保加利亚乳杆菌细胞壁蛋白酶基因克隆及结构分析

保加利亚乳杆菌细胞壁蛋白酶基因克隆及结构分析

论文摘要

本文以保加利亚乳杆菌基因组为模板,利用PCR的方法扩增细胞壁蛋白酶基因(prtB),并且利用GeneBank数据库和生物软件对prtB进行对比和生物信息学分析,预测基因片段的相似性、表达出蛋白酶的蛋白大小、二级结构和膜结合性等性质。结果表明,测序后比对发现扩增片段与模板保加利亚乳杆菌prtB相似性为100%,证明基因片段未发生突变; prtB与德氏乳杆菌德氏亚种基因相似性为96%,与德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii)基因相似性为82%,具有一定的保守性和特异性。prtB基因G+C含量为47.49%,A+T含量为52.51%,编码1831个氨基酸,分子量为3338.7 kD,将此蛋白命名为PrtB,等电点pI为8.76。保加利亚乳杆菌的PrtB为亲水性稳定蛋白,总平均亲水性为-0.583,有28个Ser、9个Thr和25个Tyr可能成为蛋白激酶磷酸化的作用位点,该蛋白为细胞外蛋白,其二级结构以不规则卷曲为主,其值为55.11%,α-螺旋和β-折叠仅占21.30%和23.59%。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与仪器
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 基因组提取
  •     1.2.2 PCR扩增
  •     1.2.3 目的条带回收
  •     1.2.4 重组大肠杆菌的构建
  •     1.2.5 细胞壁蛋白酶的提取及验证
  •       1.2.5. 1 细胞壁蛋白酶提取
  •       1.2.5. 2 SDS-PAGE蛋白电泳
  •   1.3 数据处理
  • 2 结果与分析
  •   2.1 测序及比对结果
  •   2.2 生物信息学分析
  •     2.2.1 一级结构分析
  •     2.2.2 二级结构和功能分析
  •       2.2.2. 1 疏水性和稳定性分析
  •       2.2.2. 2 磷酸化位点分析
  •     2.2.3 跨膜区分析
  •     2.2.4 二级结构预测
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张妍,肖明,张爽,谢凤英,张兰威

    关键词: 保加利亚乳杆菌,细胞壁蛋白酶,基因克隆,结构分析

    来源: 食品工业科技 2019年20期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 东北农业大学食品学院,中国海洋大学食品科学与工程学院

    基金: 国家自然科学基金青年项目(31601493),中国博士后科学基金项目(2018M631901)

    分类号: Q78

    DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.20.018

    页码: 107-111+119

    总页数: 6

    文件大小: 1442K

    下载量: 148

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