发酵乳杆菌多铜氧化酶的异源表达及酶学性质

论文摘要

生物胺是一种存在于发酵食品中的含氮小分子有机化合物,过量摄入可能引起过敏或其他不良反应。利用酶法降解是减少发酵食品中生物胺含量从而保障食品安全的有效方法之一。文中成功克隆了来源于发酵乳杆菌的多铜氧化酶基因,在大肠杆菌中表达的酶活水平为484 U/L。通过镍柱亲和层析方法获得了此多铜氧化酶的纯酶。该多铜氧化酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为3.5,其Km为1.3 mmol/L,Vmax为7.67×10-2 mmol/（L·min）。对酶的应用特性研究表明,来源于发酵乳杆菌的多铜氧化酶对18%（W/F）NaCl有一定的耐受性,并可降解包括色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺和亚精胺在内的7种生物胺。其中它对组胺和酪胺的降解能力最高,分别为51.6%和40.9%。此外,该酶对酱油中的生物胺也有普遍降解作用,使用较低酶量（500 U/L）时,对酱油中总胺的降解率达到10.6%。多铜氧化酶具备降解发酵食品中生物胺的潜力,为进一步实现这类食品酶的实际应用奠定基础。

论文目录

1 材料与方法

1.1 菌株与质粒

1.2 试剂及仪器

1.3 产生物胺降解酶菌株的筛选

1.4 多铜氧化酶的克隆表达与纯化

1.4.1 表达多铜氧化酶重组菌的构建

1.4.2 重组多铜氧化酶的表达与纯化

1.5 多铜氧化酶活力测定

1.6 重组多铜氧化酶酶学性质研究

1.6.1 重组酶的最适反应温度及pH

1.6.2 金属离子和盐对重组多铜氧化酶酶活的影响

1.6.3 酶反应动力学参数测定

1.6.4 重组多铜氧化酶对单个生物胺的降解能力分析

1.7 重组多铜氧化酶对混合生物胺的降解

2 结果与分析

2.1 降生物胺菌株的选择

2.2 多铜氧化酶的异源表达与纯化

2.3 MCO的酶学性质研究

2.3.1 多铜氧化酶的最适反应pH及温度

2.3.2 金属离子和盐对多铜氧化酶酶活的影响

2.3.3 多铜氧化酶反应动力学参数测定

2.4 多铜氧化酶对单个生物胺的降解能力

2.5 多铜氧化酶降解生物胺特性研究

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐洁,方芳

关键词: 多铜氧化酶,生物胺,克隆表达,酶学性质,发酵乳杆菌

来源: 生物工程学报 2019年07期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业,轻工业手工业

单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学食品科学与技术国家重点实验室

基金: 国家重点研发计划项目(No.2018YFC1604102),国家自然科学基金(No.31771955),国家轻工技术与工程一流学科自主课题(No.LITE2018-08)资助~~

分类号: TQ925;TS201.2

DOI: 10.13345/j.cjb.180531

页码: 1286-1294

总页数: 9

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发酵乳杆菌多铜氧化酶的异源表达及酶学性质

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