度鉴定中的应用》一文中研究指出利用农业行业标准NY/T-1433-2007、NY/T-1433-2014中推荐的53对SSR引物,对宁波地区34个水稻品种进行DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析。53对引物在研究材料中共获得183个等位基因,每对引物得到的等位基因数为1～7个,平均每对引物可获得3.5个等位基因。遗传相似性和聚类分析结果表明,34份水稻品种在遗传相似系数为0.5处可分为籼粳两个类群,其中,甬优系列籼粳杂交组合、6个常规粳稻及3个糯稻归为粳稻类群,6个常规籼稻和5个杂交籼稻归为籼稻类群。用RM590和RM3331对19个甬优杂交稻系列品种进行100粒种子的纯度鉴定,仅甬优2640和甬优50检测到1个单株的混杂。结果为SSR标记在宁波水稻品种的纯度和真伪鉴定方面的应用提供了一定的技术支撑。(本文来源于《中国稻米》期刊2019年06期）
袁园,张愉,张丽华,范文胜,韦天超[9]（2019）在《鸡传染性支气管炎病毒E蛋白真核表达载体的构建及其产物抗原性的鉴定》一文中研究指出以鸡传染性支气管炎病毒(IBV)GX-YL5毒株为模板,PCR扩增其E基因并克隆至融合有His标签的杆状病毒转移载体pFastBac~(TM)/HBM-TOPO,构建重组转移载体pFastBac~(TM)/HBM-TOPO-E,转化DH10Bac~(TM)感受态,经同源重组后转染Sf9细胞,并应用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot进行鉴定。IFA结果表明融合了E蛋白的表达产物可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,在感染的细胞膜表面呈现强的黄绿色荧光;Western blot结果显示融合了E蛋白的表达产物既可被抗His标签的鼠单克隆抗体识别,也可被GX-YL5株的多抗血清特异性识别,且二者的目的条带大小均为16 ku。说明本研究已成功在Sf9细胞中表达了E蛋白,且表达产物抗原性良好,为进一步探讨IBV E蛋白的生物学功能和构建病毒样颗粒提供了基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年11期）
李佳秀,张春岭,刘慧,陈大磊,刘杰超[10]（2019）在《蓝莓汁有机酸高效液相色谱指纹图谱构建及其在掺假鉴定中的应用》一文中研究指出根据蓝莓汁中有机酸的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析方法,利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(V2.0)"建立蓝莓汁的有机酸HPLC指纹图谱,并通过相似度评价、主成分分析和聚类分析,对模拟掺假低价果汁(梨汁、苹果汁、杏汁和桃汁)和外源柠檬酸的蓝莓汁进行鉴别。结果表明:10个蓝莓汁样品的有机酸HPLC指纹图谱之间相似度均在0.950以上,与对照指纹图谱的相似度均在0.978以上,不同品种、不同产地的蓝莓果汁的指纹图谱具有很好的一致性,蓝莓果汁中添加其他果汁或柠檬酸可导致相似度降低;结合主成分分析和聚类分析等模式识别方法,可以实现对蓝莓汁与掺假低价果汁(梨汁、苹果汁、杏汁和桃汁)及外源柠檬酸样品的区分,而且掺假量越大,识别效果越好,而相似度评价仅能识别掺加量较高的样品。有机酸HPLC指纹图谱结合化学计量学分析,对于掺假蓝莓果汁具有较好的区分效果,可用于蓝莓汁掺假鉴定和质量控制。(本文来源于《食品研究与开发》期刊2019年21期）
构建及鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:构建带有荧光素酶基因的乙型脑炎(简称乙脑)病毒感染性克隆,并通过体外拯救获得恢复病毒,用于乙脑病毒致病机理研究、病毒感染在小鼠体内的动态分布以及乙脑疫苗免疫效果评价的高通量方法建立。方法:应用反向遗传学、融合PCR以及无缝拼接等体外重组技术,将荧光素酶报告基因(F-LUC)插入到乙脑病毒SA14-14-2全长感染性克隆的5'非编码区与C蛋白编码区之间,线性化后体外转录为RNA并转染BHK_(21)细胞,在细胞感染和动物试验分别检测恢复病毒的拯救和F-LUC的表达情况。结果:成功构建了带有F-LUC报告基因的SA14-14-2乙脑病毒全长感染性克隆,并拯救获得了重组病毒。基因序列分析及细胞与动物水平均证明拯救的病毒可较高水平表达荧光素酶基因。结论:本研究构建出带有荧光素酶报告基因F-LUC的SA14-14-2感染性克隆,并拯救获得带有荧光素酶的重组乙脑病毒,为乙脑血清中和抗体的高通量筛选、病毒感染在小鼠体内的动态分布和致病机理研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
构建及鉴定论文参考文献
[1].王长江,曲光刚,武曰星,管宇,魏凤.猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定[J].中国兽药杂志.2019
[2].赵丹华,李玉华.带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定[J].中国药事.2019
[3].姬凯元,齐淑慧,刘博,蒋书东,范瑞文.黑色素瘤细胞单域抗体文库的构建及鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报.2019
[4].陈风雷,胡佳慧,戴安娜,刘婉洋,屈玉杏.小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定[J].动物医学进展.2019
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[10].李佳秀,张春岭,刘慧,陈大磊,刘杰超.蓝莓汁有机酸高效液相色谱指纹图谱构建及其在掺假鉴定中的应用[J].食品研究与开发.2019